Плазмиды pBR рестрикционная карта

После выявления рекомбинантных клонов, содержащих гены целлюлаз, проводят накопление рекомбинантной ДНК и составляют ее рестрикционную карту, идентифицируя положения различных сайтов рестрикции и путем делеционного анализа (получая дочерние плазмиды с вставками меньшг[ размера) уточняя положение и размер нужного гена [c.104]

Космидные векторы — плазмиды, несущие os-последователь-ности, распознаваемые компонентами системы упаковки фага X [1], представляют собой удобный инструмент для клонирования и анализа больших фрагментов геномов, картирования хромосом и клонирования генов, размер которых превышает 20 т. п. н. Хотя в настоящее время разработаны приемы, позволяющие конструировать космидные клоны и оперировать с космидными библиотеками, все же неизбел но возникают трудности при получении и анализе больших библиотек, необходимых для клонирования генома млекопитающих в частности, вызывает затруднение введение специфических модификаций во вставки в тех случаях, когда их нельзя прямо увязать с характеристиками рестрикционной карты. Эти трудности могут быть весьма существенными. Во многих случаях для их преодоления используются методы генетики бактерий, позволяющие упростить илп облегчить решение этих задач. [c.74]

Рис. 31. Рестрикционная карта вектора широкого круга хозяев, сконструированного на основе плазмиды Н5Р1010 (по Ю. Д. Цыганкову и А. Ю. Чисто-сердову, 1986)

Очень полезно, а иногда и просто необходимо иметь рестрикционную карту такой клонированной вставки ДНК. Расположение сайтов рестрикции, особенно тех, что встречаются лишь 1—2 раза во всей плазмиде, можно определить при помощи стандартных методик рестрикционного картирования [24]. Для обоих типов одноцепочечных зондов необходимо иметь единичный сайт рестрикции в участке тестируемой ДНК, дистальном по отношению к сайту связывания с РНК-полимеразой в случае РНК-зондов (см. разд. 5.1) или с олигонуклеотидами в случае ДНК-зондов (см. разд. 6.3 и рис. 10). После реассоциации одноцепочечного меченого ДНК-зонда с тестируемой ДНК может возникнуть необходимость расщепить гибридную последовательность ДНК на 2—3 фрагмента с оптимальной для ДГГЭ длиной. В этом случае надо использовать сайты рестрикции, имеющиеся в тестируемом фрагменте. [c.141]

Смотреть страницы где упоминается термин Плазмиды pBR рестрикционная карта: [c.324] [c.58] [c.140] [c.233] [c.144] [c.109] [c.170] [c.109] [c.170] [c.56] [c.72] [c.318] [c.53] [c.86] [c.87] [c.91] [c.124] [c.216] [c.248] [c.276] [c.277] [c.213]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология