Векторы сконструированные на основе плазмиды ol

Чтобы иметь возможность клонировать целый ген, донорную ДНК расщепляют лишь частично. При этом получаются фрагменты разной длины, из которых затем создают геномную библиотеку. Для клонирования крупных фрагментов ДНК были сконструированы векторы на основе бактериофагов X и Р1, а также плазмиды Р. [c.78]

Несмотря на все эти сложности было сконструировано несколько векторов для растительных клеток. Все векторы на основе Ti-плазмид организованы сходным образом и имеют следующие элементы. [c.377]

Генетические способы отбора требуют значительно меньших затрат труда, чем методы скрининга, что позволило разработать новые подходы, позволяющие проводить генетическую селекцию клонов, содержащих последовательности, гомологичные любой желаемой последовательности-зонду. Это дало возможность расширить применение этого метода, распространив его на задачи, обычно решаемые с помощью более трудоемких (и часто менее специфичных) методов скрининга. В общих чертах в основе всех этих подходов лежит следующее обстоятельство хотя в случае большинства специфических эукариотических последовательностей нельзя обеспечить генетическую селекцию в клетках Е. соИ, можно сконструировать пары векторов, позволяющие селектировать продукты гомологичной рекомбинации, обусловленной гомологией последовательностей между клонами. Такая селекция основана на том факте, что процессы, подобные репликации ДНК, транскрипции, мобилизации плазмид или упаковке ДНК в фаговые частицы, могут происходить только по is-схеме в отношении соответствующего регуляторного элемента (области начала репликации, промотора, сигнала мобилизации или упаковки). Чтобы исключить рекомбинацию между векторными последовательностями, нужно подбирать векторные пары, не обладающие взаимной гомологией (или в случае рекомбинации фагов без взаимной гомологии в пределах той области, которая определяется маркерами, используемыми для селекции). Соблюдение этого главного принципа лежит в основе и скрининга фаговых клонов с использованием рекомбинации между [c.77]

Векторы на основе бактериофага X не очень пригодны для получения больших количеств белковых молекул. Чтобы решить эту проблему, сконструировали такой вектор, в котором ДНК Н-и L-цепей встраиваются в сайт, фланкированный плазмидной ДНК. Такую плазмиду, содержащую ДНК Н- и L-цепи, можно вырезать из вектора и трансформировать ею Е. oli (рис. 10.12). Являясь частью плазмиды, ДНК Fv-фрагментов будет многократно реплицироваться в клетках Е. соИ с образованием большого количества продукта, который можно использовать как в диагностическгк, так и в терапевтических целях. [c.219]

JOT две системы конъюгации — первая для промежуточных векторов на основе репликона olEI, используемых в сочетании с векторами коинтегративиого типа, и вторая для репликона rK2, на основе которого сконструированы многие бинарные векторы. Для обеспечения функций мобилизации (mob) и переноса ira), действующих в транс-положении, используют плазмиды-помощники конъюгации ( хелперные плазмиды), специфичные для репликонов обоих типов, либо на отдельных реп-ликонах, либо интегрированные с хромосомой в специальных хозяйских штаммах агробактерий [36]. Для того чтобы система конъюгации функционировала, клонирующие векторы должны содержать специфичное начало переноса ( ориджин — опТ) и сайт активации bom), на которые действуют продукты генов tra и mob. [c.73]

Наиболее подходящие кандидаты на роль векторов — естественные репликоны небольших размеров ДНК плазмид и вирусов (в том числе и фагов), но непосредственно в этом качестве их используют ре 1КО. Обычно их предварительно модифицируют или комбинируют их части для того чтобы они отвечали определенным требованиям. Самые распространенные плазмидные векторы клеток Е. oli — плазмида pBR322 и ее специализированные производные. Для этих же клеток сконструированы фаговые векторы на основе ДНК фага X и нитевидных фагов. Разработаны векторы (космиды), позволяющие отбирать рекДНК путе г их упаковки in vitro в головки фага X Создаются векторы [c.188]

Следующее поколение плазмидных векторов, первыми представителями которого являются плазмиды pSP64 и pSP65, считать отдельным поколением несколько трудно по причине не очень значительного усовершенствования векторов предыдущего поколения, на основе которых они и были сконструированы. Однако тот факт, что практически все векторы общего назначения следующих поколений также содержат эти небольшие участки промоторных областей бактериофагов SP6, ТЗ или Т7, то их все же можно отнести к четвертому поколению. [c.226]

Удобные векторы бьши сконструированы на основе фага М13 (разд. 5.3), представителя группы так называемых Ff- (т.е. F-специфичных нитчатых) фагов. Эти фаги инфицируют только те клетки Е. соИ, которые несут половой фактор, называемый F-фак-тором (см. введение к ч. II). Поэтому хозяином для фага М13 должен быть штамм F"", каким является штамм 71-18. У Е. соИ 71-18 /u -оперон делетирован ijS la -pro]) из геномной ДНК, но он содержится в F-плазмиде (F ас). Для облегчения работы с этим штаммом F /u -плазмиду маркируют делецией (AM 15), соответствующей N-концу р-галактоз и да-зы. Голубые бляшки, указывающие на присутствие активной -галактозидазы, обнаруживаются на агаре с Xgal только в том случае, если вектор М13 содержит область (la Za) /o -оперона, отсутствующую в F la . Каждый из двух геномов (F la [ДМ 15] и М13 la Za) детерминирует свою часть молекулы -галактозидазы, и в результате их взаимодействия внутри клетки образуется активная -галактозидаза. [c.229]

Смотреть страницы где упоминается термин Векторы сконструированные на основе плазмиды ol: [c.165] [c.167] [c.198] [c.296] [c.278] [c.282] [c.425] [c.266] [c.124] [c.126] [c.440] [c.80] [c.87] [c.277] [c.223] [c.245] [c.248] [c.251] [c.277] [c.6] [c.249] [c.249] [c.252]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология