Присоединение красителей к агарозе

Окрашенные адсорбенты характеризуются тремя параметрами 1) природой матрицы, 2) структурой красителя и 3) степенью модификации красителя. Рассматривая эти параметры по порядку, начнем с матрицы. Так же как и аффинные адсорбенты, она должна иметь открытую пористую структуру, для того чтобы крупные молекулы белка могли проникнуть внутрь частиц. Колонка, заполненная адсорбентом, должна иметь достаточную скорость потока. Желательно, чтобы в немодифицированном состоянии адсорбент был инертным. Хотя для специальных целей используется целый ряд различных носителей, наибольшее распространение получили гели агарозы, не имеющие каких-либо недостатков. Применяются также и декстрановые гели (сефадексы), но, для того чтобы белки легко проникали в них, они должны обладать очень рыхлой структурой. Такие гели, как сефадексы 0-150 и 0-200, очень тонкодисперсны и потому имеют плохие характеристики потока. Агарозы более пористы, но поскольку присоединение красителя лучше всего идет при температуре выше 40 °С, а в этих условиях агароза плавится, то для адсорбентов на основе обыкновенных гранул агарозы характерна относительно низкая степень модификации. Наибольшее применение находят агарозы, в которых, поперечные сшивки образованы эпихлоргид-рином, 2,3-дибромпропанолом или акриламидом. Такие имеющиеся в продаже продукты, как сефарозы СЬ-4В и СЬ-6В, се-факрил 5-300, ультрагель и биогель А, представляют собой материалы, пригодные для получения окрашенных адсорбентов некоторые из них выдерживают нагревание до 100 °С. [c.167]

Связывание голубого декстрана с агарозой — это чрезвычайно сложный процесс. Сам краситель достаточно реакционноспособен и может присоединяться непосредственно к неактиви--рованной агарозе. Дело в том, что этот краситель, так же как и другие, описанные далее, был разработан для окрашивания биологических полимеров (шерсть, хлопок). Красители присоединяются к ним через триазинилхлоридную группу в слабощелочной среде (рис. 4.46). Агароза имеет много реакционноспособных гидроксильных групп, и прямое присоединение к ней красителя позволяет получить ряд замещенных адсорбентов с различной концентрацией красителя, обычно до 5 мкмоль "СМ (набухший гель). Емкость этих адсорбентов для белков в 10— 20 раз превышает емкость истинных аффинных адсорбентов для низкомолекулярных белков она составляет 20—30 МГ СМ , но по мере увеличения размеров белковых молекул снижается [c.165]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология