Декстрановые гели

Для гель-хроматографии применяют в зависимости от целей гидрофильные и гидрофобные сорбенты. В качестве гидрофильных сорбентов применяют декстрановые гели (сефадексы и моя-селекты), полиакриламидные гели (биогелн), оксиалкилметак-рилатные гели (сфероны) и т. д. Сефадексы получают из декстрана [c.237]

Предварительное фракционирование с помощью полиакриламидного геля дает такие же результаты, как и гель-фильтрация на сефадексе. В отличие от природного декстранового геля, каким является сефадекс, полиакриламидный гель представляет собой гель синтетического полимера, обладающий чрезвычайно малыми абсорбционными свойствами. Поэтому разделение на полиакриламидном геле можно провести практически без потерь фракционируемого материала. Молекулярный вес фракционируемых веществ также очень существен для разделения на полиакриламидном геле. Чем ниже молекулярный вес компонентов разделяемой смеси, тем меньше индекс биогеля, который целесообразно использовать для фракционирования. [c.228]

Декстрановые гели широко применяются для разделения, очистки и идентификации различных органических соединений методом гель-хроматографии Наиболее распространены Ь гидрофильные декстрановые гели, сшитые эпихлоргидрином (гели типа Сефадекс ). Мы проверили и уточнили условия получения подобных гелей. [c.56]

Ассортимент гелей в настоящее время широк это декстрановые гели (сефадекс), полиакриламидные гели, оксиалкилметакрилатные гели, гели агарозы (полисахариды из агар-агара) и др. [c.361]

Здесь дан лишь краткий обзор свойств и возможностей применения важнейших сорбентов, большее внимание следует уделить применению молекулярных сит и декстрановых гелей, приобретающих в последние годы все большее значение. [c.349]

Электрофорез использовали в основном для подтверждения однородности фракций выделенных полисахаридов, а также в экспериментах по фракционированию в щелочном растворе полиоз из еловой холоцеллюлозы [67]. Этот метод, а также гель-проникающая хроматография на полиакриламиде не обеспечили успеха при фракционировании. Гель-проникающая хроматография на декстрановых гелях дала хорошие результаты при разделении смесей полиоз, [c.35]

И. X. примен. для разделения фенолов и карбоновых к-т (на анионитах), аминосахаров, нуклеотидов, нуклеозидов, пуриновых, пиримидиновых и др. оснований (на сульфо-катионитах). Белки, нуклеиновые к-ты и др. высокомолекулярные соед. разделяют с помощью агарозных и декстрановых гелей и производных целлюлозы (напр., диэтиламиноцеллюлозы, карбоксиметилцеллюлозы). Большое значение имеет автоматич. анализ смесей прир. аминокислот на мелкодисперсных грапулиров. сульфока-тионитах. [c.226]

Декстрановые гели (сефадексы), полиакриламидные гели (биогель Р), агарозные гели (сефарозы, биогель А), агар, пористые стекла [c.68]

Декстрановые гели — сефадексы............. [c.55]

Декстрановые гели — сефадексы (табл. на стр. 58) [c.55]

Ионообменные свойства декстрановых гелей (№ 1—15) проявляются в сочетании с молекулярно-ситовым действием. В связи с этим для хроматографии пептидов и белков небольшого размера (мол. масса до 10 000—30 ООО) рекомендуется использовать сефадексы марок -25 , а сефадексы марок -50 — для хро- [c.167]

Декстрановый гель, пористые стекла, уголь [c.343]

Гранулированные гели. Разделение на гелях основано на распределении растворенных веществ между растворителем (подвижная фаза) и растворителем, содержащимся в порах геля (стационарная фаза). В отличие от распределительной хроматографии подвижная и стационарная фазы в этом случае одинаковы. Таким образом, распределение происходит на основе способности растворенных частиц проникать в поры разделение частиц определяется различной скоростью их диффузии. Сродство разделяемых веществ к гелю само по себе должно быть наименьшим во избежание побочных процессов. Для разделения гидрофильных веществ применяют гели на основе декстрана, полиакриламида или агаровый гель. Для разделения гидрофобных веществ необходимо применять гели, способные набухать в органических растворителях. Такие гели получают перезтерификацией гидроксильных групп декстранового геля. Этот способ можно применить для получения акриловых и полистироловых гелей, растворимых в жирах. [c.351]

Гель-хроматография является новым методом разделения. Бурное развитие метода началось в 1959 г. с получения первого декстранового геля> (Порас, Флодин). Поэтому теоретические вопросы разделения в гель-хроматографии находятся в стадии развития. Основные теоретические концепции этого метода — представление геля в виде геометрической модели, затруднение процессов диффузии и концепция распределения [16]. Существенное отличие метода гель-хроматографии от методов адсорбции и распределения заключается в том, что концентрация вещества в стационарной фазе никогда не превышает концентрацию вещества в подвижной фазе. Отклонения от этого правила могут происходить в случае взаимодействия между растворенным веществом и гелем. [c.351]

Гель-фильтрацию открыли в 1959 Д. Порат и П. Флодин, к-рые показали возможность фракционирования водорастворимых макромолекул, в т. ч. белков, по мол. массе, в качестве сорбента они использовали сшитый декстрановый гель. В 1964 Д. Мур предложил с помогцью гель-проникающей хроматографии определять ММР полимеров, фракционируя их на стирол-дивинилбензольном геле. [c.413]

Бернс и Чилтон [163] получили патент на способ, основанный на гель-хроматографии. Декстрановый гель с размером пор 40—120 мкм использовался для заполнения колонок. Кремнезем со средней молекулярной массой 6 млн. (т. е. со средним размером частиц 20 нм) разделялся по размерам во всей области молекулярных масс. Другие авторы [164] использовали шарики из пористого стекла для заполнения колонок с целью их применения в эксклюзионной хроматографии коллоидов. Применительно к условиям разделения коллоидного кремнезема толщина двойного слоя на поверхности частиц при pH 9,5 составляла 6 нм. Поэтому эффективный диаметр частиц оказался на 12 нм больше, чем истинный, а эффективный диа- [c.475]

Благодаря почти полному отсутствию заряженных ионогенных групп, ага-рондные гели, подобно декстрановым гелям — сефадексам, не вызывают почти никакой денатурации или адсорбции лабильных биохимических веществ. [c.169]

Все применяемые в гель-хроматографии наполнители колонок традиционно делят на мягкие, полужесткие и жесткие гели [101]. Емкость геля может быть охарактеризована отношением У /У , которое лежит в диапазоне от 0,5 для жестких гелей до 2-3 для мягких гелей. Для мягких гелей характерна, с одной стороны, высокая эффективность и емкость при низких скоростях потока, с другой — высокая степень набухаемости в водных средах и увеличение объема пор при набухании. Соответственно повышение скорости подвижной фазы вызывает деформацию мяг-Ю1Х гелей. Они сжимаются, снижается их емкость. Из коммерческих мягких гелей для гель-фильтрации чаще всего применяют декстрановые гели, названные сефадек-сами. Сефадексы — гранулированные поперечно-сшитые декстраны (полисахариды), имеющие в набухшем состоянии гелевую структуру, обладают сильными гидрофильными свойствами. Неионообменные сефадексы содержат все же небольшое количество гидроксильных групп, определяющих адсорбционную емкость сефадексов порядка [c.209]

Колонки и детекторы контроль потока подвижной фазы. Для гель-фильтрационной хроматографии с использованием декстрановых гелей обычно применяют простые стеклянные колонки диаметром 2,5 см и длиной 50 см. В таких колонках Уо равен от 50 до 100 мл, а (Уо Уг) —от 200 до 250 мл. Раствор пробы массой несколько миллиграммов вводят в колонку через ее верхнюю часть. Обнаружение зон растворенных веществ по мере их появления из колонки можно проводить посредством спектрофотометрического контроля элюата, измерением его показателя преломления или собирая аликвотные части для дальнейшего анализа. Подвижной фазе позволяют протекать через гeль-ф,ильтpaциoн yю колонну иод действием силы тяжести со скоростью около 3,5 мл/ч на каждый квадратный сантиметр сечения колонки. Так, для колонки диаметром 2,5 см скорость потока равна приблизительно 16 мл/ч, а время, необходимое для элюирования самых малых молекул, составляет около 16 ч. Большая скорость элюирования недопустима, так как мягкий гель деформируется потоком подвижной фазы и колонка выходит из строя (гель выдавливается или же спрессовывается и закупоривает колонку). [c.598]

Соотношение между Vr или К и молекулярными массами белков на колонке, заполненной гелем декстрана, показано на рис. 17-20. Декстрановый гель обладает номинальным пределом ситового исключения, равным 800 000 единиц молекулярной массы. Диаметр зерен геля составлял от 50 до 75 мкм, размеры колонки-—2,5 см (диаметр) X Х50 см (длина) в качестве подвижной фазы использовали буфер (рН = 7,5), пропускаемый через колонку со скоростью 15—18 мл/ч. Рисунок превосходно демонстрирует связь между молекулярной мас-< ой белка и Vn из него ясно, что молекулярную массу неизвестного [c.599]

При внесении в колонку, заполненную декстрановым гелем, смеси белков и низкомолекулярных веществ и их последующем элюировании молекулы большого размера (белки) будут двигаться вместе с внешней водной фазой, не проникая в гранулы. Полисахаридная сетка не позволяет им проникнуть во внутреннюю фазу. Низг [c.131]

При выделении ферментов и других белков часто пользуются высаливанием при помощи сульфатов. Для дальнейшей очистки от солей раствор белка подвергают длительному диализу, что иногда приводит к денатурации. Очень удобным методом отделения белков от солей является фильтрация через декстрановый гель. [c.132]

Колонку диаметром 0,8—1 см заполняют декстрановым гелем (сефадекс Г-25). Высота геля 14—16 см. Перед началом работы колонку промывают 20—30 ли 0,005 н. Na l. Когда в колонке над гелем останется слой жидкости высотой 0,5 см, закрывают кран. В исследуемом растворе предварительно проверяют присутствие белка и иона NH при помощи качественных реакций. Присутствие белка обнаруживают по биуретовой реакции (см. работу 6). Для качественного определения иона NH смешивают на фарфоровой пластинке каплю исследуемого раствора и каплю реактива Несслера. Ион NH+, взаимодействуя с двойной солью Hgb-KI, входящей в реактив Несслера, образует соединение желтого цвета. [c.132]

В последнее время смеси высокомолекулярных веществ разделяют в тонком слое гелей (декстрановый гель), получающихся из различных типов сефадекса. Разделение основано на способности этих гелей в различной степени задерживать вещества с достаточно малым молекулярным весом в результате проникновения низкомолекулярных веществ внутрь частиц геля. Макромолекулы, не имеющие этой возможности из-за большого размера, проходят слои геля почти без задержки. [c.9]

Подлинный успех хроматографии полимеров связан с открытием в 1959 г. Поратом и Флодиным [7] гель-проникающей хроматографии, впервые использованной ими для фракционирования биополимеров на сшитых декстрановых гелях. В отличие от метода Бейкера — Вильямса фракционирование здесь осуществляется намного проще и быстрее вследствие диффузионного обмена макромолекулами между фазой пористого сорбента и свободным пространством хроматографической колонки, а молеку-лярно-массовые. распределения получают автоматическим пересчетом хроматограмм в соответствии с характерной для данной хроматографической системы молекулярно-массовой зависимостью удерживаемых объемов. [c.11]

В соответствии с рассмотренной моделью принцип универсальной калибровки в ГПХ может нарушаться, если в качестве сорбентов используют набухающие гели [67, 68, 69, 84, 85]. Например, изучена [67] зависимость удерживаемых объемов от гидродинамических размеров макромолекул, крайне различающихся по степени термодинамической совместимости с сорбентом, в качестве которого использовались декстрановые гели — сефадексы марок G-100 и G-75. В этом эксперименте макромолекулы поливинилового спирта (ПВС) и полиэтиленгликоля (ПЭГ) были практически полностью несовместимы с сефадексом, а макромолекулы ноливинилпирролидона (ПВП) и декстрана (Д) полностью совместимы с ним. Результаты представлены на рис. П1.25, из которого видно, что удерживаемые объемы декстранов и ПВП больше удерживаемых объемов ПВС и ПЭГ. [c.125]

Для высокоэффективной ГПХ низкомолекулярных веществ, а также олигомеров обычно используют набухающие сшитые гели декстрановые гели — сефадексы, полиакриламидные гели — биогели Р для ГПХ в воде или водных растворах, поливинилаце-татные гели (меркогели) и стирогели (порогели) для неводных гидрофобных систем. Оксинропилировапный сефадекс LH-20 может быть использован как в водных, так и в неводных растворах. [c.140]

С помощью диализа ыло изучено разделение белков с молекулярным весом до 45 ООО [37]. Показано, что скорость диализа обратно пропорциональна размеру белковой молекулы. Сравнительно недавно проведено фракционирование белков, пептидов и аминокислот путем фильтрации через декстрановый гель, содержащий лишь незначительное количество карбоксильных групп [127а]. Здесь разделение основывается па величине молекул, причем молекулы с большим молекулярным весом двигаются быстрее. [c.397]

В настоящее время актуальной задачей является применение жидкостной хроматографии в химии лигнина. Хроматографические работы в этой области можно разделить на две основные группы. Первая группа, касается разделения производных лигнина различного молекулярного веса и анализа распределения их по молекулярным массам на декстрановом геле типа сефа-декса. Вторая группа посвящена разделению производных лигнина (главным образом сульфокислот лигнина) и использова- [c.48]

Сефадексы получают при взаимодействии растворимых декстранов с эпихлор-гидрином, в результате чего полисахаридные цепи [—GH2— 5HjO(OH)3—О—] сшиваются мостиками —СНаСН (0Н)СН2— О—. В набухшем состоянии имеют гелевую структуру, при высушивании образуется ксерогель. Обладают сильно выраженными гидрофильными свойствами. Наличие гидроксильных групп обусловливает небольшую сорбционную способность (0,02—0,04 мг-экв/г). На сефадексах избирательно адсорбируются некоторые липофильные вещества, особенно ароматические и гетероциклические. Гранулированные декстрановые гели устойчивы к действию органических растворителей, растворов щелочей и разбавленных растворов кислот (НС1 до 0,1 н.). Рабочая область pH лежит в пределах от 2 до 10. Сильные минеральные кислоты в концентрации выше 0,1 н. могут вызывать гидролиз поперечно-сшивающих мостиков. Декстрины неустойчивы также к действию окислителей, вызывающих появление в геле карбоксильных групп. Сефадексы подвержены бактериальному действию при длительной работе или хранении во влажном состоянии, поэтому необходимо введение антисептиков 0,02% азида натрия или 0,001% мертиолата или насыщение буферного раствора хлороформом. Термостойкость сефадексов в сухом состоянии составляет 120 °С. Возможна стерилизация их в автоклаве 30 мин при 100—120 °С, но только в нейтральной среде. [c.55]

С е ф а к р и л. Декстрановый гель, сшитый посредством реакции с N, N -метилен-бис-акриламидом (мостики — Ha Ha ONH HaNH O Ha H —, ср. с сефадексами, разд. 28). По сравнению с сефадексом сефакрил обладает улучшенной механической прочностью, являясь полужестким гелем, благодаря чему возможно его использование в ВСЖХ. Гель применим не только в водных, но и в органических средах, в которые его переводят через серию смесей растворителей промежуточного состава. [c.70]