Нитрофенилфосфат пробирки

Во все пробирки прибавляют по 2 капли 0,3%-ного раствора хлористого магния и по 0,5 мл забуференного раствора нитрофенилфосфата. Закрывают пробкой и помещают в водяную баню при 37° на 30 минут. По истечении этого времени быстро сравнивают развившуюся окраску с окраской стандартного раствора р-нитрофенола, взятого в количестве 1,5 мл в пробирку того же диаметра. Находят окраску, равную стандартной, что соответствует одной единице щелочной фосфатазы. Если стандартная пробирка попадает в промежуток между двумя пробирками с разведениями плазмы, берут среднюю величину. [c.353]

Иммуноанализ проводят следующим образом. Полистирольные пробирки (80X11 мм) покрываются антителами при обработке 1 мл раствора антител. Растворы антител разбавляют ОД М N a-карбонатного буфера (pH 9,8) или фосфатным (солевым) буфером. Пробирки с этими растворами оставляют на 3 ч при 37 °С для хранения раствор оставляют в пробирках на холоду. Перед определением необходимое число пробирок промывают 0,9%-ным хлоридом натрия, содержащим 0,05% твина 20. В каждую пробирку помещают 0,5 мл одного из следующих растворов 1) стандартный раствор иммуноглобулина G, 2) неизвестный образец, 3) буферный раствор. После этого добавляют 0,1 мл разбавленного конъюгата щелочной фосфатазы и иммуноглобулина G (приготовленного с помощью сщивапия глутаровым альдегидом). Для разбавления используют фосфатный (солевой) буферный раствор, содержащий 1% сывороточного альбумина человека и 0,02% азида натрия. Пробирки инкубируют при комнатной температуре в течение ночи (16 ч) на роторной мешалке так, чтобы поверхность, покрытая антителами, покрывалась 0,6 мл раствора, находящегося в каждой пробирке. Затем пробирки промывают три раза раствором Na l-твин. Количество фермента, присоединенного к иммуноглобулину G, связанному стенками пробирок, покрытых антителами, определяют, добавляя 1 мл 0,05 М Na-карбонатного буфера (pH 9,8), содержащего 1 мг/мл п-нитрофенилфосфата и 1 ммоль/л хлорида. магния. Через 30 мин реакцию останавливают, добавляя 0,1 мл 1 М ХаОН. Измеряют оптическую плотность при 400 нм и строят стандартный график зави-си.мости ферментативной активности (изменение оптической плотности в единицу времени) индивидуальных образцов от содержания в них иммуноглобулина G. [c.382]

Ход работы. Во все пробирки разливают по 0,20 мл буфера. Добавляют по 0,2 мл суспензии мембран из раствора 1000 мкг/мл, а в контроль-—бидистиллированную воду. Преинкубируют 3 мин при 37 °С. Стартуют реакцию раствором субстрата по 0,05 мл. Таким образом инкубационная смесь будет содержать 0,5 моль/л метилглюкаминового буфера (рН=10,4 0,1) 10 мМ л-нитрофенилфосфата [c.243]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология