Эукариоты клонирование структурных генов

Клонирование структурных генов эукариот [c.70]

Цель биотехнологических экспериментов часто состоит в идентификации генов, кодирующих определенные белки (структурньЕх генов). У прокариот кодирующие домены структурных генов непрерывны, а у эукариот кодирующие области (экзоны) разделены некодирующими (интронами). Соответственно при клонировании генов про-и эукариот должны применяться разные стратегии. [c.62]

Методы изучения регуляции транскрипции. Прежде всего следует остановиться на основных методических подходах для изучения регуляции транскрипции у эукариот. В работе, как правило, используются клонированные гены, в которые вносят те или иные структурные изменения. В простейшем случае, о котором речь щла выще, можно вырезать какой-либо фрагмент ДНК с помощью подходящих рестриктаз и лигировать (сшить) между собой концы с помощью другого фермента, ДНК-лигазы. Можно, наоборот, встроить в то или иное место клонированной ДНК другие последовательности, разрезая ДНК в этом месте рестриктазой и затем вшивая туда вставку лигазой. Для вырезания более коротких блоков [c.68]

Регуляторные части генов, а также продукты их экспрессии, мРНК и белки, распознаются соответствующими ферментными системами организма и обеспечивают упорядоченную экспрессию структурной части гена. При этом регуляторные участки генов и промежуточных продуктов их экспрессии, как правило, высокоспецифичны в отношении своих природных генетических эффекторов (РНК-полимераз, рибосом, факторов транскрипции и трансляции, белковых факторов сплайсинга, ферментов, осуществляющих посттрансляционные модификации полипептидов, и т.п.), и чаще всего они не могут эффективно функционировать в гетерологичном генетическом окружении. Очевидно, что при конструировании высокоэффективных экспрессирующих векторов необходимо, прежде всего, учитывать особенности структуры регуляторной части рекомбинантного гена, исходя из того, в каких генетических условиях клонированный ген будет экспрессироваться. Однако не только регуляторные последовательности генов являются препятствием для высокоэффективной экспрессии чужеродных рекомбинантных генов. Как уже было отмечено, структурные части генов про- и эукариот фундаментально отличаются друг от друга по наличию у последних внутри генов интронов. Следовательно, гены эукариот не могут эффективно экспрессироваться в бактериальных клетках, поскольку у прокариот отсутствуют соответствующие системы сплайсинга. Кроме того, у предшественников эукариотических мРНК не может осуществиться в бактериальных клетках и правильный процессинг 3 - и 5 -концевых некодирующих последовательностей. Даже такой [c.106]

На рубеже 80-х годов стала очевидной возможность использовать искусственную хромосому дрожжей в качестве емкого вектора для клонирования ДНК геномов высших организмов, включая человека (Burke et al., 1987). Размер фрагментов ДНК, которые можно включать в YA , сопоставим с размером природных хромосом дрожжей - в среднем 1,2 млн п.н., что в несколько раз больше размера клонов ДНК в бактериальных, фаговых и кос-мидных векторах (рис. 23). Большой размер клонируемых фрагментов позволяет уменьшить количество клонов, необходимых для перекрытия эквивалента генома. С помощьюУАС в качестве вектора стало возможным преодолеть трудности клонирования, которые связаны с особенностями структурной организации хромосом высших эукариот присутствием в геноме множества повторяющихся элементов и метилированных участков, неравномерностью распределения генов по хромосомам и пр. (S hlessinger, 1990). [c.71]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология