Электрофорез на бумаге красителей, нерастворимых в вод

Пептиды растворяют в буфере pH 6,5 (табл. 10,4) и наносят вдоль линии старта (полосой). Нерастворимые пептиды после высушивания растворяют в небольшом объеме 98%-ной муравьиной или уксусной кислоты, затем разбавляют водой до 50%-ной концентрации и наносят на бумагу. В процессе нанесения раствор высушивают теплым воздухом (с помощью феиа), при этом надо соблюдать осторожность, поскольку при перегревании возможно окис тение остатков метионина, приводящее к образованию нескольких форм одного пептида (с разными значениями Rf при хроматографии). При электрофорезе между образцами пептидов наносят флуоресцентные маркеры (табл. 10.6), а в углы листа бумаги — красители. Полезно использовать в качестве свидетелей смесь аминокислот, особенно если для проявления электрофореграммы используется окрашивание нингидрином, В хроматографии маркером служит положение фронта растворителя. [c.362]

Можно заполимеризовать субстрат и кофакторы в другом ( индикаторном ) геле на основе агарозы или импрегнировать ими фильтровальную бумагу. После окончания электрофореза белков в пластине рабочего ПААГ на его поверхность накладывают индикаторный гель или бумагу. Ферменты диффундируют в них из рабочего геля и обнаруживают себя соответствующей цветной реакцией. Габриель привел длинный список индикаторных цветных реакций для ферментов [Gabriel, 1971]. Во многих случаях в этих реакциях фигурирует восстановление НАД с дальнейшей передачей электрона на краситель. Удобно в качестве заключительного этапа реакции воспользоваться неферментативным восстановлением тетразолиевой соли до ее формазана, что дает сильно окрашенные и зачастую нерастворимые продукты (схема реакции приведена ниже), [c.102]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология