Гомозиготные трансгенные мыши

Идентификация гомозиготных трансгенных мышей [c.347]

Для идентификации трансгенных животных вьщеляют ДНК из маленького кусочка хвоста и тестируют ее на наличие трансгена с помощью блот-гибридизации по Саузерну методом полимеразной цепной реакции (ПЦР). Чтобы определить, находится ли трансген в клетках зародышевой линии животного, трансгенную мышь скрещивают с другой мышью. Далее можно проводить скрещивание потомков для получения чистых (гомозиготных) трансгенных линий. [c.421]

Скрещивание трансгенных мышей и получение гомозиготных трансгенных животных [c.187]

Генетическая модификация животных при помощи технологии рекомбинантных ДНК (трансгеноза) основана на введении клонированного гена(ов) в геном клетки, которая могла бы дать начало клеткам зародышевой линии. Скрещивая трансгенных потомков, появившихся в результате такой операции, можно получить гомозиготные линии трансгенных животных. Большинство исследований в этой области проводилось на мышах. Обычно для этого вводили клонированный ген в оплодотворенную яйцеклетку мыши с помощью микроинъекции, имплантировали ее в реципиентную самку и проверяли потомство на наличие введенного гена. Чужеродный ген можно вводить в оплодотворенную яйцеклетку мыши и с помощью ретровирусного вектора. Альтернативный подход заключается в выделении мышиных эмбриональных [c.439]

Е8-клетки, в геном которых в нужном сайте встроен трансген, можно культивировать и ввести в эмбрион на стадии бластоцисты, а затем имплантировать такие эмбрионы в матку псевдобеременных суррогатных матерей. Мышата, у которых генетичес1си модифицированные Е8-клетки участвовали в образовании клеток зародышевой линии, могут дать начало трансгенным линиям. Для этого их нужно скрестить с особями той же линии, а затем скрестить их трансгенных потомков. В результате будут получены трансгенные мыши, гомозиготные по трансгену. [c.425]

Важная роль этих цитокинов in vivo была установлена на мышах, у которых нейтрализующие антитела к ИЛ-4 или введение ИФу ингибировали IgE-ответ. Точно так же трансгенные мыши, гомозиготные по мутации, инактивирующей ген ИЛ-4, неспособны продуцировать IgE при зара- [c.422]

Инсерционный мутагенез у трансгенных мышей, вызывающий наследственную деформацию конечностей. Трансгенные мыши (рис. IV.15) были получены путем инъекции в зародыши сегмента ДНК, несущего ретровирусный LTR в качестве промотора и мышиный протоонкоген туе в составе вектора pBR322, и последующего инбридинга потомков. Все мыши данной линии несли рецессивную аутосомную мутацию, как еидно из фотографии четырехдневных гомозиготных мутантных мышей (Л) и их скелетов (Б). У гомозигот конечности деформированы. При скрещиваниях зта аномалия конечностей (Id) сегрегирует вместе с участками ДНК, которые гибридизуются с последовательностями LTR- [c.369]

ДНК мышей, несущ,их в качестве трансгена фрагмент ДНК вируса SV-40, который не обнаруживает гомологии с мышиной ДНК. Исследовали потомков (А, В и С) гетерозиготных по трансгену родителей (их гетерозиготность считается генетически установленной). Два одинаковых фильтра с ДНК из тканей хвоста гибридизовали один — с радиоактивно меченной ДНК SV-40, чтобы выявить трансген, а другой — с радиоактивно меченной мышиной последовательностью, в данном случае с геном -fos. Одинаковая интенсивность гибридизационного сигнала с зондом -fos для всех трех образцов указывает на то, что количество ДНК на фильтре в каждом случае одинаково. Тогда гибридизация с зондом SV-40 позволяет сделать вывод, что мышь А имеет в геноме больше трансгенных последовательностей, чем особи В и С. Количественное денситометрическое сканирование или просчитывание радиоактивных пятен на сцин-тилляционном счетчике показало, что в геномной ДНК А содержится в два раза больше вирусной ДНК, чем в ДНК В и С, и, следовательно, особь А можно считать потенциально гомозиготной по трансгену. Этот вывод подтверждается результатами генетического анализа. Мышь А (это самец) скрестили с нормальной самкой F1 и ДНК родившихся детенышей исследовали с помощью слот-анализа. Поскольку все 10 мышей оказались гетерозиготными по трансгену, их отец (мышь А) гомозиготен. [c.349]

Эмбриональные стволовые клечки (Е5) взяты у мышей, гомозиготг ых по гену, определяющему черный цвет шерсти, и введены в бластоцисту мыши-альбиноса (о), которая затем имплантируется приемной матери (б). Это приводит к появлению химерных потомков в). Их скрещивание с альбиносами (г) помогает выявить по цвету гетерозиготные особи д), у которых зародышевая ткань произошла от стволовых клеток Инбридинг среди отих особей позволяет получить гомозиготных потомков (е) Если в геном стволовых клеток был введен какой-либо ген, то полученные особи будут трансгенными [c.415]

Сложность генома млекопитающих, их эмбрионального развития, длительный период, предшествующий размножению, и трудности изучения большого числа индивидуальных животных делают генетический анализ этих систем затруднительным. Направленная инактивация генов является чрезвычайно важным методическим приемом, применяемым для получения трансгенных животных. Наибольшее развитие такие работы получили в экспериментах на мышах. Создание линий мышей, гомозиготных по направленно инактивированному гену, позволяет изучать детерминируемые данным геном свойства на уровне организма. Благодаря появлению методологии получения нокаутных мышей молекулярная генетика этой удобной лабораторной модели стала развиваться небывалыми темпами. [c.453]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология