Дот-блот-гибридизация

Таблица 10.12. Слот (или дот)-блот-гибридизация геномной ДНК

Методика дот-блот гибридизации ДНК. Исследование проводят в несколько этапов. [c.97]

Рис. 3.6. Иммунофлуоресценция клеток, зараженных вирусом денге, после дот-блот гибридизации. В этом случае клетки не распластываются, как в монослое. Зараженные клетки дают яркую иммунофлуоресценцию (на фотографии они белые)

Дот-блот гибридизация РНК проводится практически по той же схеме, но для денатурации РНК используют глиоксаль или формальдегид, а гибридизацию проводят при 42 °С. [c.97]

В большинстве случаев, однако, невозможно выполнить многие из этих требований. Часто не удается найти подходяш,ее растение, на котором образуются локальные поражения. В этих случаях для контроля количества вируса можно использовать метод дот-блот гибридизации (см. разд. 3.8). [c.13]

Обнаружение вирусов методом дот-блот гибридизации [c.29]

Использование основных приемов работы с рекомбинантной ДНК и методик анализа белков и нуклеиновых кислот позволяет клонировать гены и изучать их организацию (блоттинг-гибридизация по Саузерну), строение мРНК (нозерн-блоттинг),. а также следить за уровнем экспрессии генов в различных условиях окружающей среды и даже в процессе развития. Например, в некоторых случаях уровни транскрипции гена определяют методом дот-блот-гибридизации выделенной РНК (разд., 6.3). Более подробные качественные исследования транскрипционной активности осуществляют с помощью нозерн-блоттинга (приложение 6 [I]). 5 - и З -концы транскриптов определяют, используя Sl-картирование [2, 56]. Однако такие методы анализа позволяют установить только строение транскрибируемой области или гена, а также механизмы процессинга транскриптов и их трансляции. Функцию любых участков вне транскрибируемой последовательности в некоторой степени можно изучать, сравнивая гены, обладающие сходными механизмами регуляции. При этом большинство предположений о воздействии на экспрессию гена остаются исключительно в области догадок. В этом случае генетическая трансформация предоставляет исследователю, работающему с растениями, уникальную-возможность непосредственно отвечать на фундаментальные вопросы, касающиеся регуляторной функции последовательностей, расположенных как в непосредственной близости, так и на некотором расстоянии от 5 - и З -концов транскрибируемого-гена. Используя разнообразные методы мутагенеза in vitro и технологию рекомбинантных ДНК, удается, модифгщировать клонированные гены и затем после введения мутантного гена-путем генетической трансформации обратно в растения анализировать влияние изменения этого гена на его экспрессию.. Подобные методики способствовали изучению нуклеотидных [c.307]

Инкубируйте образцы РНК при 65 °С в течение 5 мин нанесите на фильтр аликвоты по 5 мкл (для этой цели можно использовать аппарат для дот-блот-гибридизации minifold фирмы S hlei her and S huell). [c.296]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология