Методы бляшек для изучения вирусов гриппа

Разработка метода бляшек для вирусов гриппа в клетках фибропластов куриного эмбриона ( EF) [111 117] позволила идентифицировать одношаговые мутанты и установить частоту реверсии [117]. Она привела также к подтверждению более ранних исследований по кросс-реактивации вируса, инактивированного УФ-луча-ми [4, 19, 32, 64J, и, что особенно ван<но, к основанию методов клонирования некоторых бляшкообразующих штаммов вируса 1111]. Позднее использование перевиваемых человеческих клеточных линий расширило перечень вирусов, для изучения которых можно было применять метод бляшек и готовить рекомбинанты, различающиеся по типу образующихся бляшек [121, 122]. Только значительно позднее было установлено, что загадочная неспособность вирусов гриппа образовывать бляшки обусловлена главным образом необходимостью обязательного расщепления вирусного НА эндогенными протеазами клетки хозяина, без чего невозможны инфицирование клетки и репликация вируса [67, 76]. Возможность применения только тех нескольких вирусов (в основном WSN и RWS — вариантов оригинального штамма WS), которые образовывали отчетливые бляшки, значительно ограничивала проведение генетических экспериментов. К настоящему времени установлено, что образование бляшек вирусом WSN, по крайней мере [c.15]

К фенотипическим особенностям вирусов гриппа относятся различия биологической активности в разных клеточных системах хозяина, включая различия в ареале хозяев, органоснецифично-сти и распространенности среди животных, а также в бляшко-образовании в разных культурах клеток. Разработаны надежные лабораторные методы, позволяющие определить происхождение отдельных сегментов РНК у реассортантных вирусов, возникших в естественных условиях или полученных в лаборатории. Это позволило получить ранее недоступную информацию о роли отдельных генов или их комбинаций в возникновении некоторых биологических различий, а также приступить к изучению ряда фундаментальных вопросов сложных молекулярных механизмов, [c.296]

Второй метод был рассчитан на изучение основной последовательности гомологов у соответствующих сегментов РНК различных штаммов. Основная последовательность гомологов была рассчитана для индивидуальных сегментов РНК штамма A/FPV, способного образовывать бляшки на клетках куриного эмбриона, и для комплементарных сегментов РНК других штаммов вируса гриппа, неспособных образовывать бляшки в этих клетках. Для получения рекомбинантов с бляшконеобразующим штаммом были использованы ts-мутанты вируса A/FPV с известным фенотипическим дефектом. Извлеченные бляшки, образованные рекомбинантом при непермиссивной температуре, были использованы для инфицирования клеток была выделена комплементарная РНК, которую использовали в опытах молекулярной гибридизации с меченными Р сегментами вРНК. При сравнении рибонуклеазо-резистентных фракций гомологичных гибридов и гетерологичного гибрида можно было определить родительскую принадлежность любого из сегментов 222, 224, 242]. [c.36]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология