Тест на бляшки

На следующем этапе смесь бактериофагов и антител добавляют к культуре Е. oll В. После инкубации 5 мкл жидкости, содержащей бактериофаг и антитела, смешивают с 1 мл бактериальной культуры в логарифмической фазе. При постановке теста следует принимать во внимание, что при 37°С первые бляшки появляются уже через 25 мин. На практике это означает, что каждую партию проб нужно готовить при комнатной температуре, укладываясь в 25-минутный интервал. После некоторой тренировки за это время удается подготовить партию из 48 проб. [c.499]

Хотя во всех описанных ниже методах в качестве тест-культуры взяты клетки Vero, однако можно использовать с этой целью ВНК-21, LL MK2, РК15 и другие линии клеток млекопитающих. Первый метод оптимален при исследовании большого числа образцов его легко адаптировать для работы с микропланшетами для титрования, как описано здесь, или с планшетами или чашками большего размера, например для определения морфологии бляшек. В этом случае для титрования используют карбоксиметилцеллюлозу (КМЦ). Далее описан еще один метод, предполагающий использование агарозы и окрашивание клеток нейтральным красным. Он особенно полезен при работе с вирусными клонами, когда необходимо, чтобы бляшки содержали инфекционный вирус. [c.85]

Скорость роста заражежых клеток на 25-50 % ниже, чем неинфицированных. Поэтому при титровании нитевидные фаги образуют на бактериальном газоне мутные бляшки. При размножении нитевидных фагов в бактериальной клетке их геном одновременно присутствует в виде большого числа копий двухцепочечной кольцевой плазмиды и одноцепочечной ДНК в составе вирионов. Из одного литра инфицированной культуры получают несколько миллиграммов одноцепочечной и репликативной двухцепочечной форм фаговой ДНК. На одноцепочечной вирионной ДНК многие манипуляции по созданию гибридных молекул, разработанные для вирусных и плазмидных двухцепочечных ДНК, реализовать нельзя. Однако они с успехом применимы к репликативной форме генома нитевидных фагов, которая инфекцион-на в тесте трансфекции клеток Е. oli. Все это обусловило использование нитевидных фагов для создания клонирующих векторов. [c.111]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология