Протопласты иммобилизация

ТОК, которые уплощены, прикрепляются к твердому субстрату и не имеют клеточной стенки, положение ядра в цитоплазме клетки не составляет проблемы. Это справедливо и в отношении яйцеклеток млекопитающих. При работе с растительными клетками очень трудно проколоть клеточную стенку без забивания кончика иглы. Наличие клеточной стенки и форма растительных клеток затрудняют визуализацию ядра. Если клетка иммобилизована в неправильной ориентации то практически невозможно лопасть в ядро, не разрывая вакуоль, что вызывает немедленную гибель клетки. Иммобилизация сама по себе тоже способствует некоторому повреждению протопластов. [c.223]

Рис. 3.7. Методы иммобилизации протопластов для микроинъекций.

Культивируют протопласты в соответствующей жидкой среде в течение 24 ч >, а затем используют для иммобилизации, на покрытом поли-Ь-лизином стеклянном покровном стекле-(рис. 3.7,Л). [c.228]

Несмотря на описанные выше проблемы в разработке методов микроинъекций для растительных клеток, особенно протопластов, достигнут большой прогресс. В ранних исследованиях проводили инъекции в цитоплазму протопластов табака при 70%-ной выживаемости [40]. В этих экспериментах использовали клетки двух-, трехдневного возраста, полученные из протопластов, которые сформировали тонкую клеточную стенку и способны прикрепляться к покровному стеклу, покрытому по-ли-Ь-лизином (рис. 3.7,Л). За микроинъекцией наблюдали вводя флуоресцентный краситель (Lu ifer yellow). Однако игла микроинъектора редко попадала в ядро из-за того, что при использовании этого метода иммобилизации протопластов/клеток трудно локализовать ядра. С тех пор сообщалось, что поли-L-лизин часто обладает токсическим действием по отношению к протопластам. [c.223]

Более поздняя разработка заключается в том, чтобы заплавлять протопласты в очень тонкий слой легкоплавкой агарозы в найлоновом кольце [23]. Благодаря данному методу иммобилизации, многие протопласты находятся у поверхности агарозы и только частично окружены ею, так что их нетрудно инъецировать (рис. 3.7,5). При этом локализация ядра — непростая, задача. Преимущество метода состоит в том, что инъецируемые протопласты (клетки) уже находятся в культуральной среде,, обеспечивающей поддержание их жизнеспособности. Разработан еще один метод, предусматривающий иммобилизацию протопластов с помощью специально предназначенной удержива- [c.223]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология