Легкоплавкая агароза

Выделите линейную ДНК плазмиды pUR с помощью электрофореза в агарозном геле (0,8%-ная легкоплавкая агароза) [14]. [c.143]

Выбор того или иного осмотического стабилизатора и его концентрации определяется природой организма. Иногда даже для разных штаммов одного вида оптимальная концентрация и вид осмотического стабилизатора могут отличаться. Очень важным фактором, влияющим на реверсию протопластов, является плотность окружающей среды. В генетических экспериментах жидкие среды для регенерации практически не применяются, поскольку в этих условиях невозможен клональный анализ образующихся рекомбинантов. Кроме того, для эффективной регенерации клеточной стенки, очевидно, необходим контакт цитоплазматической мембраны с каким-либо поддерживающим каркасом. Показано, что реверсия протопластов бацилл и актиномицетов происходит гораздо лучше на средах, содержащих 2% агара, чем на средах с 0,7—0,8 агара. Значительно повышает частоту регенерации применение двухслойного метода. Протопласты ресуспендируют в мягком (0,4—0,7%) агаре или легкоплавкой агарозе и помещают на твердую агаризованную среду (1,5—2% агара). Показано также, что эффективность и скорость реверсии протопластов существенно повышается, если их высевать не на свежеприготовленные, а на частично (на 10— 20%) дегидратированные (подсушенные) чашки. [c.126]

И. Препаративные гели для определения размеров ДНК можно готовить из легкоплавкой агарозы. И тогда выделять ДНК из них можно, вырезая нужные участки и расплавляя их при 65°С. После того как гель расплавится, ДНК доводят до нужной концентрации и проводят лигирование в присутствии агарозы, которая не ингибирует эту реакцию. В настоящее время нет оснований предпочитать один метод другому. Важно лишь избегать операций, которые могли бы нарушить целостность молекул ДНК после извлечения их из геля. Нельзя центрифугировать, встряхивать, пипетировать препараты. И желательно как можно скорее приступать к их ли-гированию. [c.104]

Смешивают каплю суспензии протопластов в культуральной среде при комнатной температуре с равным объемом среды для культивирования протопластов, 0,5% легкоплавкой агарозы, охлажденной до 40 °С. Для этого помещают I мкл культуральной среды, содержащей 0,5% легкоплавкой агарозы, в центр кольца, после этого добавляют 1 мкл протопластов в жидкой культуральной среде и дают смеси застыть в течение 10 мин. Для микроинъекций можно использовать протопласты, которые наполовину погружены в агаризованную среду (рис. 3.7, ). [c.229]

Переносят гель на пластинку для анализа, заливают все щели по краям расплавленной легкоплавкой агарозой и дают ей застыть. [c.354]

Аналогичный прием можно использовать и для геля обычной, не легкоплавкой агарозы, в которой электрофорез РНК проводили в присутствии 6 М мочевины. Благодаря мочевине (см. выше) гель обычной агарозы плавится при 75° за 1,5 мин и не застывает даже при 20° в течение 1 ч. Концентрация цетавлона в этом случае несколько выше. [c.157]

Рис. 1. Структура и схема синтеза проб для метода геномных отпечатков. Маленькие стрелочки обозначают тандемно повторяющиеся единицы гипер-вариабельной последовательности, а большие стрелки показывают направление синтеза меченых комплементарных цепей (методика приведена ниже в тексте). (Г) — радиоавтограф геля из легкоплавкой агарозы, в котором миии-сателлитная проба 33.6 была очищена электрофорезом (см. табл. 2). Отмечены начало дорожки и положение полосы, соответствующей меченой пробе.

Приготовьте 1,2%-ный гель из легкоплавкой агарозы иа трис-ацетатпом буфере (удобно это делать во время инкубации, следующей за этапом [c.196]

Более поздняя разработка заключается в том, чтобы заплавлять протопласты в очень тонкий слой легкоплавкой агарозы в найлоновом кольце [23]. Благодаря данному методу иммобилизации, многие протопласты находятся у поверхности агарозы и только частично окружены ею, так что их нетрудно инъецировать (рис. 3.7,5). При этом локализация ядра — непростая, задача. Преимущество метода состоит в том, что инъецируемые протопласты (клетки) уже находятся в культуральной среде,, обеспечивающей поддержание их жизнеспособности. Разработан еще один метод, предусматривающий иммобилизацию протопластов с помощью специально предназначенной удержива- [c.223]

Для нанесения такого количества белка на гель диализованный препарат плазмы концентрировали ультрафильтрацией до содержания белка 200 мг/мл. 5 мл такого концентрата смешивали при 30 с легкоплавкой агарозой, заливали в виде пластинки толщиной 2 мм и накладывали ее с одного конца на предфокусированный рабочий гель агарозы. Электрофокусирование при мощности 15 Вт занимало 8 ч. Авторы утверждают, что воспроизводимость картины ИЭФ в агарозе заметно лучше, чем на сефадексе. Однако извлечь белки из агарозы значительно сложнее, чем из слоя сефадекса. [c.66]

Механические разломы, одно- и двунитевые разрывы ДНК, а также лигирование плеч вектора более чем с одним фрагментом ДНК рестриктов из разных областей хромосомы могут приводить к образованию химерных YA , которыми трансформируют сферопласты дрожжей. Для снижения вероятности таких событий in vitro процедуры с клонированной ДНК проводили в легкоплавкой агарозе, иммобилизуя молекулы ДНК. Доля химер уменьшается и при снижении концентрации клонируемой ДНК человека в лигиру-ющей смеси. Сходный эффект разведения имеет место при создании YA -клонотеки из клеток соматических гибридов, где доля ДНК человека составляет около 1%. В таких YA -клонотеках доля химер не превышает 10%. [c.74]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология