Протопласты табака

Рис. 19-35. Плазматическая мембрана протопласта табака. Протопласт, иммобилизованный иа сеточке для электронной микроскопии, вскрыли, отмыли его внутреннее содержимое н подвергли препарат негативному контрастированию для выявления структуры внутренней стороны мембраны. На снимке хорошо видим кортикальные мнкротрубочки и многочисленные окаймленные ямки. (С любезного разрешения С. Роч ке.)

Для идентификации гибридов могут служить пластиды. Например, при слиянии протопластов табака и моркови в качестве селективных маркеров использовались зеленые хлоропласты табака и красно-оранжевые хромопласты моркови. [c.158]

В описанных ниже экспериментах рассматривается трансформация клеток, полученных из мезофильных протопластов табака и суспензионной культуры клеток моркови и то и другое можно считать модельными системами культуры ткани. [c.143]

Совместное культивирование отдельных клеток, полученных, из протопластов табака с агробактериями. Клетки высевают [c.143]

Выделение мезофильных протопластов табака [c.143]

Эта смесь ферментов может быть использована только для выделения мезофильных протопластов табака. Подходящий ферментный коктейль при выделении протопластов из нового типа эксплантата, нового вида растения или даже разновидности каждый раз приходится составлять заново. В целом, изменение для растения условий роста предусматривает и изменение в смеси ферментов, необходимой для хорошего выхода жизнеспособных протопластов, способных к образованию клеточной стенки и делению. [c.147]

Пластиковые чашки Петри диаметром 5 см, содержащие культуры клеток, полученные из протопластов табака, как описано в разд. 2.7 и 2.8. [c.152]

Клетки считаются компетентными для трансформации, когда в них начинается репликация ДНК. Синтез ДНК во многих системах протопластов начинается одновременно с регенерацией клеточной стенки во время первого деления, но такие клетки, как правило, слишком слабые, чтобы пережить совместное культивирование с агробактериями. Во многих случаях целесообразно инокулировать культуры агробактериями, когда большинство клеток в популяции вступает во второй период синтеза ДНК перед вторым делением. В случае мезофильных протопластов табака, выделенных из тепличных растений, эта стадия наступает через 6—8 дней культивирования. [c.153]

Наиболее широкий спектр мутаций наблюдается при использовании в качестве мутагена ионизирующего излучения. При рентгеновском облучении клеток получены пигментдефектные линии дурмана и петуньи, устойчивые к параквату линии табака. Гамма-облученные растения (лист) служили источником каллусной ткани и протопластов, из которых были выделены линии, устойчивые к гербициду и валину. Устойчивые линии к валину были получены и при обработке культивируемых in vitro клеток табака ультрафиолетовыми лучами. Применение такого способа облучения гаплоидных протопластов табака приводило к возникновению разнообразных ауксотрофных мутантов. [c.153]

Однако поглощение ядра не всегда приводит к образованию гибрида. Так, X. Биндинг (1976) наблюдал проникновение ядер Petunia в протопласты табака. Но в молодых регенерантах во время митоза хромосомы Petunia не были обнаружены. Это может свидетельствовать о потере в клеточном цикле интеграции между чужеродным ядром и ядром хозяина. [c.50]

Растительный протопласт — это по существу клетка с удаленной клеточной стенкой. При правильном культивировании протопласты табака, например, будут заново синтезировать клеточную стенку н вступят в митоз. Таким образом, культивирование протопластов — это удобный путь получения популяций, состоящих из отдельных клеток. Процедура выделения протопластов зависит от вида растения и природы исходного материала (например, мезофилл листа, срезы проростков илн культивируемые в суспензии клетки). Протопласты обычно высвобождают из растительных тканей путем расщепления клеточной стенки смесью пектиназ, целлюлаз и гемицеллюлаз, растворенных в среде с высоким осмотическим давлением. Такая среда сдерживает тургор и не дает клеткам лопнуть. [c.143]

Жидкая среда, содержащая бактериостатический антибиотик для удаления агробактерий из клеточных культур после совместного культивирования, 100 мл [например, для протопластов табака, инкубированных с LBA4404(pBinl9), используют MSP1 7М-1-СЬ (500 мкг/мл) ]. [c.152]

С помощью электропорации были получены стабильно трансформированные растения или клеточные линии некоторых видов растений. К йх числу относятся табак [38], морковь [22] и кукуруза [13]. Шиллито с соавторами [38] использовал вектор, содержащий доминантный селективный маркерный ген (npt-ll), который ранее успешно применяли в экспериментах по пере носу генов с помощью ПЭГ [31]. Эту плазмиду вводили с помощью электропорации в протопласты табака и отбирали трансформанты на основе резистентности к канамицину. Дан<-ные исследования, очевидно, отнимают больше времени, чем эксперименты по временной экспрессии, но в конечном итоге позволяют разработать методику стабильной трансформации. В настоящее время при использовании методов электропорации частота трансформированных колоний может достигать 2%. что более эффективно, чем трансфекция ДНК с помощью ПЭГ. Пути интеграции перенесенной ДНК такие же, как и при иС пользовании ПЭГ, и в обоих случаях перенесенные гены наследуются в соответствии с нормальными менделевскими соотношениями. [c.216]

Несмотря на описанные выше проблемы в разработке методов микроинъекций для растительных клеток, особенно протопластов, достигнут большой прогресс. В ранних исследованиях проводили инъекции в цитоплазму протопластов табака при 70%-ной выживаемости [40]. В этих экспериментах использовали клетки двух-, трехдневного возраста, полученные из протопластов, которые сформировали тонкую клеточную стенку и способны прикрепляться к покровному стеклу, покрытому по-ли-Ь-лизином (рис. 3.7,Л). За микроинъекцией наблюдали вводя флуоресцентный краситель (Lu ifer yellow). Однако игла микроинъектора редко попадала в ядро из-за того, что при использовании этого метода иммобилизации протопластов/клеток трудно локализовать ядра. С тех пор сообщалось, что поли-L-лизин часто обладает токсическим действием по отношению к протопластам. [c.223]

Некоторые смеси ферментов, особенно Rhozyme, используемые для приготовления протопластов, содержат очень высокие концентрации -глюкуронидазы. Обычное промывание солевым раствором и флотация в сахарозе позволяют инактивировать GUS в протопластах табака, но в случае других клеток это может вызвать значительные трудности. [c.367]

Протопласты табака (см. рисунок), помещенные на среду Мура-гиге и Скуга, через 24 ч образуют клеточную стенку и через [c.175]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология