Моноклональные стерильные условия

Наиболее простым способом оценки специфичности моноклональных антител в процессе клонирования гибридом является метод непрямого твердофазного иммуноферментного анализа с применением Т8Р-планшетов. ТЗР-планшеты представляют собой полисти-рольные стерильные крышки к 96-луночным культуральным платам, имеющие выступы, опускающиеся в лунки. Поверхность выступов ТЗР-планшетов может быть покрыта в стерильных условиях антигеном. Планшетом накрывают плату, в которой выращивают гибридомы таким образом, чтобы покрытые антигеном выступы опустились в среду культивирования гибридом. Выдерживают 1 ч и заменяют на новый планшет, выступы которого покрыты перекрестно реагирующим антигеном. Дальнейшую обработку ТЗР-крышек проводят в соответствии со стандартной методикой для непрямого твердофазного иммуноферментного анализа. Используя этот метод, можно в течение одного дня провести оценку способности моноклональных антител взаимодействовать с перекрестно реагирующими антигенами. Это дает возможность уже через 12—15 дней отобрать и клонировать только те гибридомы, которые обладают нужной исследователю специфичностью. [c.172]

Стеркльность. Поддержание стерильных условий в течение всего процесса является необходимым условием. Микробное заражение возможно как на стадии приготовления среды, так и в ходе культивирования. Время культивирования изменяется от 1-2 недель в периодическом режиме до нескольких месяцев в проточном режиме. Предотвращение микробного и химического загрязнения обеспечивается особенностями конструкции ферментера и технологии процесса. Ферментеры и все связанные с ними трубопроводы и запорно-регулирующая аппаратура устроены так, что их можно, стерилизовать непосредственно перед началом культивирования, причем стерильность сохраняется в ходе всего процесса. Все операции с культурами и средами осуществляют только в закрытых сосудах. Степень сложности предприятия по производству моноклональных антител весьма высока, однако она компенсируется возможностью работы в обычном окружении и относительно несложными функциями операторов. [c.46]

Необходимо хорошее оборудование для работы с культурами, в том числе СОг-термостат (содержание СОг в воздухе — 5%)- Желательно иметь ламинарный бокс для осуществления манипуляций в стерильных условиях. Следует отметить, что знание основ асептики и некоторый опыт в работе с клеточными культурами важны для успешного проведения работ. Для визуального наблк>дения за культурами необходим инвертированный микроскоп (например, Olympus СК модель снабжена широкой ровной подста вкой, объективом ХЮ и бинокулярной насадкой WF 15Х). Кроме контейнеров с жидким азотом для хранения плазмацитом и гибридом, для получения моноклональных антител необходимо не так уж много специального оборудования. Позднее будут рассмотрены возможные варианты процедур скрининга, которые, по-видимому, следует усовершенствовать и более широко внедрять в практику. Для иммунизации необходимо иметь инбредные линии мышей (обычно BALB/ ) или крыс (Lou). Если предполагается выращивать гибридомы в виде асцитных опухолей, то понадобится довольно большое количество животных. [c.117]

По условиям проведения процесса различают нестерильные (крзгпнотоннажное производство кормовых дрожжей) и стерильные производства (полз ение антибиотиков, витаминов, моноклональных антител идр), аэробные, или с подачей воздуха и анаэробные (без подачи воздуха) — соответственно производства лимонной кислоты и полисахарида декстрана [c.239]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология