Иммуноэлектрофорез встречный

Рис. 6.16. Трафарет пластины 8Х Х8 см для встречного иммуноэлектрофореза в агаре с использованием буферной системы, в которой антитела мигрируют к катоду, а антигены — к аиоду. Два вертикальных ряда луиок слева предназначены для тестирования антигенов нли антител в зависимости от того, имеются ли в наличии стандартный антиген (тест на антитела) илн контрольные антитела (тест иа антигены). Три вертикальных ряда в центре используются для одновременного определения антигенов и антител в опытных образцах сыворотки. В левый вертикальный ряд вносят стандартный антиген, в правый — контрольные антитела, а в центральный — исследуемую сыворотку. Лунки, расположенные справа, предназначены для определения антигенов, которые могут содержаться в образцах ц, различных концентрациях. Если в маленькие лунки вносить небольшие объемы (1—2 мкл), то по соотношениям, оптимальным для преципитации, можно определить очень высокие концентрации антигенов

Экспресс-диагностика основана на обнаружении в спинномозговой жидкости или крови больного специфического антигена, осуществляется с помощью латекс-агглютинации, ИФА, встречного иммуноэлектрофореза с групповыми преципитирующими антисыворотками. Эти методы приобретают особое значение при неэффективности микроскопической диагностики и посевов. [c.117]

Реакция встречного иммуноэлектрофореза (РВИЭФ). Эта реакция основана на встречной диффузии в электрическом поле антигенов и антител и появлении внутри прозрачного геля видимого преципитата. В агаровом или агарозном геле делают лунки диаметром 2 — 3 мм, причем расстояние между лунками для сыворотки и АГ должно составлять 5 — 6 мм. Лунки располагают попарно (одна — для АГ, вторая — для сыворотки) или по три (одна — для АГ, вторая — для испытуемой сыворотки, третья — для контрольной сыворотки). Лунки для сыворотки располагают ближе к аноду, а для АГ — к катоду. Реакцию проводят с несколькими разведениями АГ, продолжительность электрофореза — 90 мин. Результаты реакции учитывают сразу же после окончания электрофореза, отмечая количество и локализацию линий преципитации при сравнении их с контрольной тест-системой. [c.69]

Встречный иммуноэлектрофорез. РВИЭФ в вирусологической диагностике широко применяется для обнаружения в сыворотках больных не антител, а поверхностных антигенов (например, HBsЛg у больных гепатитом В), а также для выявления других вирусных антигенов, имеющих отрицательный заряд. [c.278]

Существуют различные методы выявления HBsAg в сыворотке крови. Наиболее простым, обладающим высокой специфичностью, но и менее чувствительным, чем другие методы (ИФА, РИА и РОНГА), является РПГ. Применяют также встречный иммуноэлектрофорез (РВИЭФ). Для повышения чувствительности этих реакций рекомендуется концентрировать сыворотки с помощью высушивания в термостате при 37 °С и последующего разведения в меньшем объеме дистиллированной воды. [c.304]

В качестве поддерживающей среды можно применять и агаровый гель, но размер пор в нем гораздо больше, и движение белковых частиц происходит беспрепятственно (гель с низкой разрешающей способностью ). Большая скорость диффузии и прозрачность геля были использованы Грабаром и Уильямсом, которые создали так называемый иммуноэлектрофорез , являющийся развитием ранее существовавшего метода имму но диффузии . Суть иммуноэлектрофореза состоит в том, что для проявления электрофореграммы и идентификации белковых компонентов применяется преципитация их иммунной сывороткой крови. После предварительного электрофореза на бумаге из последней вырезают продольную полоску, не проявляя зон. Еще влажную бумагу прижимают к поверхности агарового геля. Параллельно этой полоске вырезают канавку в агаре и наливают в нее иммунную сыворотку. В результате встречной диффузии антитело встречается с антигеном происходит преципитация, и в прозрачном геле образуются дугообразные ясно видимые полосы, которые можно еще окрасить. [c.99]

На практике электросинерез наиболее часто используют в клинической диагностике для обнаружения и идентификации некоторых антигенов и антител. Многие авторы сообщали о выявлении с помощью этого метода В-антигена гепатита (австралийский антиген). В недавно опубликованном техническом отчете Всемирной организации здравоохранения ( Вирусные гепати ты , 1975) отмечается, что электросинерез (называемый также встречным иммуноэлектрофорезом) представляет собой высокоспецифический, быстрый, простой и сравнительно дешевый метод обнаружения вируса В гепатита. По чувствительности этот метод в 2—10 раз превосходит иммунодиффузию, однако суще ствуют и другие, даже более чувствительные (хотя и менее специфические) методы. При определении антител, а не антигенов чувствительность метода снижается (Отчет Всемирной организации здравоохранения, методический раздел, а также [684]), Электросинерез, подобно иммуноэлектрофорезу, можно прово-дить на пленках из ацетата целлюлозы [1338]. [c.247]

Для получения очищенного HBsAg отбирают шзму с титром 1 8 и выше по реакции встречного иммуноэлектрофореза ШЭФ), разводят в 2 раза физиологическим раствором и разливают во фла-)ны по 200 мл. Флаконы помещают в воднную баню с температурой ) 2°С и прогревают в течение 1 ч, затем флаконы охлаждают в холодной, де. [c.270]

Принципиальное отличие от рассмотренных ранее процессов встречной иммунодиффузии по методу Ухтерлони и иммуноэлектрофореза состоит в том, что здесь концентрация антител в геле остается неизменной, в то время как там в зоне преципитации она увеличивалась за счет встречного потока диффундировавших в геле антител. Этим обеспечивалось поддержание эквивалентного соотношения концентраций в зоне преципитации, а следовательно, и ее неподвижность. Продвижение фронта преципитации в методе Лорелла продолжается вплоть до полного исчерпания запаса антигена, расходуемого на образование иммунных комплексов вдоль всего пути миграции. После этого фронт преципитации останавливается, а его расстояние от лунки может служить мерой количества антигена, исходно в ней находившегося. [c.141]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология