Антитела и иммунные сыворотки

Рис. 4.4. Реакция преципитации антиген-антитело Аг — раствор антигена Ат — антитела иммунной сыворотки или одного из препаратов IgG, содержащего антитела Б — буферный раствор.

Реакции взаимодействия антигенов и антител осуществляются за счет слабых нековалентных взаимодействий. Эти реакции, происходящие в очень ограниченном пространстве, являются результатом структурной комплементарности антигенной детерминанты и участка антитела, причем сила взаимодействий зависит от комплементарности участков. Большая или меньшая сила взаимодействия выражается через сродство антитела к антигенной детерминанте. Когда речь идет об антителах иммунной сыворотки и антигенном белке, из-за присутствия в сыворотке специфических антител нескольких антигенных детерминантов разные [c.93]

Рис. 4.2. Схематическое изображение антигенов (Аг), антител (Ат), антител к иммунной сыворотке (ИС) и реакции между антигеном и антителом.

Синтезируемые в живом организме антитела гетерогенны по физико-химическим свойствам. Общая популяция антител иммунной сыворотки включает в себя антитела с различными значениями изменения свободной энергии взаимодействия с гаптеном, т. е. антитела различной аффинности Схему взаимодействия- антигена с общей популяцией антител, представляющей совокупность субпопуляций, мо>1 ет быть представлена в следующем виде [c.38]

Большая или меньшая часть антител иммунной сыворотки может реагировать с другим белком, отличающимся от белка, использованного как иммуноген. В этом случае речь идет о перекрестной реакции (схематически изображенной на рисунке 4.2 Б). Эта реакция выявляет присутствие большего или меньшего числа идентичных либо очень похожих антигенных детерминантов у этих двух белков. Антитела, участвующие в перекрестной реакции, могут не иметь одинакового сродства к этим признанным сходным эпитопам. [c.95]

Титр антител — наибольшее разведение иммунной сыворотки, при котором еще наблюдается реакция антител с антигеном. [c.307]

Если раствор антигена (например, раствор белка) в адекватных пропорциях смешать с сывороткой, содержащей специфические антитела иммунной сывороткой), то в результате реакции образуется преципитат, образованный молекулами антигена и антител. Наибольшее разведение иммунной сыворотки, при котором еще происходит реакция преципитации с антигеном, присутствующим в постоянной концентрации, называют титром данной сыворотки. Титр отражает ее активность например, сыворотка с титром 1 25 ООО считается в пять раз активнее сыворотки, имеющей титр 1 5000. [c.16]

Реакция торможения гемагглютинации (РТГА) основана на способности антител иммунной сыворотки нейтрализовать вирусы, которые в результате этого процесса теряют свойство агглютинировать эритроциты. Реакцию применяют в диагностике многих вирусных болезней, возбудители которых (вирусы гриппа, кори, краснухи, клещевого энцефалита и др.) могут агглютинировать эритроциты различных животных. [c.177]

Когда примеси, вызвавшие образование неспецифических антител, легче очистить, чем исследуемый антиген, то другой способ избавиться от неспецифических антител фракции IgG иммунной сыворотки состоит в иммобилизации на носителе этих очищенных примесей. Тогда первая элюированная фракция содержит все белки раствора IgG (включая и нужные антитела), за исключением неспецифических антител, если хроматография проводится в условиях ненасыщения. В этом случае отсутствует проблема десорбции. [c.109]

Иммунная сыворотка — на рисунке изображены антитела, специфичные к разным антигенным детерминантам, [c.94]

В практическом отношении антитела преимущественно применялись для решения проблем идентификации и количественного определения веществ. Здесь имеется в виду использование белков как природных маркеров некоторых сырьевых материалов с целью распознавания их в продуктах питания для контроля качества. С этой целью изготовлены специфические иммунные сыворотки этих белков. Так, например, методы преципитации в геле послужили для обнаружения в пшеничной муке примесей ячменной муки [76] или в муке из твердой пшеницы примесей муки из мягкой пшеницы [90, 91]. Они могут быть использованы также для проверки отсутствия клейковины в кормовых рационах [7]. В такой стране, как ФРГ, где законодательство разрешает использовать в производстве пива только солод из ячменя и хмель, исключая особенно зерно риса и кукурузы как более дешевые источники крахмала, для контроля поступающего в продажу пива применили метод иммунохимической идентификации [98]. Иммунохимический подход (метод преципитации и RIA) также использовали для контроля запрещаемых законом в некоторых странах добавок в пиво препаратов протеаз как средства стабилизации [32]. В этих двух последних случаях проблема распознавания сложна, поскольку изготовление пива предусматривает вспенивание сусла при перемешивании, пастеризацию при стерилизации, т. е. происходит в условиях денатурации белков. Задача распознавания денатурированных бел- [c.112]

При иммунохимическом исследовании вирусов растений успешно использовались иммунизированные цыплята и яичный желток как источник антител, а не иммунная сыворотка. Этот метод позволяет в короткое время получать значительное количе--ство антител он облегчает очистку иммуноглобулинов IgG позволяет избежать кровопускание у животных [108]. [c.97]

При этих методах используются две системы антиген — антитело с одной стороны, подлежащая изучению система антиген — антитело и, с другой — система красных кровяных телец барана и антиэритроцитарных антител барана. Метод состоит из двух этапов увеличивающееся количество антигена добавляют к одному и тому же количеству антисыворотки против этого антигена (ее предварительно освобождают от комплемента нагреванием до 56 °С), к которому прибавляют определенное количество комплемента морской свинки. Контролем является только иммунная сыворотка, антигены испытывают параллельно. В ходе этой реакции (24 ч при 4 °С) какая-то часть комплемента морской свинки свяжется с иммунными комплексами по мере завершения в каждом образце реакции антиген — антитело. Несвязанную часть комплемента количественно определяют на втором этапе [c.103]

A. Антитела, специфичные к изучаемому антигену (обычно фракция иммуноглобулина G иммунной сыворотки), связываются на дне пробирок нлн в микрокюветах, встроенных в пластиковые планшеты. [c.107]

Образование преципитата зависит от ряда факторов. Наиболее существенными из них являются титр иммунной сыворотки, соотношение концентраций антигена и антител, а также видовая принадлежность иммунной сыворотки. [c.17]

Рис. 82, А. Двухмерная двойная иммунодиффузия из прямоугольных канавок. / — канавка для антигена — канавка для антител. Б. Иммуноэлектрофорез. Л 5—5 — электрофорегически разделенные компоненты смеси антигенов 2 прямоугольная канавка для смеси антигенов (стартовая зона электрофореза) б —канавка для антител (иммунной сыворотки).

Если по окончании электрофоретического разделения белков в агаровом геле навстречу им диффундирует специфическая иммунная сыворотка, то в местах встречи антигена и антител образуются дугообразные полосы преципитации, каждая из которых соответ- [c.20]

Иммунная сыворотка, используемая в реакциях преципитации, должна иметь титр антител не менее 1 10 ООО. [c.119]

Реакция считается положительной, если в пробирке образуется преципитат. В случае известной иммунной сыворотки это указывает на присутствие соответствующего белкового антигена в случае известного белкового антигена — на присутствие специфических антител в исследуемой антисыворотке. [c.120]

Для успешного проведения ряда иммунохимических исследований необходимо, чтобы реакция преципитации осуществлялась в так называемой зоне эквивалентности, т. е. при оптимальных количественных соотношениях антигенов и антител, вступающих в реакцию. С помощью метода разведений, описанного выше, эту зону можно определить следующим образом. Готовят ряд двукратных разведений иммунной сыворотки в объеме 0,2—0,5 мл и в каждую пробирку вносят равный объем раствора антигена в том разведении, при котором еще происходит реакция преципитации. Пробирки инкубируют при 37°С в течение 60 мин, оставляют на ночь в холодильнике и учитывают реакцию на следующий день. [c.122]

Принцип метода. Определяют те количества антигена и иммунной сыворотки, которые без остатка вступают в реакцию преципитации после их перемешивания, так что надосадочная жидкость после отделения осадка не содержит ни антигена, ни антител. [c.123]

Готовят серию двукратных разведений раствора антигена известной концентрации (см. стр. 121). 0,1 мл раствора антигена каждого разведения смешивают с 0,5 мл иммунной сыворотки. В зависимости от активности антисыворотку можно применять либо неразведенной, либо в разведении 1 2 или 1 4. Смесь инкубируют 60 мин при 37°С и оставляют до следующего дня в холодильнике. Образовавшийся преципитат осаждают центрифугированием при 1500 об/мин 10 мин и в надосадочной жидкости определяют оставшийся антиген или антитела, как описано на стр. 120. Проба, в которой надосадочная жидкость не содержит ни антигена, ни антител, позволяет обнаружить зону эквивалентности. [c.123]

Область применения. Определение титра антител в иммунных сыворотках. [c.123]

Принцип метода. Если реакция преципитации происходит в зоне эквивалентности, то, определив азот преципитата, можно вычислить соотношение реагирующих компонентов. Вычитая из количества азота преципитата известное количество азота антигена, можно вычислить количество азота антител в исследуемой иммунной сыворотке. [c.125]

Область применения. Определение азота антител в исследуемых иммунных сыворотках с помощью раствора антигенов известной концентрации. Определение концентрации белковых антигенов при помощи антисывороток с известной концентрацией азота антител. [c.125]

Определение зоны эквивалентности. Чтобы определить, в какой из пяти пробирок реакция преципитации действительно проходила в зоне эквивалентности, в надосадочной жидкости каждой пробы (1) определяют избыток антигена или антител, добавляя соответственно иммунную сыворотку или раствор антигена (см. стр. 120). [c.126]

Преципитация обычно максимальна в тех пробирках, надосадочная жидкость (I) которых содержит небольшой избыток антигена. Можно определить количество азота антител в исследуемой антисыворотке, если вычесть известное количество азота антигена из количества азота в преципитате такой пробы. Результаты обычно выражают количеством азота антител в 1 мл иммунной сыворотки. [c.126]

Полосы преципитации, как правило, располагаются в том участке геля, в котором создается оптимальное соотношение концентраций антигена и антител. При относительно большем разведении антисыворотки реакция преципитации происходит вблизи границы агара, содержащего иммунную сыворотку. Если же используются относительно разбавленные растворы антигена, реакция преципитации наблюдается ближе к границе агарового слоя, содержащего антиген. В соответствии с этим располагаются полосы преципитации. [c.130]

Принцип метода. Растворы антигена и иммунной сыворотки диффундируют навстречу друг другу в плоском слое агарового геля. В месте встречи антигена и антитела образуется преципитат. [c.131]

Б — перекрестная реак11ия— антитела иммунной сыворотки реагируют с другим белком, отличающимся от иммуногена, который несет эпитоп, сходный с одним из эпитопов имму-иогена, [c.94]

Реакция нейтрализации (PH). Антитела иммунной сыворотки способны нейтрализовать повреждающее действие микроорганизмов или их токсинов на чувствительные клетки ткани. Это связано с блокадой микробных антигенов антителами, т. е. их нейтрализацией. При постановке реакции смесь антиген — антитело, полученную in vitro, вводят животным или вносят в культуру клеток. При отсутствии повреждающего действия микроорганизмов или их антигенов и токсинов говорят о нейтрализующем действии иммунной сыворотки и, следовательно, специфичности взаимодействия комплекса антиген — антитело. [c.179]

Ввиду поливалентности белковых антигенов, бивалентности антител и присутствия в иммунной сыворотке популяции антител, специфичных к разным антигенным детерминантам, реакция взаимодействия между антигеном и антителом создает комплекс, образование решетки которого зависит от соотношения количеств антигена и антител. На рисунке 4.2 Л показаны три экстремальные ситуации. Эта характерная особенность реакции антигена и антитела очень важна для принципов нескольких иммунохимических методов. [c.95]

Хорошо известная трудность в получении иммунных сывороток состоит в изменчивости иммунного ответа не только у отдельно взятых особей одного и того же вида, но также у одной и той же особи в ходе иммунизации [89]. Так, пробы иммунных сывороток, взятые у нескольких животных или у одного и того же животного в процессе иммунизации, представляют собой гетерогенный набор молекул с разными антигенсвязывающими центрами и различной аффинностью к антигену. Это относится даже к антителам, специфическим к отдельному эпитопу. Практически, чтобы получить достаточный запас однородной иммунной сыворотки, приходится делать смеси сывороток, полученных разными отборами их у иммунизированных животных. [c.96]

А. Иммуноэлектрофоретический анализ (ИЭА) [41], Антигены вначале разделяют путем электрофореза в агарозном геле, Верхняя часть рисунка демонстрирует классическое расположение ИЭА нижняя часть ИЭА называется тандемной стрелки показывают положение лунок, в которые заливают перед электрофорезом растворы антигенов. После электрофореза в геле параллельно направлению электрофоретической миграции прорезается канавка, которая заполняется иммунной сывороткой. Антитела и антигены диффундируют в гель, встречаются и образуют дуги преципитации, [c.102]

Б. В Иммуноэлектродиффузия или ракетный иммуноэлектрофорез [66], Гель агарозы содержит равномерно распределенную иммунную сыворотку. В лунки внесены антигенные растворы разных концентрации. Электрофоре. проводится при pH, при котооом антитела не мигрируют либо мигрируют очень мало. Антигены под действием электрического поля мигрируют в геле, содержащем антитела. Комплексы при избытке антигенов вначале растворимы, продолжают мигрировать в ходе электрофореза, а также посредством диффузии, обогащаются антителами, н, когда соотношение антигенов и антител достигает точки эквивалентности, они осаждаются в форме ииков. [c.102]

Некоторые методы требуют использования моноспецифических иммунных сывороток. Основной момент при этом — контроль моноспецифичности препаратов антител, который достигается методом специфической преципитации в геле между иммунной сывороткой и экстрактом, из которого иммуноген был очищен. Наличие более одной линии преципитации показывает, что сыворотка неспецифична. Трудность контроля нередко заключается в том, что моноспецифичность иммуносыворотки проверяется методами, имеющими определенный порог чувствительности (например, методом двойной диффузии), тогда как иммунная сыворотка используется при методах с намного более высокой [c.113]

В сущности все методы иммунодиффузии основаны на явлении, которое наблюдал Бекхольд взаимодействии антиген — антитело в геле. Растворимый белковый антиген и иммунная сыворотка диффундируют в геле навстречу друг другу. В месте встречи обоих реагентов возникает полоса преципитации, которую можно легко наблюдать и регистрировать. [c.18]

Центрифугируя реакционную смесь при положительной реакции преципитации, можно удалить образовавшийся преципитат и определить, какой из лвух компонентов системы, антиген или антитело, остался в надосадочной жидкости. Тем самым удается выяснить, в избытке какого компонента проходила реакция. Для этого половину надосадочной жидкости смешивают с равным объемом иммунной сыворотки, а к другой половине добавляют возрастающие количества раствора антигена (см. предыдущий раздел). Образование преципитата в первом случае свидетельствует об избытке антигена, во втором — об избытке антител. Подобным образом можно определить оптимальное соотношение антиген — антитело для положительной реакции преципитации. [c.121]

Принцип метода. При внесении в специфическую иммунную сыворотку растворимого белкового антигена происходит реакция преципитации. Количество преципитирующих антител в неразведен-ной или в разведенной в 10 раз антисыворотке можно охарактеризовать тем наибольшим разведением антигена, которое еще способно вызвать реакцию преципитации с данной сывороткой это раз-ведение называется титром преципитинов. [c.121]

Необходимые для постановки этой реакции количества антигена и антисыворотки зависят от чувствительности выбранного метода определения белка. Так, например, при использовании микрометода Кьельдаля в модификации Маркхема вполне достаточно, чтобы иммунная сыворотка содержала 75—125 мкг азота антител. При использовании биуретовой реакции требуется вдвое [c.126]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология