Антиген—антитело, определение

Высокая специфичность антител по отношению к антигену делает их гибким и действенным инструментом, который можно использовать для выявления, количественного определения и локализации множества разнообразных веществ, представляющих интерес для биолога. Но как можно обнаружить или измерить взаимодействие антитела с антигеном Начальная реакция связывания антигена с антителом-так называемая первичная реакция-может быть измерена многими различными способами. При радиоиммунном анализе, позволяющем определять даже ничтожные количества материала, известное количество радиоактивного антигена вместе со стандартным количеством антител добавляют к образцу, содержащему неизвестное количество того же антигена в нерадиоактивной форме. Немеченый антиген конкурирует с меченым за связывающие участки антител, и чем больше данного антигена в образце, тем меньше радиоактивного антигена будет связано с антителом. Свободный радиоактивный антиген можно отделить от связанного, а затем измерить количество того и другого с помощью ряда методов, использующих различия в свойствах свободных и связанных молекул один нз общих подходов состоит в осаждении (преципитации) комплексов антиген-антитело антителами к иммуноглобулинам (рнс. 17-28). [c.27]

А. взаимодействуют с рецепторами лимфоцитов и с антителами, определенными участками своей молекулы, т. наз. антигенными детерминантами, к-рыми собственно и определяется специфичность А. Впервые это было показано К. Ландштейнером, использовавшим в кач-ве А. белки с присоединенными к ним хим. группировками (т. наз. гаптенами). Животное в ответ на введение такого антигена образует антитела, специфичные не только к белку-носителю, но и к гаптену, к-рый является, т. обр., одной из антигенных детерминант использованного сложного А. [c.174]

Реакция Николаева основана на идентификации величины белковой корпускулы по способности выпадать в осадок при определенной концентрации сульфата аммония. Известно, что чем больше относительная молекулярная масса белковой молекулы, тем при меньшем насыщении соли она выпадает в осадок. Антитела и антигены любой специфичности и природы будут иметь корпускулы меньшей относительной молекулярной массы, чем образуемые при их взаимодействии иммунные комплексы, состоящие не менее чем из 2 молекул. Следовательно, выпадение белков в такой системе будет происходить при добавлении меньшего количества химического реагента, чем в случае, когда реакция антиген — антитело не произойдет. В связи с этим учет реакции основан на сравнении объемов раствора сульфата аммония, необходимого для появления заметной мути (т. е. начала выпадения глобулинов) в опытных и контрольных пробирках. Достигается это повторными добавлениями равных объемов соли (по 0,1 мл, а затем по каплям) и регистрацией мути (визуально или с помощью нефелометра). Если при достижении некоего объема раствора соли муть появится лишь в опытных пробирках, но будет отсутствовать в контрольных, реакцию считают положительной, а разведение сыворотки принимают за титр. В реакции используют сыворотки и их разведения в объеме 1 мл (реже 0,5 мл), а антиген в объеме 0,1 мл. Добавление сульфата аммония начинают через 2—3 мин после тщательного смешивания антигена с сывороткой. [c.247]

Кроме процессов узнавания в системе антиген—антитело определенный порядок чередования положительно и отри- [c.52]

Иммуноглобулины из-за своей поразительной специфичности стали исключительно важным инструментом биохимического анализа. Методы, основанные на образовании комплексов антител с антигенами или гаптенами, называют иммуноанализом. Иммуноанализ используется либо для определения определенных антигенов с помощью специфических к этим антигенам антител, либо, наоборот, для детекции антител определенной специфичности с помощью соответствующих антигенов. И та, и другая задача имеет широкий спектр применений в фундаментальных биохимических исследованиях, в биотехнологии, в медицинской практике и для оценки состояния окружающей среды. [c.256]

При этих методах используются две системы антиген — антитело с одной стороны, подлежащая изучению система антиген — антитело и, с другой — система красных кровяных телец барана и антиэритроцитарных антител барана. Метод состоит из двух этапов увеличивающееся количество антигена добавляют к одному и тому же количеству антисыворотки против этого антигена (ее предварительно освобождают от комплемента нагреванием до 56 °С), к которому прибавляют определенное количество комплемента морской свинки. Контролем является только иммунная сыворотка, антигены испытывают параллельно. В ходе этой реакции (24 ч при 4 °С) какая-то часть комплемента морской свинки свяжется с иммунными комплексами по мере завершения в каждом образце реакции антиген — антитело. Несвязанную часть комплемента количественно определяют на втором этапе [c.103]

В заключение укажем также на возможность использования реакции Брдички для изучения различных тонких взаимодействий белковых молекул (например, взаимодействий антиген — антитело и др. [336]), для определения малого содержания протеинов, металлов и решения других научных и практических задач биологии и смежных наук. В этом плане представляет интерес высказывание Б. А. Кузнецова о том, что применение полярографического метода в биологической науке позволит получить много ценных данных возможности здесь почти неисчерпаемы [И, с. 304]. [c.242]

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ЗОНЫ ЭКВИВАЛЕНТНОСТИ РЕАКЦИИ АНТИГЕН—АНТИТЕЛО [c.123]

Определение оптимального соотношения антиген — антитело. Зону эквивалентности антиген —антитело определяют в предварительных экспериментах (см. стр. 123). [c.125]

При анализе содержания в образце антител определенной специфичности можно использовать так называемый белок А из стафилококка, который обладает специфическим сродством к константной части антител в комплексе с их антигенами или гаптенами. Образование комплекса антиген — антитело регистрируется после удаления избытка антитела по взаимодействию конъюгата белка А с детектируемой меткой, например пероксидазой. [c.258]

Один иэ центральных вопросов иммунологии — каким образом организм включает биосинтез антител определенной специфичности, комплементарных введенному антигену,— был решен Ф. Бернетом. разработавшим так называемую теорию клональной селекции. Согласно этой теории, существует множество клонов лимфоцитов, каждый из которых несет на своей поверхности рецептор уникальной специфичности. Попадающий в организм антиген связывается с комплементарным ему рецептором, в результате чего клеточный клон размножается и начинает секретировать антитела той специфичности, которую имел рецептор. [c.209]

Специфичность действия ферментов можно объяснить с точки зрения образования фермент-субстратного комплекса и теории замка и ключа . Для присоединения субстрата или отщепления продуктов реакции необходима определенная молекулярная конфигурация фермента, обусловленная специфической последовательностью аминокислотных остатков и вторичной структурой, а также определенные электрические свойства фермента. То же самое относится и к реакции антиген — антитело. [c.361]

Л. а. используют в иммунохим. анализе для определения антител, гормонов, лек. препаратов, вирусных и бактериальных антигенов по концентрации комплекса антиген-антитело. При этом в иммунном флуоресцентном анализе к антителу непосредственно присоединяют флуоресцирующие в-ва, напр. РЗЭ, флуоресцирующие красители (чувствительность метода 10" моль/л), а в иммуноферментном анализе к антителу присоединяют фермент и в результате ферментативной р-ции, сопровождаемой биолюминесценцией, определяют ферментативную активность (чувствительность метода 10" моль/л). [c.614]

Взаимодействие антиген—антитело используется при изучении строения углеводов и углеводсодержащих полимеров, выделении из смесей, определении одно родности и степени чистоты препаратов. [c.102]

Формальдегид сильно препятствует образованию водородных связей в денатурированной ДНК [395—397[, стабилизируя довольно вытянутую конформацию ее молекул это приводит к уменьшению устойчивости по отношению к ферментативному гидролизу и намного увеличивает эффективность образования комплексов антиген — антитело [396]. На микрофотографиях ДНК, обработанной формальдегидом, видны длинные тонкие нити с диаметром, значительно меньшим, чем у нативной ДНК [397]. Очень удачные микрофотографии были получены для денатурированной ДНК, обработанной диазониевой солью 8-амино-1,3,6-нафталин-трисульфокислоты (связывающейся, по-видимому, с Сз гуаниновых остатков) с последующим прокрашиванием уранилацетатом в разбавленном растворе формальдегида. Маркер отчетливо виден на микрофотографии, и вполне вероятно, что этот метод может быть использован для электронномикроскопического определения последовательности оснований в нуклеиновых кислотах [397]. [c.608]

Иммунная система выработалась в процессе эволюции позвоночных для защиты от инфекций. Она состоит из миллиардов лимфоцитов и включает миллионы различных клонов. Лимфоциты каждого клона несут на своей поверхности рецептор, который позволяет им связывать ту или иную антигенную детерминантун-определенную группировку в молекуле антигена. Существуют два класса лимфоцитов В-клетки, вырабатывающие антитела, и Т-клетки, которые осуществляют иммунные реакции клеточного типа. [c.19]

Уже давно было найдено, что комплемент соединяется с комплексом антиген — антитело. Благодаря происходящему при этом гемолизу можно идентифицировать ничтожные количества комплемента. Эта проба является самым чувствительным методом из всех используемых для обнаружения соединения антигена с антителом. Эритроциты, подвергающиеся действию соответствующего агглютинина, соединяются сперва с С 1, С 2 и С 4, а затем уже с С З [127]. Количественное определение каждого из этих четырех компонентов представляет большие трудности вследствие того, что любой из них обнаруживается лишь в присутствии трех других компонентов, а также потому, что их концентрация в сыворотке очень низка. [c.348]

Э. обладают высокой биол. активностью, причем их активные концентрации на 1-3 порядка ниже, чем у др. стероидных гормонов. Для количеств, определения Э. в биол. жидкостях применяют радиоиммунологич. и иммуноферментный методы, основанные на р-ции антиген-антитело, где в качестве антигена используют конъюгированный с Э. белок. [c.490]

Во многих определениях существует значительная разница в размерах рецептора и лигавда. Антитела имеют молекулярные массы порядка 160 ООО и могут быть легко отделены от антигенов с молекулярной массой менее 80 ООО. Наиболее широко ддя этой цели применяется эксклюзионная гель-фильтрующая хроматография. Небольшой свободнь1й меченый антиген удерживается на колонке, в то время как объемистый комплекс антиген-антитело элюируется. Метод обеспечивает хорошее разделение, но он дорог н требует затрат времени, так что он не подходит для рутинного, многократного использования. [c.578]

Для определения концентрации гормона смешивают меченный, например ИОДОМ-125, гормон с антителами к данному гормону. Образуется комплекс — гормон—антитело. При добавлении исследуемого экстракта немеченный гормон, находящийся в исследуемом растворе, конкурирует с меченым в реакции связывания с антителом, вытесняя последний из комплекса. Далее освобождеиный гормон отделяют от связанного электрофорезом, хроматографией или осаждением и количественно определяют его, измеряя радиоактивность. Из полученных данных можно рассчитать количество исследуемого немеченого гормона, так как радиоактивность свободного гормона зависит от того, насколько много меченого гормона было вытеснено из комплекса антиген — антитело. Более подробно с этим вопросом можно ознакомиться по литературе [582, 591]. [c.240]

Взаимодействие антиген—антитело, основанное на компле-ментарности определенных участков структуры антигена и белкового антитела, отличается чрезвычайно высокой чувствительностью и специфичностью. В области полисахаридов иммунологические реакции используются как для определения гомогенности и степени чистоты образца, так и для изучения структуры . [c.518]

Определение малых концентраций комплекса антиген—антитело, образовавшегося в растворе, становится возможным, если в один из исходных компонентов реакционной системы (антиген или антитело) ввести метку, которая легко детектируется соответствующим высокочувствительным инструментальным методом. Поскольку комплекс между определяемым соединением (антигеном) и специфическим антителом образуется строго стехиометрично, экспериментально устанавливаемая концентрация метки, входящей в состав образующегося иммунохимического комплекса, непосредственно связана с концентрацией антигена. [c.114]

Метка при этом должна содержаться в том компоненте, который образует комплекс с анализируемым веществом. Например, для анализа определенного антигена нужно располагать антителом, специфичным к этому антигену, ввести в него метку (радиоактивную, ферментную, люминесцентную и т.д.) и количественно перевести анализируемое вещество в комплекс. Для того чтобы достичь максимального уровня этого перехода, меченое антитело нужно брать в избытке. Но тогда нужно предусмотреть процедуру отдейения комплекса от избытка меченого антатела. Для этих целей используют иммобилизацию анализируемого компонента на твердой поверхности. В этом случае комплекс антиген — антитело остается на поверхности, тогда как избыток меченого антитела, не вошедший в состав комплекса, легко удаляется. [c.258]

Иммуноглобулины. Все 5 классов иммуноглобулинов человека содержат углеводы, причем IgG, IgM и IgE несут только М-глико-зидные цепи, а IgA и IgD также и О-гликозидные. N-Гликозид-связанные олигосахариды расположены в F -областн тяжелых цепей (см. с. 215). В таблице 20 приведены некоторые структуры углеводных цепей разных клвссов иммуноглобулинов, определенные для миеломных белков в начале 70-х годов С Корнфельдом с сотрудниками. Как уже упоминалось выше, олигосахаридные цепи IgM и IgG обеспечивают рецепцию комплексов антиген — антитело соответственно макрофагами и клетками печени. [c.503]

Размеры н состав комплексов антиген-антитело важны не только потому, что они влияют на реакции преципитации в пробирках они играют также решающую роль в определении судьбы т их комплексов в организме. Комплексы, образующиеся при эквивалентности или при избытке антител, имеют много выступающих Рс-обласгей (рис. 17-32) и поэтому прочно связываются с Рс-рецепторами макрофагов и поглощаются этими клетками. Небольшие комплексы, образующиеся при избытке антигена, имеют лишь по одной Гс-области (рис. 17-32). Поэтому они слабо связываются с Гс-рецепторами на макрофагах и разрушаются менее эффективно. Вместо этого они часто осаждаются в межих кровеносных сосудах кожи, почек, суставов и мозга, где активируют систему комплемента, вызывая воспаление и деструкшпо тканн. [c.29]

Широкие стереохимические проблемы встают в связи с изучением агрегатов, образуемых антигенами с антителами. Если количественное соотношение антигена и антитела лежит в опре деленных пределах, то агрегаты антиген—антитело обычно нерас-гворимы. Эти агрегаты обладают некоторыми специальными свой сгвами, такими, как способность фиксации (связывания) комплемента, освобождение гистамина из некоторых его комплексен в клетках и, возможно, активации определенных протеолитических энзимов (ферментов). Высказан ряд гипотез, объясняющих эти явления может быть, они связаны с особой конформацией реагирующего антитела, а возможно, что некоторые черты и особенности структуры агрегата антиген—антитело могут определять эти специфические свойства. [c.688]

Гольдберг (Goldberg, 1952), используя метод определения размеров молекул трехмерных полимеров, предложенный Шток-меером (Sto kmayer, 1943), сделал вывод о том, что агрегаты антиген—антитело объединяются и растут до критической точки , по достижении которой небольшое число больших агрегатов образуется соединением агрегатов среднего размера такие крупные агрегаты выпадают в осадок. [c.692]

Иммунологически активные полисахариды. — Чужеродные белки (антигены), введенные в организм животного, стимулируют образование в крови веществ (антител), которые способны соединяться с антигенами. Е заимодействие антигенов с антителами может привести к образованию осадка (реакция преципитации). Так как такими чужеродными белками являются токсины или другие ядовитые выделения различных патогенных организмов, то, очевидно, реакция антиген— антитело представляет собой основу иммунитета к определенному виду инфекционного заболевания. Эта реакция в высокой степени специфична например, пневмококки принадлежат к одному из четырех серологических типов, и организмы, обладающие иммунитетом по отношению к одному из них, как правило, не иммунны к другому. [c.565]

Иммунохимич. и иммунологич. методы применяются не только для диагностики заболеваний (выявление специфичных антител в крови заболевших), но также и для определения и идентификации белков в сложных смесях по их антигенным свойствам. Важнейшим иммунохимич. методом, позволяющим определять абсолютное содержание антител и антигенов в системах, где в результате реакции между этими веществами выпадает осадок, является метод М. Гей-дельбергера. Он основан на осаждении антител антигеном и определении количества белка, выпавшего в осадок. Более универсальным является метод определения абсолютного количества антител по приросту белка на иммуносорбентах. Чувствительность этих методов 1 — 4 мкг азота антител. [c.112]

Определение непреципитирующих антител путем дробного высаливания сульфатом аммония комплекса антиген — антитело было разработано А. И. Николаевым для выявления антител к растворимым белковым антигенам, а позже совместно с И. Я. Усмановой использовано для обнаружения противопестицидных антител, т. е. антител к химическим промышленным аллергенам. [c.245]

Автор называет свой метод определения непреципити-рующего комплекса антиген — антитело методом дробного высаливания. По-видимому, в данной реакции возможно определение антител или типа гемагглютинирующих, или типа выявляемых в РСМП по Уанье. [c.247]

Антитела — не единственные высокомолекулярные соединения, обладающие специфической биологической активностью. Ферменты, которые тоже являются белками, и гормоны, многие из которых — белки, также обладают этим свойством. Ферменты—наиболее яркие представители веществ такого рода—имеют различную степень специфичности. Некоторые ферменты, например мальтаза солода и сук-цинатдегидрогенеза, высоко специфичны каждый из них катализирует одну и только одну реакцию. Специфичность других ферментов проявляется лишь по отношению к определенной химической группе, входящей в состав молекулы их субстрата. Ферменты, катализирующие реакции, в которых принимают участие оптически активные вещества, например сахара или аминокислоты, часто реагируют преимущественно или исключительно с одной из энантиоморфных форм. Даже такой фермент, как трипсин, действует только на некоторые связи субстрата. Действие фермента можно подавлять, увеличивая концентрацию одного из соединений, образующихся в результате той реакции, которую катализирует данный фермент, — явление, очень напоминающее специфическое подавление реакции антиген — антитело гаптеном. [c.81]

В Простых случаях возможно аналитическое решение в более сложных случаях для определения формы профиля седиментации применяется численное интегрирование. Джилберт и Джилберт [25] на примере реакций антиген — антитело проанализировали, какого рода данные можно получить в экспериментах с переносом вещества. Они вычисляли распределения концентраций [c.168]

Связь между структурой антигена и специфичностью антитела была впервые установлена в классических работах Ландштайнера [1], который ввел большое количество группировок известной структуры в белки и показал, что введенные группы могут служить детерминантами специфичности антител. Специфичность взаимодействия антиген — антитело возникает за счет комплементарности определенных участков антител-глобулинов и активных групп антигенной структуры. Антисыворотки с выясненной специфичностью представляют собой поэтому набор разнообразных уникальных реагентов, которые можно применять для получения информации о структуре. Более того, высокая чувствительность и специфичность иммунологических реакций делают их особенно ценными как независимый источник сведений о химическом строении и гомогенности иммунологически активных соединений. [c.430]

Применение иммунологических методов в препаративных целях осложняется прочностью и специфичностью комплекса антиген— антитело. Некоторые комплексы можно разложить только с одновременной деструкцией одного из компонентов, обычно антигена при этом освобождается антитело [371—373]. Антитела против полисахаридных (пневмококковых) антигенов можно отделить [374—376] в концентрированном растворе Na l (1,8 М), причем получаются растворы антител различной степени чистоты. Как показывают результаты измерения содержания азота в осажденных антителах, степень чистоты таких растворов нередко приближается к 100% . Успех применения этого метода, повидимому, частично зависит от эффективности антисыворотки, применявшейся для преципитации. Антитела белковых антигенов, например дифтерийный антитоксин, не могут быть выделены при помощи такого простого метода. Оказалось целесообразным гад-ролизовать белковый антиген пепсином или трипсином в определенных условиях при этом удается выделить только 30—60% указанного антитоксина [377]. Сырой дифтерийный антитоксин, полученный в результате обработки трипсином, не является, как показывает проба на постоянство растворимости, чистым, хотя токсином можно осадить 95% его. Этот препарат был разделен [c.79]

Иммобилизованные ферменты применяют для автоматического анализа биологических субстратов и лекарственных веществ как покрытые электроды (электрохимические датчики, на которые нанесен слой иммобилизованного фермента) в методах сухой химии (слои реагентов и ферментов, при прохождении через которые происходит реакция и образуется окрашенное вещество). 2. Иммуноферментный анализ используют для определения природных лекарственных веществ и ксенобиотиков. Суть его в том, что молекула фермента, соединенная с антигеном или антителом, служит индикатором реакции антиген - антитело в среде. Измеряя активность фермента, можно сказать, сколько молекул антигена вступило в иммунохими-ческую реакцию с антителом. 3. Биотехнология лекарственных препаратов предполагает использование иммобилизованных ферментов в синтезе лекарств. За счет специфичности ферментов в оптималь- [c.478]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология