Клеточная поверхность маркирование

РАДИОАКТИВНОЕ МАРКИРОВАНИЕ И ИММУНОСПЕЦИФИЧЕСКОЕ ВЫДЕЛЕНИЕ МАКРОМОЛЕКУЛЯРНЫХ КОМПОНЕНТОВ КЛЕТОЧНОЙ ПОВЕРХНОСТИ [c.181]

При высоком проценте жизнеспособных клеток в исходной взвеси радиоактивный иод связывается главным образом с клеточной поверхностью. Поэтому поверхностные компоненты клеток обычно включают больше метки, чем при биосинтетическом маркировании. Например, антигены главного комплекса гистосовместимости, выделенные с помощью электрофореза в полиакриламидном геле с ДСН из лизата иодированных куриных, лейкоцитов, содержат 0,05—0,2% метки, а те же антигены, полученные из клеток, включавших - Н-лейцин или Н-лизин в ходе [c.182]

К сожалению, эффективность этой реакции очень низка. Чтобы включить в клетки достаточное количество маркера, требуется избыток боргидрида (обычно включается 0,1% внесенной радиоактивности). Таким образом, если нужно пометить белок, содержащий сиаловую кислоту или галактозу, 0,1% которых доступна для реакции на клеточной поверхности, необходимо взять по меньшей мере 10 мКи NaB H4, чтобы получить включение 10 000 имп/мин. Даже при избытке боргидрида происходит восстановление не более чем 10% остатков сиаловой кислоты и галактозы, обычно же — меньше 1%. Однако этот метод вполне пригоден для маркирования углеводов и гликопротеидов тех клеток (например, эритроцитов и спермиев), которые не способны легко включать радиоактивные сахара. [c.186]

Выделение иммуноглобулинов, связанных с поверхностью клетки, а также их внутриклеточных предшественников (или предшественников секреторных Ig) всегда сопряжено со значительными трудностями. Радиомаркирование, позволяющее выявить следовые количества Ig, облегчает решение этой задачи. После маркирования клетки солюбилизируют в детергенте и обрабатывают лизаты сывороткой анти-Ig, полученной у другого вида иммунные комплексы обычно осаждают затем второй антисывороткой к Ig первой антисыворотки. Меченые клеточные lg, находящиеся в преципитате, исследуют методом электрофореза в полиакриламидном геле с додецилсульфатом натрия (ДСН) в присутствии восстанавливающих агентов или без них (Laemmli 1970). Меченые полипептидные цепи, разделенные в геле, опре- [c.77]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология