Радиоактивное маркирование

РАДИОАКТИВНОЕ МАРКИРОВАНИЕ И ИММУНОСПЕЦИФИЧЕСКОЕ ВЫДЕЛЕНИЕ МАКРОМОЛЕКУЛЯРНЫХ КОМПОНЕНТОВ КЛЕТОЧНОЙ ПОВЕРХНОСТИ [c.181]

Простейший способ маркирования белков заключается в прямом замещении в ароматическом кольце тирозина или гистидина. Однако распад радиоактивного нуклида передает молекуле энергию, которая превышает энергию химических связей, и, следовательно, существует опасность разрыва соседних связей и нарушения молекулярной структуры. Таким образом, хотя высокий уровень [c.581]

До недавнего времени источником всех данных по биосинтезу поликетидов было применение меченых соединений [97], содержащих (иногда) или С (большей частью). Конечно, параллельно развивались исследования в других областях применения радиоактивных изотопов в биохимии этой теме посвящено несколько монографий [100—103]. Оба изотопа являются источниками мягкого (3-излучения периоды их полураспада достаточно велики, что позволяет осуществить их транспортировку и исключает необходимость введения поправок на распад в ходе эксперимента ( Н обладает меньшим периодом полураспада срок годности меченых соединений ограничивает не их распад, а индуцированное радиацией химическое разложение препаратов). Современное оборудование позволяет определять оба изотопа легко, с высокой степенью точности (часто взвешивание образца менее точно, чем подсчет уровня радиоактивности) и чувствительности достаточно часто надежно определяются продукты реакции с активностью в несколько стотысячных долей от исходной. Один и тот же образец может быть использован для одновременного и независимого определения и С, что делает метод двойного маркирования особенно удобным. Менее точные методы определения радиоактивности используют при различных способах хроматографического разделения смесей. [c.470]

При высоком проценте жизнеспособных клеток в исходной взвеси радиоактивный иод связывается главным образом с клеточной поверхностью. Поэтому поверхностные компоненты клеток обычно включают больше метки, чем при биосинтетическом маркировании. Например, антигены главного комплекса гистосовместимости, выделенные с помощью электрофореза в полиакриламидном геле с ДСН из лизата иодированных куриных, лейкоцитов, содержат 0,05—0,2% метки, а те же антигены, полученные из клеток, включавших - Н-лейцин или Н-лизин в ходе [c.182]

К сожалению, эффективность этой реакции очень низка. Чтобы включить в клетки достаточное количество маркера, требуется избыток боргидрида (обычно включается 0,1% внесенной радиоактивности). Таким образом, если нужно пометить белок, содержащий сиаловую кислоту или галактозу, 0,1% которых доступна для реакции на клеточной поверхности, необходимо взять по меньшей мере 10 мКи NaB H4, чтобы получить включение 10 000 имп/мин. Даже при избытке боргидрида происходит восстановление не более чем 10% остатков сиаловой кислоты и галактозы, обычно же — меньше 1%. Однако этот метод вполне пригоден для маркирования углеводов и гликопротеидов тех клеток (например, эритроцитов и спермиев), которые не способны легко включать радиоактивные сахара. [c.186]

Рис. 77. Авторадиограмма и кривая оптической плотности никелевого покрытия, осажденного из ванны Ваттса, содержащей натрий-алилсульфонат, маркированный радиоактивной серой 35 3 (по Бикому, Рилею и Эльзе)

Метод лактопероксидазного иодирования технически несложен при этом выявлять радиоактивный иод (с помощью Y-счетчика или радиоавтографии) гораздо проще, чем тритиевую метку. Кроме того, определенные типы клеток (например, эритроциты и спермин) в процессе биосинтеза могут включать лишь очень небольшое количество метки в этих случаях для маркирования мембранных белков иодирование становится методом выбора. [c.182]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология