ИПМ авидин-биотиновая система

Первый подход заключается в том, что вместо Р-нуклеотида в ДНК-зонд внедряется химически модифицированный нуклеотид, например, биотинированная duTP, аналог dTTP. Модифицированные нуклеотиды внедряются стандартным способом, например ник-трансляцией, но с меньщей скоростью. Гибридизованный ДНК-зонд с биотиновой меткой детектируют по его взаимодействию с биотин-связы-вающими белками, такими как авидин или стрептавидин, в комплексе с ферментами, например пероксидазой хрена, кислой и щелочной фосфатазой, дающими окращенные продукты, или же с помощью системы двойных антител, используя сначала антибио-тиновые антитела и затем флуоресцирующее вторичное тело. [c.75]

Рис. 5.4. Калибровочный 1рафик определения ЬОН, полученный с использованием авидин-биотиновой системы, авидина, меченного ферментом, и спектрофотометрической системы регистрации сигнала.

Применение методов на основе авидин-биотиновой системы [c.414]

Важнейшее преимущество методов анализа, основанных на применении авидин-биотиновой системы, заключается в том, что любое вещество, конъюгированное с биотином, можно обнаружить по взаимодействию с авидином. В отличие от других иммунологических методов для этого метода использование взаимодействий антиген — антитело не обязательно. Приведем не- Сколько примеров [c.414]

Любые вещества, меченные биотином, включая и иммуно-тлобулины, могут быть обнаружены с помощью авидина, кова--лентно или нековалентно связанного с тем или иным индикатором, В зависимости от системы обнаружения индикаторным компонентом могут служить красители — сульфородамин, флуоресцеин, родамин, а также ферритин, коллоидное золото фер- менты — пероксидаза, щелочная фосфатаза и др. Таким образом, авидин-биотиновая система может быть использована в самых разнообразных методах анализа, включая иммуногистохимиче- Ские и электронно-микроскопические, методы обнаружения ан- [c.414]

Вещества, меченные биотином, могут быть обнаружены с помощью любого из используемых конъюгатов или комплексов авидина с тем или иным индикаторным реагентом типа авидин — флуоресцеин, авидин — ферритин или АБК- Таким образом, после того как вещество помечено биотином, для его обнаружения можно приспособить любую систему анализа. В то же время при использовании антител, меченных флуоресцеином или пероксидазой, круг их применения ограничен, т. е. авидин-биотиновая система характеризуется гораздо большей гибкостью, чем дру- [c.419]

Можно использовать одну из трех основных разновидностей системы авидин — биотин 1) меченый авидин — биотин (МАБ-метод), 2) авидин-биотиновый мостик (АБМ-метод) и 3) ави-дин-биотиновый комплекс (АБК-метод). В рамках МАБ-метода вещество, меченное биотином, непосредственно обнаруживают по взаимодействию с авидиновым конъюгатом типа [авидин — флуоресцеин] или [авидин — пероксидаза]. Хотя использование-авидин-пероксидазного конъюгата обеспечивает достаточно высокую чувствительность определения, следует отметить и существенный недостаток этого метода — высокий уровень фона и неспецифическое окрашивание тканей некоторых типов, в частности почечных тканей. [c.415]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология