Авидин биотин, комплекс

Перспективным способом получения конъюгатов является метод с использованием комплекса авидин — биотин, который образуется с 10 М-> по схеме [c.191]

Биотин (витамин Н) образует прочные комплексы с авидином или стрептавидином и находит благодаря этому широкое применение в мо- [c.105]

Эта токсичность обусловлена авидином—протеином сырого яичного белка, который и является причиной недостатка биотина вследствие образования неадсорбируемо-го комплекса авидин-биотин. [c.199]

Образованием биологически неактивного комплекса биотин-авидина объясняется тот факт, что при употреблении в пищу больших количеств сырого яичного белка у человека и животных развиваются явления специфического дерматита, характеризующегося воспалительной краснотой и шелушением всего тела, выпадением волос и поражением ногтей. Дерматит, часто сопровождается обильным выделением сала железами кожи (себорея). Это дало основание назвать биотип антисеборейным витамином. У животных выпадение шерсти и воспаление кожи вокруг глаз нередко дают картину так называемых очковых глаз (рис. 32). [c.170]

Биотин обладает способностью соединяться с одним из компонентов яичного белка птиц и амфибий, так называемым авидином, образуя с ним нерастворимый в воде и биологически неактивный комплекс — био-тин-авидин. Этот комплекс неактивен только при приеме per os. Нри парентеральном введении (минуя кишечник) биологическая активнось биотина сохраняется. Авидин, по-видимому, тормозит всасывание биотина в кишеч- [c.169]

Первый подход заключается в том, что вместо Р-нуклеотида в ДНК-зонд внедряется химически модифицированный нуклеотид, например, биотинированная duTP, аналог dTTP. Модифицированные нуклеотиды внедряются стандартным способом, например ник-трансляцией, но с меньщей скоростью. Гибридизованный ДНК-зонд с биотиновой меткой детектируют по его взаимодействию с биотин-связы-вающими белками, такими как авидин или стрептавидин, в комплексе с ферментами, например пероксидазой хрена, кислой и щелочной фосфатазой, дающими окращенные продукты, или же с помощью системы двойных антител, используя сначала антибио-тиновые антитела и затем флуоресцирующее вторичное тело. [c.75]

Яичный белок содержит также авидин — белок основного характера. Этот белок обусловливает те нарушения в организме животных, которые наблюдаются при употреблении в пищу белка сырых яиц. Авидин получен в кристаллическом виде [153]. Он является глюкопротеидом основного характера, изоэлектрическая точка которого лежит вблизи pH 10 [154]. Авидин образует соединения с биотином, и упомянутые выше нарушения обусловлены, вероятно, возникающим недостатком свободного биотина [155]. Комплекс авидин — биотин по своим свойствам очень похож на лизоцим, и возможно, что оба соединения идентичны [156, 157]. [c.194]

Биотин (греч. bios — жизнь) открыт при изучении роста дрожжей. Было установлено, чтобиотнн излечивает заболевание, появляющееся у крыс, кур и у человека при введении в организм больших количеств сырого яичного белка. Заболевание сопровождается дерматитами. У крыс наблюдается отек и воспаление кожи и выпадение шерсти. Причину этого заболевания удалось выявить. Оказалось, что в составе яичного белка имеется глюкопротеид — авидин, связывающий биотин с образованием нерастворимого в воде комплекса (биотин-авидин). Этот комплекс не всасывается, и биотин пищи теряется для организма. Нагревание до 100" С денатурирует авидин и лишает его способности связывать биотин. Поэтому нри наличии в пище вареных яиц связывания в кишечнике биотина авидином не происходит. [c.110]

Можно использовать одну из трех основных разновидностей системы авидин — биотин 1) меченый авидин — биотин (МАБ-метод), 2) авидин-биотиновый мостик (АБМ-метод) и 3) ави-дин-биотиновый комплекс (АБК-метод). В рамках МАБ-метода вещество, меченное биотином, непосредственно обнаруживают по взаимодействию с авидиновым конъюгатом типа [авидин — флуоресцеин] или [авидин — пероксидаза]. Хотя использование-авидин-пероксидазного конъюгата обеспечивает достаточно высокую чувствительность определения, следует отметить и существенный недостаток этого метода — высокий уровень фона и неспецифическое окрашивание тканей некоторых типов, в частности почечных тканей. [c.415]

С целью повысить чувствительность анализа мы разработали метод, основанный на применении комплекса [авидин — биотин — пероксидаза] (АБК-метод). Тот же принцип был положен в основу разработанных недавно вариантов АБК-метода с применением комплексов [авидин — биотин — щелочная фосфатаза] и [авидин — биотин — глюкозооксидаза]. Образование названных комплексов в АБК-методе обеспечивается следующими биохимическими характеристиками авидина и биотинсодержащих конъюгатов [c.417]

Иммобилизованный антиген инкубируют с пробой, содержащей антитела, отмывают и добавляют антивидовые антитела, ковалентно связанные с биотином. Затем вносят авидин, образующий прочный комплекс с биотином, отмывают избыток белка и добавляют фермент с ковалентно пришитым биотином, который взаимодействует с другим центром связывания авидина. (Другим путе1 (1 является использование антивидовых антител, ковалентно связанных с авилином, что упрощает анализ и сокращает его длительность. [c.105]

Благодаря очень высокому сродству между авидином и биотином при использовании метода, основанного на образовании авидин-биотинового комплекса, достигается чрезвычайно высо кая чувствительность определения. Одним из важнейших пре- [c.421]

Для этого использовали хорошо известный белок авидин, в состав которого входят четыре идентичные субъединицы каждая связывает биотин и многие его производные. Поэтому биотин, модифицированный сукцинимидом, был превращен в хелатообра-зующий дифосфин, который с родием (I) образует комплекс. [c.102]

Предложено несколько способов дальнейшего повышения чувствительности ферментных меток. Например, в методе ELISA с усилением используют комплексы ферментов со специфическими антителами (Butler et al, 1985) в системе ЛВС применяют комплексы авидина с конъюгатом [биотин — фермент] и конъюгаты биотина с антителами (Hsu, 1985). [c.32]

В 1916 г. в опытах на животных было показано токсичное действие сырого яичного белка употребление печени или дрожжей снимало этот эффект. Фактор, предотвращающий развитие токсикоза, был назван витамином Н. Позже было установлено, что в дрожжевом экстракте печени и желтке куриного яйца содержится пищевой фактор, отличный от всех других известных к этому времени витаминов. Этот фактор стимулирует рост дрожжей и азотфиксирующих бактерий Rhizobium, в связи с чем он и получил название биотин (от греч. bios—жизнь), или коэнзим R. В 1940 г. было установлено, что все три названия (биотин, витамин Н и коэнзим R) относятся к одному и тому же химически индивидуальному соединению. Выделенное из сырого яичного белка вещество оказалось гликопротеином—белком основного характера, названным авидином этот белок обладает высоким сродством связывания с биотином с образованием нерастворимого в воде комплекса. Комплекс не подвергается расщеплению в пищеварительном тракте, поэтому биотин не всасывается, хотя и содержится в пищевых продуктах. [c.228]

Кроме того, биотин необходим для нейтрализации токсичности авидина, кристаллического протеина сырого яичного белка, вытесняющего биотин из ферментных систем и образующего с ним нерастворимый комплекс по имидазмидоновой части молекулы авидин является сильнейшим антивитамином биотина [66]. [c.449]

Витамин Н (биотин) — это первое вещество, которое было определено как необходимый ростовой фактор для микроорганизмов. В 1916 г. показано токсическое действие сырого яичного белка на крыс. Употребление печени или дрожжей снимало этот эффект. Фактор, предотвращающий развитие токсикоза, был назван витамином Н, или биотином (от греч. bios — жизнь). В сыром яичном белке оказался гликопротеин авидин, который обладал способностью связывать биотин с образованием нерастворимого в воде комплекса. [c.360]

Гиповитаминоз может развиваться при употреблении большого количества сырых куриных яиц, в которых содержится белок авидин. Авидин связывает биотин в желудочно-кишечном тракте с образованием не растворимого в воде комплекса и делает его недоступным для усвоения. Недостаточность биотина проявляется шелушением кожи, болью в мышцах, малокровием, снижением работоспособности, себореей (усиленное выделение жира сальными железами). [c.119]

Поясним, что возникающие при употреблении сырых куриных яиц токсикозы вызваны образованием специфического комплекса биотина с авидином — гликопротеином белка куриных яиц, в результате чего развивается биотиновая недостаточность. [c.166]

Следующий метод нековалентного введения ферментной метки в гетерогенном ИФА антигенов и антигел основан на использовании авидина (основной гликопротеид, Л4г = 66000, компонент яичного белка) и биотина (витамин, Мг=22Ъ), образующих между собой комплекс, характеризующийся константой связывания 1015 цто в десятки тысяч раз превышает характеристики связи антиген — антитело. Один из вариантов ИФА антител с использованием этой техники может быть проведен по схеме (см. с. 106). [c.105]

Достоинствами данного подхода являются универсальность конъюгата, используемого для анализа различных антигенов, и повышение чувствительности регистрации образуемого иммунохимического комплекса. Последнее обстоятельство обусловлено тем, что при синтезе конъюгата антитело—биотин с одной молекулой антитела может быть ковалентно связано до 90 молекул биотина. Молекула авидина имеет четыре центра связывания биотина, поэтому каждый специфический иммунохимический комплекс с участием определяемых антител на конечной стадии анализа будет содержать не одну молекулу фермента, а несколько десятков, что приводит к существенному выигрышу в чувствительности определения метки, а следовательно, и всего анализа. [c.105]

Вещества, меченные биотином, могут быть обнаружены с помощью любого из используемых конъюгатов или комплексов авидина с тем или иным индикаторным реагентом типа авидин — флуоресцеин, авидин — ферритин или АБК- Таким образом, после того как вещество помечено биотином, для его обнаружения можно приспособить любую систему анализа. В то же время при использовании антител, меченных флуоресцеином или пероксидазой, круг их применения ограничен, т. е. авидин-биотиновая система характеризуется гораздо большей гибкостью, чем дру- [c.419]

Меченные биотином иммуноглобулины и лектины весьма стабильны. Их реакционная способность остается неизменной при хранении в течение 3 лет при 4 С. То же верно и для авидина, и для конъюгата [биотин — пероксидаза]. Мы обычно готовим АБК непосредственно перед использованием для анализа тканевых срезов. Комплекс можно сохранять при 4 С не менее двух дней. Впрочем, систематического изучения стабильности комплекса мы не проводили. [c.420]

Отметим, что для детекции антител разработаны также и нерадиоактивные (хромогенные) методы. Они основаны на свойствах пе-роксидазы из хрена и щелочной фосфатазы образовывать цветные нерастворимые продукты в процессе ферментативной реакции. Эти ферменты ковалентно связывают с вторичными антителами, которые реагируют со специфическими сайтами на первичных антителах После обработю фильтров такими комплексами в местах локализации искомых белков образуются суперкомплексы антигек — антите-ло антитело — фермент. Их положение определяют смочив фильтр в растворе проявляющего вещества (субстрата ферм нта). Например, для пероксидазы хрена хромогенным субстратом является 4-хлоро-1-нафтол, способствующий появлению на фильтрах пурпурных пятен. В качестве альтернативного метода вторичные антитела связывают с биотином, а пероксидазу хрена — с авидином. [c.286]

Был описан интересный способ получения одноцепочечной матрицы ДНК, легший позднее в основу такого высокопроизводительного метода как твердофазное секвенирование (рис. 2.7) [Stahl et al., 1988]. В цитируемой работе фрагмент ДНК, меченный биотином, сорбировался на твердой фазе в виде авидин-агарозы. После этапов денатурации щелочью и последующей отмывки на оставшейся одной цепи ДНК, связанной через биотин-авидиновый комплекс с агарозой, отжигался секвенирующий праймер и шло построение комплементарной цепи ДНК Кленовским фрагментом ДНК-полимеразы в условиях терминации. Затем еще один раунд щелочной денатурации приводил к высвобождению новосинтезированных цепей ДНК, пригодных для их разделения секвенирующим гель-электрофорезом. Справедливости ради следует отметить, что авторы в данной статье упоминают о принципиальной возможности повторения циклов отжига праймера и построения цепи по сорбированной матрице, что [c.56]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология