Карбамоилирование белка

Использование высокой концентрации мочевины на всех этапах процесса, начиная с лизиса клеток, необходимо для устранения угрозы агрегации белков. Как всегда, при этом следует опасаться распада мочевины и карбамоилирования белков, что приведет к появлению мультиплетов пятен, расположенных рядом, на одном уровне пластины. Ввиду этого растворы особо чистой мочевины должны быть свежеприготовлены или храниться в замороженных аликвотах. Замечено, что в продажных препаратах мочевины даже нанвысшей чистоты встречаются примеси солей, способствующих агрегации белков [Goldsmith et а ., [c.48]

Высокая концентрация белков в зонах может привести к их осаждению или, по крайней мере, образованию агрегатов димерных, тримерных и более крупных белковых комплексов, которые могут давать дополнительные полосы. Агрегация происходит, в основном, за счет водородных связей. Для ее предотвращения в рабочий буфер нередко добавляют мочевину в концентрации 4—8 М. Она должна быть хорошо очищена, в частности деионизована. Кроме того, следует всегда иметь в виду возможность частичного разложения мочевины с образованием циановой кислоты и карбамоилирования белков. Это особенно относится к долго хранящимся буферам, поэтому лучше добавлять сухую мочевину в буфер непосредственно перед приготовлением геля. Если все же возникает подозрение, что некая полоса появилась за счет карбамоилирования, то следует добавить в исходный препарат цианат и посмотреть, не усилится ли подозрительная полоса. Для предварительной деионизации маточный раствор мочевины (ЮМ) суспендируют с бифункциональной ионообменной смолой (например, Л. П1уЯ > в соотношении 5 г смолы на 100 мл раствора в течение часа при комнатной температуре. [c.46]

ВЫХ оснований с последующим восстановлением боргидридом натрия д) гуанидирование (до производных гомоаргинина) е) карбамоилирование, а также дансилирование. Последняя реакция широко используется при анализе первичной структуры белков и пептидов (см. с. 37), а также для введения флуоресцентной метки в белки. Все перечисленные реакции могут применяться и для модификации N-концевой аминогруппы белков и пептидов. [c.161]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология