Метки флуоресцентные

Флуоресцентные зонды и метки являются удобным инструментом для исследования биологических мембран и мембранных ферментов. Испо 1ьзование зондов разной природы, способных связываться с белками или встраиваться в различные области липидного бислоя, а также меток, ковалентно реагирующих с функциональными группами белков или липидов, позволяет получить ценную информацию о состоянии и подвижности белка в мембране, состоянии липидного матрикса, характере белок-белковых и белок-липидных взаимодействий. [c.365]

В настоящее время существует множество вариантов как метода Максама — Гилберта, так и метода Сэнгера. Главное, эти методы удалось полностью автоматизировать. Так, например, при секвенировании ДНК по Сэнгеру на 5 -конец праймера вводят флуоресцентные метки, причем для каждого из четырех анализируемых нуклеотидов используются флуоресцирующие агенты с различными спектральными характеристиками. После электрофоретического разделения гель сканируется при четырех различных длинах волн и полученная информация сразу обрабатывается на ЭВМ. При этом все биохимические операции также проводятся роботом. [c.19]

Волоконная оптика позволяет прочитывать в ДНК-чипах последовательности мономеров в молекулах нуклеиновых кислот и моментально определять активность тех или иных генов. Интересующие исследователей цепочки ДНК или РНК помечают флуоресцентными метками. Затем, освещая чип лазером, можно в микроскоп наблюдать местонахождение светящегося участка и тем самым определять последовательность нуклеотидов в данной цепочке. Эта методика из года в год продолжает усовершенствоваться, и одним из наиболее интенсивно развиваемых в последние годы подходов стало использование световодов. [c.156]

Флуоресцентные и хемилюминесцентные метки [c.585]

Рис. 15.3-7. Электрофореграмма шести имеющих флуоресцентную метку аминокислот, полученная с использованием системы, изображенной на рис. 15.3-6.

ФИТЦ — флуоресцентная метка, ковалентно модифицирующая аминогруппы белка. Максимум возбуждения ФИТЦ — 490—495 нм, максимум флуоресценции — 525 нм. Обработку препаратов Са—АТФазы данной флуоресцентной меткой проводят в среде, содержащей [c.366]

Модификация Б. реагентами, несущими своб. радикал (спиновая метка) или флуоресцентную группировку, позволяет судить о хим. окружении модифицируемой группы, а при наличии в Б. двух таких меток-измерить расстояние между ними. [c.253]

Рмс. 7.9-16. Флуоресцентный иммунный анализ с субстратом-меткой. Антитело, связанное с меченым гаптеном, ингибирует его как субстрат для фермента. [c.598]

Флуоресцентные метки обычно дают лучшую чувствительность, чем колориметрические, потому что АЛИНЫ волн возбуждения и детектирования различны. [c.585]

Л. 6 выделяют из микросом путем центрифугирования клеточного гомогената при ускорении 105 000 g с послед, осаждением белков сульфатом аммония. Индивидуальные белки получают фракционированием с помощью хроматографии (в т. ч на гелях агарозы, содержащих ковалентно иммобилизованные фосфолипиды, и гель-фильтрацией на сефадексе), а также изоэлектрич. фокусированием в градиенте pH. Активность Л. б. определяют по перераспределению метки (изотопной, спиновой или флуоресцентной см. Липидные зонды) между донорными мембранами, содержащими меченые липиды, и немечеными акцепторными мембранами. [c.598]

Чаще всего в ИХА используют изотопные, флуоресцентные, ферментные, парамагнитные метки, которые повышают чувствительность иммунохимических методов в миллионы раз, а время анализа сокращается до нескольких часов. [c.114]

Жидкостные свойства мембран доказываются многими фактами. Подвижность мембранной структуры обнаруживается помощью парамагнитных и флуоресцентных меток, а также методом ЯМР. На рис. 10.3 показан спектр ЭПР мембраны, меченной нитроксильными метками, присоединенными к липидным хвостам . При низкой температуре липид заморожен, при высокой спектр обостряется и становится богаче, так как липид расплавлен и нитроксил приобретает быстрое анизотропное движение. [c.337]

В опубликованных недавно книгах и обзорных статьях можно найти множество примеров ингибиторов, специфичных к активному центру [312, 313, 315]. Помимо химической модификации фермента и аффинного мечения за последние десять лет разработано еще несколько новых методов. Хотя эти методы и не имеют прямого отношения к бноорганнческому моделированию ферментов, о них все же следует упомянуть, так как в приложении к биологическим системам с их помощью можно получить полезную информацию, К ним относятся введение фотоаффинной метки [316] и использование флуоресцентной спектроскопической линейки [317]. Эти разработанные недавно методы включают в основном биофизические приемы, обсуждение которых выходит за рамки данной книги, но которые важны для лучшего понимания биологических процессов. Получаемая информация может быть ценным руководством к планированию и созданию новых биоорганических моделей биологически важных макромолекул. [c.450]

Для определения концентрации веществ в большинстве иммунохимических методов к анализируемому раствору, содержащему определяемое соединение и его меченый аналог, добавляют реагент в количестве, намного меньшем необходимого по уравнению (7.12). Как немеченые, так и меченые соединения взаимодействуют с реагентом практически одана-ково, поэтому отношение их концентраций будет одним и тем же в растворе и в связанном состоянии. При этом возможность применения метода во многом определяется доступностью меченого антигена и соответствующих антител. Для введения метки используют различные реагенты радионуклиды, ферменты, красящие вещества, флуоресцентные и хеми-люминесцентные зонды, ионы металлов. До последнего времени в качестве маркеров антител применяли радиоактивные изотопы этот метод назьшается радиоиммунохимическим анализом (РИА). При этом степень [c.298]

Метод флуоресцентной спектроскопии с использованием внутримолекулярной метки применяется для изучения подвижности цепей полимеров [13]. Температурная зависимость корреляционного времени подвижности метки согласуется с уравнением Вильямса-Ланделла-Ферри подвижность метки четко отражает явление стеклования полимерной матрицы. [c.377]

Для измерений скорости в потоках разреженного газа применяется метод флоуресцентиого трассирования. В заданной области исследуемого истока проводят его облучение тонким интенсивным пучком быстрых электронов, в результате чего образуется светян1аяся флуоресцентная метка, скорость движения которой регистрируется фотоэлектрической системой. [c.414]

ЛИПИДНЫЕ 30НДЫ, липиды, несущие репортерные группы (метки)-спиновые, флуоресцентные и др.,-поведение к-рых в изучаемой системе можно регистрировать к.-л. методом (обычно спектральным). [c.596]

Осн. требования к меткам в Л. з.-чувствительность к микроокружению, возможность надежного наблюдения за ее поведением, внесение меткой в наблюдаемую систему миним. возмущений. Наиб, часто применяют спиновые, флуоресцентные и фотореактивные метки, а также метки для спектроскопии ЯМР. Липиды, меченные радиоактивными атомами, к Л. з. обычно не относят. [c.596]

ЯМР-Л 3 содержат атомы (напр, дейтерий, фтор) или группировки (напр, фосфотионовую, III), чьи сигналы ЯМР могут быть выделены из сигналов компонентов изучаемой системы С помощью таких Л з получают информацию о подвижности и упорядоченности молекул и их частей, об анизотропии и нек-рых др св-вах изучаемой системы Временная ujKajia (временные интервалы, в пределах к-рых движения метки регистрируются изменениями спектральных параметров) для спиновых Л з составляет обычно IQ- -iO , флуоресцентных-10 -10 с, ЯМР-Л з-Ю -10 с Имеются методы, к-рые могут расширить эти пределы до с [c.597]

В др. случае (метод Сенгера) используют олиго- или полинуклеотидную затравку (праймер) известной длины, коплементарную определенному участку Н.к. Затравку наращивают с помощью ДНК-полимеразы, останавливая синтез на одном из четырех типов нуклеотидных остатков с равной вероятностью, независимо от его положения в цепи. Для этого к смеси четырех прир. субстратов ДНК-полимеразы добавляют т.наз. терминатор (обычно 2, З -ди-дезоксинуклеозидтрифосфат)-аналог определяемого нуклеотидного остатка, попадание к-рого на З -конец растущей цепи останавливает синтез. При этом радиоактивная метка вводится либо в затравку, либо в субстрат. Операгщю Повторяют для каждого из четырех нуклеотидов длину образующихся радиоактивных фрагментов определяют стандартным способом. Эти методы в настоящее время удалось полностью автоматизировать (заменив в ряде случаев радиоактивную метку на флуоресцентную) и тем самым в тысячи раз повысить скорость секвенироваиия ДНК. [c.299]

С., меченные радиоактивными атомами или флуоресцентной меткой (см. Липидные зонды), используют при проведении медицинских и биохим. исследований. В клетках С. гидролизуются при действии фермента сфингомиелиназы до церамида R H(0H) H(NH 0R ) H20H и фосфохолина. При наследственных дефектах в биосинтезе этого фермента [c.488]

Широкое распространение получают иммунофер-ментные методы - разновидность иммунных методов анализа (радиоактивная или флуоресцентная метка заменяется ферментом). Их используют для определения иммуноглобулинов, гормонов, стеровдов, лек. ср-в, пестицвдов и др. Эти методы обладают исключительно высокой чувствительностью и селективностью. [c.80]

Кумарины или 2-Я-1-беизопиран-2-оиы впервые выделены из растительного сырья (наиболее высокое содержание в растениях семейства зонтичных, рутовых, пасленовых и бобовых), где содержатся в виде гликозидов. Нашли применение в медицине (антикоагулянты), в пищевой и парфюмерной промышленности. Синтетические кумарины и их аналоги используются как флуоресцентные зонды и метки для биологических исследований, как антибиотики, антиаллергены, фунгициды. Таков далеко не полный перечень их возможного применения. [c.518]

В пришщпе, можно усовершенствовать эти общие системы, чтобы получать более количественный результат в тех случаях, когда от анализа требуется больше, чем положительний или отрицательный ответ. Конфигурация сенсора зависит от того, какой внд анализа предпочтителен конкурентный или саадаичевый. Теоретически особенно жизненной альт нативой кажется конкурентное смещение флуоресцентной метки. Так как это равновесный процесс, то загрязнения или прнмеси на поверхности не должны изменять абсолютного результата, хотя вполне возможно влияние на отношение сигнал/шум [7.8-50] Вероятным недостатком являегся то, что успех такого анализа со смещением очень сильно зависит от относительной кинетики связывания соединения с меткой и пробой. Для получения количественного результата они должны значительно различаться. [c.552]

Непрерывно разрабатываются новые флуоресцентньш зонды, чтобы покрыть все более широкий спектр и приспособиться к потребностям специфических длин волн. В табл. 7.9-3 суммированы некоторые из них. Весьма чувствительными флуорофорами ивляются гидроксильные производные кум фи-на (умбеллифероны), которые открывают широкие возможности для получения различных флуоресцентных свойств. Многие из производных этого ароматического фенола, такие, как фосфаты, гликозиды и др., не флуоресцируют, ио флуоресцирующие частицы могут быть получены при их гцлролизе это свойство также можно испольэовать в иммунном анализе с меткой, как уже обсуждалось ранее. [c.588]

Основной проблемой гомогенного анализа, описанного вьш1е, является влияние мешающих веществ, что не дает возможности реализовать теоретическую чувстаительность. В табл. 7.9-4 проведено сравнение некоторых пределов обнаружения, полученных для отдельных вариантов с использованием флуоресцентной метки. [c.592]

К флуоресцентным измерениям имеет очевидное преих щесгво более сильного сигнала в сравнении с обычной флуорофорной меткой, поскольку каждая ферментная метка создает много флуоресцирующих молекул. [c.598]

При детектировании на основе лазерной флуоресценции для определения с помощью возбуждения на длине волны около 380 нм в большинстве случаев пробу перед разделением необходимо подвергнуть воздействию флуоресцентной метки. В качестве примера назовем разделение 3-(4-карбоксибензоил)-2-хинолин-карбоксиальдегид (КБХКА)- производных аминокислот. [c.41]

Примеры использования природной флуоресценции полипептидов для описания их конформационного поведения приведены в предыдущих разделах. В развитие этого подхода предложено вводить ковалентно связанные информирующие группы (флуорофо-ры [64, 65] илн спиновые метки [66] — группировки, содержащие локализованные неспаренные электроны), что позволяет исследовать соседние с этими группами участки с помощью флуоресцентной спектроскопии и электронного парамагнитного резонанса (ЭПР), соответственно. В разд. 23.7.3.3 приведены ссылки на работы по аналогичным исследованиям меченых пептидов методом КД. [c.442]

Известен более быстрый метод регистрации с использованием в качестве флуоресцентной метки салицилата натрия [Anal. Bio hem. 98, 132 (1979)]. Однако при этом полосы получаются немного более размытыми, чем при работе с РРО или нафталином. [c.377]

Радиоиммунологический метод анализа (РИА) был предложен в конце 50-х годов. Возможность определять метку (изотоп 1) в очень малых концентрациях позволила достичь высокой чувствительности анализа (до пкг/мл) при высокой избтательности и экспрессности. За разработку этого метода его авторы Р. Йалоу и С. Берсон были удостоены Нобелевской премии в 1977 г. Недостатками этого метода являются ограниченный срок жизни радиоактивной метки относительно дорогое оборудование дпя регастрации радиоактивности возможность радиоактивного. заражения окружающей среды при проведении серийных анализов. В качестве альтернативы радиоактивным меткам было предложено использовать флуоресцентные метки и ферменты. [c.114]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология