Перегрузка зон в градиенте сахароз

Перегрузка градиента плотности разделяемыми веществами может приводить к образованию капелек за счет диффузии сахарозы в зону, занятую веществами. Этот эффект возникает при вхождении зон в область с большей концентрацией сахарозы. Его можно устранить, намеренно размывая нижний край зоны. [c.200]

Важно ие перегрузить градиент (-в особенности это касается выделения хлоропластов) во избежание слишком плотного скопления органелл в интерфазе, что может способствовать соосаждению ядериой ДНК- Оптимальное соотношение между числом необходимых пробирок с градиентами и количеством гомогенизируемой ткани составляет примерно 20—30 г свежей ткани на градиент, что определено эмпирически для многих видов растений. Чтобы предотвратить перегрузку градиента хлоропластами, Палмер с сотрудниками [10] предлагает интенсивно смешивать 30%-иуЮ сахарозу верхнего слоя с 52%-ной сахарозой нижнего слоя, при этом иитер-фаза оказывается диффузной. Можно приготовить градиент и за несколько дней до использования, чтобы между двумя слоями произошла диффузия и был бы достигнут тот же эффект. [c.262]

Если же в состав препарата входят частицы с очень больщи-ми значениями константы седиментации и есть необходимость затормозить их оседание при подходе ко дну пробирки, то используют либо более крутые линейные градиенты (с диапазоном 20 или 25%), либо градиенты вогнутой формы. Увеличение крутизны градиента приводит к сужению полос (зон) частиц. Передний край зоны, вступая в область повышенной вязкости и плотности раствора сахарозы, замедляет свое движение по сравнению с задним краем. Однако по той же причине уменьшается и расстояние между зонами, поэтому разрешение (разделение) зон или пиков не очень зависит от крутизны градиента. Если разделяют вещества с близкими значениями ао, . то берут пологие градиенты плотности, а узость зон стараются обеспечить за счет тонкости начального слоя. Компенсировать при этом уменьшение объема препарата за счет увеличения концентрации вещества в нем можно лишь в определенных пределах. Дело в том, что плотность раствора препарата накладывается на плотность градиента сахарозы. В силу диффузии препарат внутри зоны распределен неравномерно, профиль распределения имеет форму колокола. Если концентрация препарата в зоне невелика, то это наложение не нарушит общего характера нарастания плотности градиента вдоль пробирки. Если же концентрация вещества в зоне значительна, то у переднего ее края образуется локальный участок обратного градиента плотности , т. е. плотность на этом участке убывает (за счет препарата) в направлении от мениска к дну пробирки. Это приводит к конвекции жидкости и размыванию зоны. Ясно, что чем круче градиент плотности сахарозы, тем меньше скажется на нем вклад плотности препарата. Именно поэтому для пологих градиентов сахарозы следует опасаться перегрузки зон при увеличении концентрации препарата в исходном слое. Довольно часто плохое разрешение зон при зональ- [c.213]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология