Крутизна градиента сахарозы

В заключение еще раз отметим, что выбор режима зонально-скоростного центрифугирования в градиенте плотности растворов сахарозы достаточно свободен. Изменение продолжительности центрифугирования на 20%, как правило, не очень сильно меняет характер фракционирования. Важно лишь правильно оценить соотношение значений г ., , разделяемых компонентов в препарате, диктующее выбор крутизны градиента сахарозы. Затем для максимально допустимой скорости имеющегося в распоряжении бакет-ротора (с длинными пробирками) с помощью номограмм следует найти ориентировочную продолжительность центрифугирования. Ее можно затем уточнить после первого пробного опыта. [c.239]

Длину и крутизну градиента регулируют несколькими способами. Так, при добавлении сахарозы в первый раствор градиент становится менее крутым, а увеличение диаметра капилляров приводит к образованию более коротких и крутых градиентов. Наконец, варьируя концентрацию раствора акриламида, можно создать градиент, подходящий для разделения любой смеси веществ. [c.111]

При подаче в ротор линейного градиента, т. е. раствора, в котором концентрация сахарозы увеличивается пропорционально объему подаваемой жидкости, в нем создается нелинейный — вогнутый — градиент концентрации сахарозы ( эффект радиального разбавления ). Это легко понять, если мысленно рассмотреть положение внутри зонального ротора двух одинаковых объемов подаваемого линейного градиента сахарозы, из которых один взят из начального, а другой — из конечного участка этого градиента. Каждый из двух одинаковых объемов обусловливает один и тот же прирост концентрации сахарозы (условие линейности подаваемого в ротор градиента). В цилиндрической пробирке бакет-ротора этим одинаковым приростам плотности соответствуют и одинаковые участки длины пробирки, так как сечение ее неизменно. Градиент оказывается линейным по длине, вдоль пути миграции молекул. В зональном же роторе двум оди> наковым объемам соответствуют цилиндрические слои разной толщины большей близ центра и меньщей у его периферии. Это означает, что один и тот же прирост концентрации сахарозы будет растянут во внутренней зоне градиента и сжат вблизи наружной стенки ротора. Иначе говоря, градиент плотности будет характеризоваться увеличением крутизны своего профиля при переходе от внутренней зоны к периферической, т. е. будет вогнутым. В целях получения более близкого к линейному профиля градиента в ротор подают иногда не линейный, а выпуклый (например, экспоненциальный) градиент сахарозы (см. выше). [c.275]

Если же в состав препарата входят частицы с очень больщи-ми значениями константы седиментации и есть необходимость затормозить их оседание при подходе ко дну пробирки, то используют либо более крутые линейные градиенты (с диапазоном 20 или 25%), либо градиенты вогнутой формы. Увеличение крутизны градиента приводит к сужению полос (зон) частиц. Передний край зоны, вступая в область повышенной вязкости и плотности раствора сахарозы, замедляет свое движение по сравнению с задним краем. Однако по той же причине уменьшается и расстояние между зонами, поэтому разрешение (разделение) зон или пиков не очень зависит от крутизны градиента. Если разделяют вещества с близкими значениями ао, . то берут пологие градиенты плотности, а узость зон стараются обеспечить за счет тонкости начального слоя. Компенсировать при этом уменьшение объема препарата за счет увеличения концентрации вещества в нем можно лишь в определенных пределах. Дело в том, что плотность раствора препарата накладывается на плотность градиента сахарозы. В силу диффузии препарат внутри зоны распределен неравномерно, профиль распределения имеет форму колокола. Если концентрация препарата в зоне невелика, то это наложение не нарушит общего характера нарастания плотности градиента вдоль пробирки. Если же концентрация вещества в зоне значительна, то у переднего ее края образуется локальный участок обратного градиента плотности , т. е. плотность на этом участке убывает (за счет препарата) в направлении от мениска к дну пробирки. Это приводит к конвекции жидкости и размыванию зоны. Ясно, что чем круче градиент плотности сахарозы, тем меньше скажется на нем вклад плотности препарата. Именно поэтому для пологих градиентов сахарозы следует опасаться перегрузки зон при увеличении концентрации препарата в исходном слое. Довольно часто плохое разрешение зон при зональ- [c.213]

Экспоненциальный градиент используют и для создания изо-кинетических условий центрифугирования в более длинных пробирках, чем у ротора 8Ш50.1. Его расчетными параметрами в этом случае являются концентрации растворов сахарозы в смесителе и резервуаре (бюретке), а также объем смесителя. Чем меньше этот объем по сравнению с полным объемом градиента ( п), тем круче изменяется градиент на начальном участке. Объем жидкости в бюретке роли не играет —он только должен быть больше, чем объем пробирки. При равенстве объемов смесителя и пробирки форма градиента лишь незначительно отличается от линейной. Однако конечная концентрация смеси будет ненамного больше (в отличие от описанного выше линейного градиента), чем средняя величина между концентрациями растворов в смесителе и резервуаре. Заметная крутизна градиента обнаружится при соотношении Усм/ п=> Л. При этом конечная концентрация смеси будет близка к концентрации раствора в резер-вуаре (рис. 54). [c.217]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология