ИЭФ в градиенте плотности раствора сахарозы

Наиболее широкое применение нашел метод изоэлектрической фокусировки. Он основан на создании под действием внешнего электрического поля стабильного градиента pH, причем значение pH возрастает от анода к катоду. В такой системе каждый белок перемещает в том или ином направлении в соответствии со знаком своего заряда до тех пор, пока не достигнет участка, в котором значение pH совпадает с его изоэлектрической точкой. На этом участке дальнейшее его перемещение под действием электрического поля прекращается, так как его заряд становится равным нулю. Приложенное поле, поддерживающее стабильный градиент pH, препятствует также диффузному размыванию зоны. Механизм аналогичен только что рассмотренному эффекту градиента плотности раствора сахарозы на стабилизацию зон при седиментации. Действительно, если в результате диффузии белок уходит из участка, на котором pH = р1, в сторону катода, он попадает в область более высоких значений pH и заряжается отрицательно. Под [c.243]

Смесь белков вносят в трубку или в объем пластины, заполненные электропроводящей жидкостью. Возможность конвекции устраняют либо полимеризацией в этой жидкости сетки ПААГ или агарозы, либо помещением в нее гранулированного сефадекса, либо, наконец, образованием в жидкости градиента плотности раствора сахарозы. Вдоль трубки или одного из линейных размеров пластины в электропроводящей жидкости создают и поддерживают линейный градиент pH в определенном, наперед выбранном интервале значений. Жидкость обладает буферными свойствами, так что установившиеся значения pH вдоль градиента не изменяются в присутствии фракционируемых белков. [c.4]

Этот способ препаративного ИЭФ в настоящее время вытесняет широко распространенное ранее использование градиента плотности раствора сахарозы. Его преимущества — простота, высокая емкость и относительная нечувствительность к выпаде- [c.60]

ИЭФ в ГРАДИЕНТЕ ПЛОТНОСТИ РАСТВОРА САХАРОЗЫ [c.67]

Тем не менее, ввиду широкой распространенности метода ИЭФ в жидкостных колонках следует рассмотреть его особенности. Процесс ИЭФ белков здесь протекает в растворе амфолитов без носителя. Опасность конвекционного перемешивания слоев жидкости блокируется созданием по высоте колонки достаточно крутого линейного градиента плотности раствора сахарозы, которая не мешает формированию градиента pH и фокусированию белков. Колонку заполняют с помощью перистальтического насоса из смесителя градиента того же типа, что используется для приготовления линейных градиентов плотности растворов сахарозы для ультрацентрифугирования [Остерман, 1981]. На дно колонки амфолиты поступают в 50%-ном растворе сахарозы, к ее верхнему концу концентрация сахарозы снижается до 5%. [c.67]

Теперь уместно напомнить еще об одном применении колонок с градиентом плотности раствора сахарозы, где они оказываются вне конкуренции. Это — получение амфолитов для более узких диапазонов pH, чем те, на которые рассчитаны продажные препараты. Эта операция была описана в гл. 1. Отметим, что в данном случае следует не только увеличить исходную концентрацию амфолитов, но и уменьшить концентрацию сахарозы, например создать градиент ее концентрации 0—10%. При фракционировании амфолитов такой градиент будет оказывать достаточное противодействие конвекции жидкости, к тому же отпадает необходимость последующего отделения амфолитов от сахарозы, что сделать достаточно трудно. Отбор амфолитов, лежащих в очень узком диапазоне pH, для разделения белков с близкими значениями р1, можно производить вместе с самими белками. ИЭФ в этом случае проводят в два этапа. На пер- [c.73]

Рнс. 59. Номограммы для расчета времени центрифугирования (О в различных градиентах плотности растворов сахарозы (см. текст) [c.228]

В заключение еще раз отметим, что выбор режима зонально-скоростного центрифугирования в градиенте плотности растворов сахарозы достаточно свободен. Изменение продолжительности центрифугирования на 20%, как правило, не очень сильно меняет характер фракционирования. Важно лишь правильно оценить соотношение значений г ., , разделяемых компонентов в препарате, диктующее выбор крутизны градиента сахарозы. Затем для максимально допустимой скорости имеющегося в распоряжении бакет-ротора (с длинными пробирками) с помощью номограмм следует найти ориентировочную продолжительность центрифугирования. Ее можно затем уточнить после первого пробного опыта. [c.239]

В большинстве случаев зональные роторы используют для зо-нально-скоростного центрифугирования в градиенте плотности раствора сахарозы на стадии препаративного выделения и очистки макромолекул или частиц из большого объема материала. [c.275]

Для грубого предварительного разделения клеточных фрагментов достаточно кратковременного последовательного центрифугирования при нескольких разных скоростях (с разным центробежным ускорением) (разд. 3.1. а). Однако, чтобы получить максимально чистые препараты органелл или молекул, используют центрифугирование в градиенте плотности. Например, для разделения РНК на несколько фракций, различающихся по константам седиментации, сначала в пластмассовой центрифужной пробирке создают градиент концентраций раствора сахарозы (от 25% на дне до 5% на поверхности). Затем сверху аккуратно наслаивают препарат РНК и проводят центрифугирование с очень высокой скоростью в течение нескольких часов. Препарат РНК разделяется на ряд медленно седиментирующих резких полос, стабилизируемых градиентом сахарозы. Затем пробирку прокалывают снизу и собирают фракции по каплям в пробирки с помощью коллектора фракций. Далее определяют положеиие каждой фракции и содержание в ней РНК. [c.163]

ВЫХ оснований или нуклеотидов, полученных после расщепления полимера (подробнее — см. стр. 58). С нуклеотидным составом ДНК однозначно связаны два физических свойства двухцепочечных комплексов, которые часто используются для характеристики полученных препаратов 2 . 2в Одно из них — так называемая температура плавления Гщ — это температура, при которой происходит распад двухцепочечного комплекса на одноцепочечные молекулы этот процесс легко наблюдать по изменению УФ-поглощения или оптического вращения раствора (подробнее см. в гл. 4). Другая характерная константа ДНК — плавучая плотность р — может быть определена из результатов равновесного ультрацентрифугирования Такое центрифугирование проводят обычно в растворах солей, обладающих высокой плотностью чаще всего применяют хлорид или сульфат цезия. При длительном центрифугировании устанавливается градиент плотности раствора, а ДНК собирается в узкой зоне, где существует равновесие между центробежной силой и выталкивающей силой, которая определяется разностью плотности осаждаемого вещества и применяемого солевого раствора в данной зоне. Равновесное центрифугирование в градиенте плотности Сз С1 может служить не только аналитическим методом для характеристики препарата ДНК, но и полезным препаративным методом для разделения ДНК, различающихся по нуклеотидному составу. Подобным же образом препаративное ультрацентрифугирование в градиенте плотности сахарозы используется для разделения молекул ДНК, различающихся по скорости седиментации. [c.31]

Выражение градиент плотности сахарозы , часто встречаюш,ееся в литературе, является точным, но длинным. Название сахарозный градиент означает градиент копцентрации сахарозы, а это в сущности и ость градиент плотности раствора. Мы будем пользоваться названием сахарозный градиент, чтобы не спутать его с равновесным градиентом плотности, о котором уже упоминалось ранее. [c.127]

Наиболее часто для формирования градиентов плотности используется сахароза, по своим свойствам соответствующая указанным выще требованиям. Кроме того, она дешева и ее раствор обладает определенной вязкостью, способствующей стабилизации зон в то же время эта вязкость не настолько высока, чтобы препятствовать движению заряженных молекул и частиц. Для этой же цели можно применять и другие вещества, например глицерин, этиленгликоль, тяжелую воду и в ограниченном диапазоне концентраций этанол. [c.27]

ПО возможности одинаковым. Последняя предосторожность позволяет избежать искажения коэффициента седиментации из-за увеличения плотности раствора сахарозы. Достаточные для обнаружения зон количества исследуемого вируса и маркеров центрифугируют в параллельных градиентах. Коэффициент седиментации исследуемого вируса можно определить путем сравнения расстояния, пройденного им в градиенте, с расстоянием, пройденным маркерами. В этом случае зоны локализуют визуально, освещая пробирки сверху и измеряя расстояние от мениска (однако данный способ не отличается большой точностью). Можно также пропустить градиент через проточную [c.25]

Метризамид имеет определенные преимущества перед сахарозой в отношении плотности и вязкости его растворов. При одинаковой концентрации вязкость раствора метризамида несколько меньше, чем раствора сахарозы, а плотность — существенно выше. Это означает, что для создания устойчивых градиентов плотности растворов метризамида требуются заметно меньшие его концентрации. И все же метризамид практически почти не используют для зонально-скоростного центрифугирования, что объясняется рядом причин. Одна из них, как будет видно ниже,— очень низкие значения плавучих плотностей нуклеиновых кислот в его растворах и, следовательно, малые скорости осаждения [c.209]

Однако ротор с вертикальными пробирками можно успешно использовать и для зонально-скоростного центрифугирования вместо бакет-ротора. В отличие от углового ротора относительно тяжелые частицы не будут здесь попадать на стенку пробирки вплоть до момента прохождения ими всего градиента плотности. Приведенные выше рассуждения о том, что стенка пробирки углового ротора не влияет на образование градиента плотности солевого раствора, не относятся к поведению фракционируемых частиц при зонально-скоростном центрифугировании, ведь плотность этих частиц заведомо больше, чем максимальная плотность раствора сахарозы. Попав в любой части пробирки на ее стенку, частицы, а тем более их агрегаты, будут легко соскальзывать по стенке на дно пробирки. Всего этого не будет в вертикально стоящей пробирке. [c.257]

Осторожным наслаиванием растворов сахарозы с последовательно уменьшающейся плотностью или центрифугированием растворов, содержащих кроме исследуемых веществ равномерно распределенные по объему пробирки соли цезия или рубидия, можно создать градиент плотности растворителя по высоте пробирки. Центрифугирование в ячейках с градиентом плотности приводит к накоплению вещества в очень узкой области, в которой плотность вещества совпадает с плотностью растворителя. Центрифугирование в градиенте плотности применяется, в частности, при изучении нуклеотидов. [c.157]

Фракционирование белков, нуклеиновых кислот и других макромолекул при центрифугировании в градиенте плотности сахарозы основано на различии в скорости седиментации молекул, пропорциональной их молекулярной массе. Фракции РНК, обладающие различной молекулярной массой, после центрифугирования распределяются в линейном градиенте концентрации сахарозы при этом благодаря значительной вязкости растворов сахарозы улучшается разделение и уменьшается возможность смешивания различных фракций. [c.172]

Электрофорез в градиенте плотности. В качестве среды используют жидкость, стабилизированную добавлением глицерина, гликолей или сахарозы, создающих градиент плотности. Этой жидкостью, более тяжелой, чем фракционируемый раствор, заполняют внутреннюю трубку стеклянной охлаждаемой колонки. Дно трубки закрыто пористой стеклянной пластинкой. К обоим концам колонки присоединяют два электродных сосуда и проводят электрофорез. [c.145]

Чаще всего разделяемую смесь наносят на раствор сахарозы, который приготовлен таким образом, что уже в верхнем слое его плотность выше, чем плотность наносимого образца (иначе произошло бы практически мгновенное перемешивание), и постепенно возрастает в направлении к дну пробирки. Наличие градиента концентрации сахарозы существенно ослабляет диффузионное размывание зон, так как если по ходу перемещения зоны какого-либо биополимера часть его в результате диффузии опережает движение основной зоны, то она попадает в область с более высокой плотностью растворителя ро и в соответствии с (7.3) их перемещение затормаживается, а в случае их диффузии в сторону отверстия пробирки по той же причине их движение ускоряется. В обоих случаях частицы, ушедшие из <своей> зоны в результате диффузии, отбрасываются обратно. [c.243]

Хотя в настоящее время существуют методы определения изоэлектрической точки исследуемых белков с достаточной точностью (например, изоэлектрическое фокусирование в градиенте плотности сахарозы), знание изоточки вовсе не обязательно для выбора ионообменника. Пригодность того или иного ионита легко определить по степени связывания белка в статических условиях. В случае анионита смолу приводят в равновесие с буферным раствором, pH которого соответствует верхней границе области устойчивости исследуемого белка. В случае катионита pH буфера будет соответствовать нижней границе этой области. Обессоленный белок растворяют в соответствующем буфере, осторожно (избегая вспенивания) перемешивают с порцией ионита, отделяют надосадочную жидкость. По концентрации белка в надосадочной жидкости судят о степени связывания его с соответствующим ионообменником. [c.431]

Затем через второй патрубок медленно (4 мл/мин) по стенке подают в колонку рабочий раствор, формируя при этом ступенчатый или плавный градиент плотности. При создании ступенчатого градиента в 33 нумерованные пробирки помещают по О, 0,1, 0,2... 3,2 мл разбавленного раствора сахарозы с амфолитами и по 3,2, 3,1, 3,0, 2,9... О мл концентрированного раствора сахарозы. Содержимое пробирок тщательно перемешивают и поочередно, вручную или с помощью перистальтического насоса, вносят в рабочую камеру. [c.307]

Для фракционирования ферментов в градиенте плотности Веллер [60] использовал чрезвычайно простой по конструкции прибор, в основу которого положена ячейка, приведенная на рис. 7. Электрофокусирование проводят в правой части объемом II мл. Непосредственно под рабочим раствором и в левом, уравновешивающем плече находится катодный электролит, содержащий 40% сахарозы. Для заполнения ячейки 14 мл катодного электролита помещают в и-образную трубку, а затем в рабочей камере последовательно наслаивают И фракций по мл, причем разница при замене концентрированного раствора разбавленным составляет 0,1 мл. Катод погружают в левую камеру, а анод — в правую предварительно поверх рабочего раствора наслаивают 1— [c.318]

При длительном ультрацентрифугировании концентрированных растворов низкомолекулярных веществ (обычно хлористого цезия или сахарозы) в кювете устанавливается стационарный градиент плотности. Макромолекулы, присутствующие в растворе, локализуются при этом в той области кюветы, где плотность раствора равна плотности этих макромолекул. В случае гомогенного вещества измерение ширины полосы позволяет определить молекулярный вес (см. стр. 137) [c.70]

В заключение упомянем о своеобразной конструкции колонок для ИЭФ в градиенте плотности раствора сахарозы, разработанной фирмой IS O (модель 212), Конструкторы этой фирмы стремились предоставить экспериментатору возможность следить за миграцией белков в ходе их фокусирования путем периодического сканирования всего градиента при 280 нм. На самой рабочей колонке это сделать не удается ввиду необходимости заключить ее в охлаждающую рубашку. Было найдено оригинальное, хотя и довольно сложное решение проблемы. Накачивая снизу в колонку плотный раствор сахарозы, ее содержимое, т. е. весь градиент pH, периодически поднимают в присоединенную сверху к колонке кварцевую трубку того же диаметра. При этом весь градиент последовательно проходит мимо облегающего эту трубку узла УФ-денситометра, для которого небольшой участок трубки играет роль цилиндрической кюветы. Затем весь столб жидкости возвращается обратно в колонку. Электрическое напряжение на рабочую колонку подается через расположенные по ее концам цилиндрические мембраны. На время сканирования напряжение выключается. Содержимое колонки элюируют в коллектор фракций также путем выдавливания градиента вверх. Объем колонки (охлаждаемой только снаружи) — 23 мл, а максимальная загрузка может составлять 10 мг белка. Все эти дорогостоящие усложнения не кажутся достаточно оправданными судя по публикациям последних лет, колонки IS O широкого распространения яе получили, [c.74]

В интересах экономии места и из-за наметившегося вытеснения колонок для препаративного ИЭФ гранулированными гелями не будем рассматривать примеры применения ИЭФ в градиентах плотности растворов сахарозы. Читатель найдет их во множестве в периодической литературе 70-х годов, а исчерпывающую библиографию по этому поводу—в ежегодном справочном издании фирмы LKB A ta ampholinae . [c.74]

Можно построить номограммы, подобные приведенным, но более точные, для определения Sao.w без маркера, по положению частиц в результате центрифугирования в линейном градиенте сахарозы. В этом случае их следует строить отдельно для каждого ротора и наперед условиться о заполнении полусферического дна пробирки подущкой определенного объема, не участвующей в формировании градиента плотности раствора сахарозы. Сам градиент тоже должен иметь строго определенный объем. Все эти ограничения не слишком обременительны, но не следует забывать, что при раскапывании градиента точность определения положения пиков соответствующих зон не очень высока, так что определение значений s o.w с точностью, превышающей 5%. вряд ли реально. [c.232]

Рис. бК Профиль фракционирования полисом печени крысы центрифугированием в градиенте плотности раствора сахарозы [Ramsey, Steele, 1976] [c.235]

После формирования градиента плотности раствора сахарозы в вертикальной пробирке на него, как обычно, наслаивают раствор исходного препарата. Находясь в растворе сахарозы малой концентрации, препарат в ходе переориентации градиента оказывается распластанным вдоль ближайшей к оси ротора стенки пробирки. Толщина его слоя при этом уменьшается в несколько раз, что способствует лучшему разделению зон. Для того чтобы к моменту начала осаждения частиц слой препарата отошел от стенки пробирки и принял оптимальную форму прямоугольного сечения, на него предварительно иаслаи- [c.257]

При использовапии сахарозного градиента для аналитической цели количество наносимой РНК очень мало (менее 500 мкг), и поэтому при наслаивании образца на поверхность приготовленного в центрифужной иробирке градиента обычно не возникает никаких трудностей. Конец пипетки, содержащей образец, прислоняют к внутренней поверхности боковой Стенки центрифужной пробирки и осторожно опускают его по стенке до тех пор, пока он не коснется поверхности градиента. Если пользоваться полуавтоматической пипеткой, то образец мон<но аккуратно наслоить на поверхность сахарозного градиента без заметного перемешивания. Весьма желательно (хотя и не обязательно) растворять образец РНК в том же буфере, что и сахарозу. Однако важным условием, которое следует выполнять, является то, что плотность раствора образца должна быть меньше плотности раствора сахарозы в поверхностном слое градиента. 1 роме того, между комнонентами градиента и раствора образца не должно происходить никаких химических реакций, которые могли бы изменить градиент или РНК. [c.132]

При просчете фракций после центрифугирования в градиенте плотности раствора s l в толуол-тритоновом сцинтилляторе аликвоты следует разбавлять водой по крайней мере в отношении 2 1, причем объем разбавленного раствора не должен превышать 1 мл на 10 мл сцинтиллятора. Это связано с тем, что очень высокая концентрация соли мешает воде взаимодействовать с детергентом, поэтому раствор оказывается нестабильным. По той же причине насыщенные растворы сульфата аммония для просчета радиоактивности надо разбавлять в 10 раз ( ). Как уже упоминалось, 20—30%-ный раствор сахарозы, в зависимости от используемого сцинтиллятора, иногда тоже приходится разбавлять водой. [c.209]

При центрифугировании денатурированной ДНК или однонитевых РНК бывает необходимо предотвратить их реассоциацию и агрегацию за счет образования случайных водородных связей между основаниями. Для ДНК это осуществляют подщелачива-нием раствора NaOH (до 0,1 М). В случае РНК щелочь непригодна (гидролиз ), но можно создать градиент плотности растворением сахарозы не в воде, а в концентрированных растворах формамида или диметилсульфоксида (ДМСО), иногда даже в 100%-ном формамиде или ДМСО, Полученные градиенты называют денатурирующими градиентами сахарозы . Следует помнить, что ДМСО ядовит и легко проникает через кожу, поэтому работать необходимо в перчатках. Кроме того, ДМСО разрушает нитроцеллюлозные и поликарбонатные пробирки. Из него необходимо удалять следы тяжелых металлов перемешиванием в течение 1,5 ч с 3%-ной суспензией бифункциональной ионообменной смолы. Перед нанесением на градиент препараты нуклеиновых кислот целесообразно прогревать в течение 2— 3 мин при 80 для разрушения уже образовавшихся агрегатов. [c.212]

Если же в состав препарата входят частицы с очень больщи-ми значениями константы седиментации и есть необходимость затормозить их оседание при подходе ко дну пробирки, то используют либо более крутые линейные градиенты (с диапазоном 20 или 25%), либо градиенты вогнутой формы. Увеличение крутизны градиента приводит к сужению полос (зон) частиц. Передний край зоны, вступая в область повышенной вязкости и плотности раствора сахарозы, замедляет свое движение по сравнению с задним краем. Однако по той же причине уменьшается и расстояние между зонами, поэтому разрешение (разделение) зон или пиков не очень зависит от крутизны градиента. Если разделяют вещества с близкими значениями ао, . то берут пологие градиенты плотности, а узость зон стараются обеспечить за счет тонкости начального слоя. Компенсировать при этом уменьшение объема препарата за счет увеличения концентрации вещества в нем можно лишь в определенных пределах. Дело в том, что плотность раствора препарата накладывается на плотность градиента сахарозы. В силу диффузии препарат внутри зоны распределен неравномерно, профиль распределения имеет форму колокола. Если концентрация препарата в зоне невелика, то это наложение не нарушит общего характера нарастания плотности градиента вдоль пробирки. Если же концентрация вещества в зоне значительна, то у переднего ее края образуется локальный участок обратного градиента плотности , т. е. плотность на этом участке убывает (за счет препарата) в направлении от мениска к дну пробирки. Это приводит к конвекции жидкости и размыванию зоны. Ясно, что чем круче градиент плотности сахарозы, тем меньше скажется на нем вклад плотности препарата. Именно поэтому для пологих градиентов сахарозы следует опасаться перегрузки зон при увеличении концентрации препарата в исходном слое. Довольно часто плохое разрешение зон при зональ- [c.213]

Определение плотности во фракциях сахарозного градиента (для водных растворов) можно производить путем измерения коэффициента преломления, пользуясь для расчетов следующей зависимостью ро=2,7329пго—2,6425. В этой формуле коэффициент преломления tho измеряют при 20 , а плотность раствора сахарозы рассчитывают для температуры 0°. Расчет плотности может оказаться необходимым для проверки линейности градиента или для определения плавучей плотности частиц. [c.222]

Линейный градиент плотности раствора s l можно префор-мировать с помощью такого же смесителя градиента, какой был описан ранее при рассмотрении градиентов плотности сахарозы. Тяжелая жидкость должна иметь плотность р -1-Др/2, а легкая ро —Др/2. Обязательно надо позаботиться о том, чтобы площадь основания цилиндра, содержащего тяжелую жидкость (обычно смесителя), была больше площади основания второго цилиндра (резервуара) в соответствии с отношением плотностей двух жидкостей. Для приведенного выше примера это отношение равно 1,82 1,58=1,15. Можно рассчитать, что для создания такого соотношения площадей (в случае цилиндров равных диаметров) в резервуар придется вставить палочку, диаметр которой равен 0,36 диаметра цилиндра. [c.252]

Для создания градиентов плотности растворов чаще всего применяются растворы сахарозы, иногда с фиксированным pH. В некоторых случях хорошее разделение получается при использовании вместо обычной воды D2O. В табл. 2.1 приведены свойства некоторых растворов сахарозы. [c.49]

При классическом ультрацентрифугировании частицы осаждаются под действием сильных центробежных полей в однородной среде. Идеальное осаждение происходит в кювете с радиальными стенками при отсутствии механической вибрации и тепловой конвекции. В препаративных центрифугах пробирки с исследуемым материалом находятся под некоторым углом (угловые роторы) и имеют параллельные стенки. Вследствие этого конвекция нарушает плавное осаждение частиц. Ее можно избежать, если в центрифулшой пробирке будет присутствовать градиент плотности раствора, увеличивающийся по направлению от оси ротора. Такой градиент может быть образован с помощью легко растворимых в воде и быстро диффундирующих веществ, например сахарозы или солей тяжелых металлов, [c.59]

Седиментация под влиянием центрифугирования происходит при скорости, зависящей от размера капель эмульсии. Пинтер и Зильвесмит (1962) фракционировали эмульсии М/В по размерам частиц седиментацией в колонке с сахарозой. Они получали слои с различными плотностями. Градиент плотности создавали при смешивании 50 и 30% растворов сахарозы. Смесь помещали в пробирку емкостью 100 и далее вводили 1 мл эмульсии М/В в 50% растворе сахарозы. В нижнюю часть пробирки вводили 5 мл 60% раствора сахарозы. Центрифугирование проводили при скорости до 2800 об1мин. [c.153]

Для биофизики важен метод седиментации в градиенте плотности. В концентрированном растворе низкомолекулярного но-щества (в СзС1, в сахарозе и т. д.) при ультрацентрифугироиа-нии устанавливается градиент концентрации, т. е. градиент плотности растворителя макромолекул фо/йх. В таком растворе мак[)о-молекулы будут располагаться в той части кюветы, в которой 5 = 0, т. е. согласно (3.66), Умро = 1 или ро = рм- Иными словами, макромолекулы локализуются в той области кюветы, где плотность концентрированного раствора совпадает с плотностью макромолекул (р измеряется непосредственно). Гетерогенная смесь макромолекул разделяется и наблюдается спектр плотностей. Этот метод с большой эффективностью применяется при изучении нуклеиновых кислот. [c.82]

Важной разновидностью седимеита-ционного метода, получившей широкое применение при исследовании природных полимеров, является центрифугирование в градиенте плотности [3, с. 418]. В центрифужной пробирке создают градиент плотности (например, смёшивая при помоши автоматически действующих насосов водный раствор сахарозы с водой в постепенно уменьшающихся соотношениях), а затем наслаивают поверх него исследуемый раствор полимера в легком растворителе (рис. 169). [c.544]

Гель-фильтрацию проводят на сефадексе G-200 в указанном рабочем растворе, что дает двукратное увеличение удельной активности. Ультрацентрифугирование проводят в градиенте плотности сахарозы (30 мл 25%-ного раствора МаСЦ-0,1 М орнитин [c.17]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология