Альдолаза кристаллизация

Кристаллизация в виде бипирамид. К прозрачному раствору, приготовленному путем растворения кристаллов альдолазы (имеющих форму пластинок) и содержащему 15—20 мг белка/мл, добавляют на [c.248]

При стоянии в течение ночи образуются кристаллы, которые отделяют центрифугированием (20 мин, 10 000 g). К супернатанту, содержащему сульфат аммония в концентрации 1,4 М, медленно добавляют сульфат аммония до 1,75 М. концентрации (доводят аммиаком до pH 6,1). Раствор стоит ночь на холоде, при этом начинается образование гексагональных кристаллов альдолазы (за которым можно следить, рассматривая каплю суспензии под микроскопом). Молярность сульфата аммония доводят до 1,82, контролируя pH (он должен быть равен 6,1). Кристаллизация альдолазы происходит в течение 24—36 ч. [c.268]

Перекристаллизация. Осадок отделяют центрифугированием (20 мин при 15 000 ) и растворяют в 5 мМ ЭДТА, pH 7,0, до получения концентрации белка 20—30 мг/мл. Медленно, при осторожном перемещивании, добавляют насыщенный раствор сульфата аммония (pH 7,5) до появления аморфного осадка, который удаляют центрифугированием. К центрифугату продолжают добавлять насыщенный раствор сульфата аммония до начала кристаллизации. Перекристаллизацию можно повторить. Кристаллы альдолазы хранят на холоде в полунасыщенном растворе сульфата аммония [c.248]

Добавляют в этот буфер 0,2 мМ фруктозо-1,6-бисфосфат, в результате чего альдолаза элюируется добавляют 0,5 г сернокислого аммония на 1 мл фермента (3 мин) перемешивают суспензию 5 мин и центрифугируют ресуспенди-руют осадок для кристаллизации. [c.272]

При очистке ферментов кристаллизация часто является конечным этапом иногда это не приводит к какому-либо повышению удельной активности, так как препарат, возможно, уже достаточно чист . Когда в таблице, отражающей ход очистки фермента, в качестве последнего этапа представлена кристаллизация, это указывает на то, что фермент получен в достаточно чистом состоянии кроме того, это означает, что такой кристаллический препарат пригоден для хранения. Но кристаллы могут образовываться в очень разнородных смесях белков. Если нежелательные примеси не находятся в перенасыщенном состоянии, то агрегация будет затрагивать молекулы только того белка, который присутствует в перенасыщенном состоянии. А если она будет протекать достаточно медленно, то могут образоваться кристаллы этого белка. Например, первоначальный метод очистки кроличьей альдолазы [194] заключался в том, что к мышечному экстракту добавляли сульфат аммония до 50%-ного насыщения, а затем образовавшийся осадок удаляли. Можно подсчитать, что альдолаза составляла 15% белка, оставшегося в надосадочной жидкости. При увеличении кон- [c.333]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология