Ферменты получение

Описанный ниже эксперимент показывает, каким образом был расшифрован генетический код. Раствор ферментов, полученный из бактериальных клеток и добавленный к раствору, содержащему все 20 аминокислот, вызывает синтез полипептидной цепи, состоящей только из остатков аминокислоты фенилаланина, если к нему добавить синтетическую РНК, состоящую из полиурацила (т. е. последовательность iJ-U-U-U-...). Следовательно, кодоном для фенилаланина служит иии, как показано в табл. 15.1. Основную работу по расшифровке генетического кода выполнили американские ученые М. У. Ниренберг, X. Г. Корана и Р. Г. Холли со своими сотрудниками при этом они использовали ферменты, открытые А. Корнбергом и С. Очоа. [c.461]

ФЕРМЕНТЫ. ПОЛУЧЕНИЕ СОЛОДА И МИКРОБНЫХ ФЕРМЕНТНЫХ ПРЕПАРАТОВ [c.113]

В пищевой промышленности в производстве ряда продуктов и напитков применяют ферменты. Традиционно источником ферментов служило сырье растительного и животного происхождения. Успехи микробиологической промышленности позволили перейти в последние 20—25 лет к широкому использованию ферментов, полученных методами биотехнологии на основе дрожжей, грибов и микроорганизмов. В производстве пищевых продуктов в настоящее время используют около 10 типов таких ферментов, в их числе амилоглюкозидазы, глюко-изомеразы, бактериальные амилазы, пектиназы, реннины и др. В 1985 г. в странах капиталистического мира на долю пищевой промышленности приходилось 52% общего потребления ферментов, вырабатываемых из нетрадиционного сырья, что составило 260 млн. дол. [c.217]

Ионообменная хроматография. Фермент, полученный вышеописанным методом, обладает 85—95%-ной чистотой. Для получения более [c.295]

Если каждую составную часть сложной системы заменить на ее зеркальный образ, то получится зеркальное изображение всей первоначальной системы. Однако если только некоторые части сложной системы заменяются на их зеркальные двойники, то в результате возникает хаос. Химические системы, являющиеся точными зеркальными двойниками, ведут себя идентично, а системы только с частичной заменой имеют совершенно различные химические свойства. Если, например, в природе существует фермент, состоящий из Е-аминокислот и синтезирующий О-нуклеотид, то соответствующий искусственный фермент, полученный из О-аминокислот, будет синтезировать Ь-нуклеотид. В то же время соответствующий полипептид, содержащий как 0-, так и Е-аминокислоты, видимо, не будет обладать ферментативной активностью. [c.77]

Характеристика продукции, сырья и полуфабрикатов. Ферментные препараты представляют собой концентраты ферментов, полученные с помощью микроорганизмов, содержащие в своем составе наряду с ферментами балластные вещества. Ферментные препараты применяют в пищевых производствах как катализаторы соответствующих биохимических процессов. [c.87]

В научных исследованиях, а также в биохимической технологии часто необходимо разрушить клеточную стенку. Для этих целей используют механические дезинтеграторы, ультразвук, ли-тические ферменты. Полученную после такой обработки массу, содержащую активные ферменты и неразрушенные структурные элементы клетки, называют клеточным гомогенатом. [c.15]

Ферменты представляется возможным прикрепить к поверхности носителя путем сорбции к ионитам — катионитам (содержащие активные кислотные группы) или к анионитам (содержащим преимущественно основные группы). В качестве сорбентов — носителей ферментов часто используют гель гидроокиси алюминия или фосфата кальция, диатомит, модифицированный крахмал, бентониты, кизельгуры и др. Сорбцию ферментов осуществляют либо в колонках путем пропускания раствора фермента с определенной скоростью через слой ионитов, либо в реакторах, в которых сорбент определенное время перемешивают с раствором фермента. Полученный продукт затем используют как иммобилизованный ферментный препарат. Адсорбция фермента к носителю не обеспечивает их длительную стабилизацию. Более длительную стабилизацию обеспечивает ионообменное связывание фермента, например на модифицированных ионообменных целлюлозах. [c.205]

Для сопоставления каталитической эффективности разных ферментов определяют молекулярную активность, которая соответствует числу единиц в 1 мкмоль фермента (Е/мкмоль) или, иначе говоря, соответствует числу молекул субстрата, превращаемых одной молекулой фермента за 1 мин. Молекулярную активность можно определить лишь в том случае, если известны молекулярная масса фермента и его молекулярная концентрация в растворе. Как правило, такие измерения возможны только для ферментов, полученных в чистом (гомогенном) состоянии. [c.45]

М растворе Na l (4—4,5 мл) и растворяют путем осторожного добавления 0,1 н. раствора NaOH. В связи с тем что карбоксипептидазы А и В являются металлоферментами, в ряде методик рекомендуют добавлять к раствору фермента, полученному по выщеуказанному способу, 0,5 мл 0,1 н. раствора 0 I2 и выдерживать раствор при 25°С в течение 10 мин. Концентрацию фермента можно определить, измерив оптическую плотность раствора при 278 нм (коэффициент молярной экстинкции 8,6-10 , м.м. = 34300). Полученный препарат фермента хранят в холодильнике. [c.155]

Значение константы Михаэлиса может быть использовано для определения концентрации субстрата, необходимой для получения максимальной скорости реакции, а так же при решении вопроса об идентичности ферментов, полученных из различных источников. Для различных классов ферментов значения константы Михаэлиса обычно сильно отличаются. В табл. 29 приведены значения константы Михаэлиса для некоторых ферментов. [c.257]

Ферменты представляют собой вещества белковой природы. Многие из них содержат и небелковый компонент, образуя сложный белок (дегидразы, оксидазы и др.). Ряд ферментов получен теперь в кристаллическом виде (пепсин, трипсин, уреаза, каталаза, амилаза и др.). [c.49]

Благодаря своей специфической активности ферменты представляют особый интерес для исследователей, занимающихся химией белка. В настоящее время непрерывно открывают новые метаболические реакции, очищают и выделяют катализирующие их ферменты (гл. V). Методом гель-хроматографии можно определить молекулярный вес фермента, полученного в виде неочищенного препарата (или в очень небольших количествах), если имеется возможность определить объем выхода с помощью специфического теста. Таким путем легко подобрать необходимые условия для дальнейших этапов очистки. [c.174]

Некоторые ферменты, полученные в чистом кристаллическом состоянии, были гидролизованы методами, применяемыми в химии белков, причем получались те же аминокислоты, что и из белков. [c.793]

В растениях обнаружены все ферменты, участвующие в окислении по пути ЭМП ряд этих ферментов получен в очищенном состоянии. Эти данные приводятся ниже в более развернутом виде. [c.120]

В настоящее время известно более 100 различных ферментов, полученных в кристаллическом состоянии. Все они оказались белками. [c.127]

Оксидаза D-аминокислот в организме млекопитающих находится только Б тканях печени и почек, причем активность ее в почках значительно выше, чем в печени. Этот фермент получен в высокоочищенном состоянии его число оборотов составляет от 1000 до 2000 в минуту [121, 122]. Фермент окисляет множество различных D-аминокислот и не проявляет поддающейся обнаружению активности по отношению к L-аминокисло-там. В связи с этим следует напомнить, что его используют для обнаружения ничтожных количеств D-аминокислот в присутствии высоких концентраций соответствуюших L-изомеров (стр. 95). Отмечены определенные видовые различия в субстратной специфичности фермента так, относительные скорости [c.184]

Для двух оставшихся классов протеолитических ферментов характерны совершенно другие механизмы действия. Пепсин [73] является основным компонентом группы протеолитических ферментов, активных в желудке при низких значениях pH. Хотя пепсин был вторым по времени ферментом, полученным в кристаллическом состоянии (1926 г.), детали его трехмерной структуры стали известны только в последнее время. Свиной пепсин содержит одну полипептидную цепь из 327 аминокислотных остатков известной последовательности. Для нее характерно наличие большого количества (29) аминокислотных остатков, содержащ,их карбоксильную группу, и, как полагают, две или три из них принимают участие в катализе. Так, фермент инактивируется диаз.о-метаном при pH 5,5, хотя для этого и требуется избыток реагента, а для полной инактивации необходима этерификация пяти карбоксильных групп. Более специфичными ингибиторами являются диазокетоны — аналоги субстрата. Toзил-L-фeнилaлaнилди-азометан (45), например, быстро ингибирует фермент в соотношении 1 1 [74] (схема (38) . [c.500]

Получены доказательства, что большинство эффектов цГМФ опосредовано через цГМФ-зависимую протеинкиназу, названную протеинкиназой С. Этот широко распространенный в эукариотических клетках фермент получен в чистом виде (мол. масса 80000). Он состоит из 2 субъединиц -каталитического домена с последовательностью, аналогичной последовательности С-субъединицы протеинкиназы А (цАМФ-зависимой), и регуляторного домена, сходного с К-субъединицей протеинкиназы А (см. ранее). Однако протеинкиназы А и С узнают разные последовательности белков, регулируя соответственно фосфорилирование ОН-группы серина и треони- [c.295]

Предварительный анализ выявил наличие стабилизируюших мутаций в 7 из 10 исследованных сайтов (табл. 8.5). Фермент, полученный при их внесении в один ген, обладал кинетическими свойствами, сходными с таковыми исходного субтилизина. Кроме того, мутантный субтилизин в отсутствие кальция был почти в 10 раз более стабилен, чем исходный и, как это ни удивительно, примерно на 50% более стабилен, чем исходный фермент в присутствии кальция. Полученные результаты показывают, что несмотря на трудоемкость этих экспериментов с помошью генной инженерии можно изменять свойства ферментов, которые зависят от большого числа аминокислотных остатков. [c.173]

Впоследствии Крам и сотрудники синтезировали несколько оптически активных краун-соединений и провели расщепление различных хиральных первичных аммониевых солей и солей аминозфиров с использованием жидко-жидкофазной хроматографии. Кроме того, они осуществили расщепление на оптические изомеры с использованием жидкостной хроматографии на колонке, в которой оптически активные краун-эфиры были привиты к силикагелю [31, 39] или полистиролу [ 39], С упомянутыми работами связано также исследование, в котором был выполнен синтез моделей ферментов. Полученные модельные соединения использовались для проведения асимметрических реакций, Например, были синтезированы оптически активные краун-соединения, которые моделировали присущую ферментам связь с субстратом Эти соединения имеют дополнительные функциональные группы, присоединенные к ди-нафтильным группам. Таким образом, создаются новые центры связывания и достигается более избирательное связывание с "гостем". [c.282]

Проверить возможности известных методов позволяют следующие данные [15]. Измельченный хлопковый линт гидролизовали мультиферментньш препаратом (целловиридин ГЗх + пектофоетидин ГЗх). После окончания реакции (48 ч) остатки непрогидролизованного линта с адсорбированными на нем целлюлолитическими ферментами отделяли и проводили десорбцию ферментов. Полученные результаты представлены в табл. 7.3. Наиболее сильным десорбирующим агентом оказалась мочевина ее использование приводит к десорбции более чем половины прочно адсорбированной эндоглюканазы, что составляло около 25% общего количества эндоглюканазы ферментного препарата (оптимальная концентрация мочевины составила 1 М). [c.195]

Гидрогеназы многих прокариот также обнаруживают высокую чувствительность к молекулярному кислороду, которая in vitro в большой мере зависит от метода вьщеления и степени очистки. Как правило, более устойчивы к Oj неочищенные ферментные препараты. По сравнению с мембрансвязанным ферментом устойчивость к О2 гидрогеназы, отделенной от мембраны, обычно ниже. Фермент, полученный из клеток анаэробов, более чувствителен к О2, чем вьщеленный из клеток аэробных прокариот. [c.329]

Для улучшения свойств сельскохозяйственных растений необходимо внедрение в них такой генетической информации, которая делала бы их устойчивыми к засухе, заморозкам, позволяла расти на засоленных почвах, придавала способность фиксировать азот и устойчивость к сельскохозяйственным вредителям. Это осуществляют переносом соответствующих генов из растений, обладающих подобными свойствами. Так, в качестве примера можно привести создание петунии (Ре1ип1а) или табака (N oliana 1аЬасит), устойчивых к гербициду глифосату, путем введения в клетки растений гена, дающего резистентный к этому веществу фермент. Полученные клетки были затем превращены в целые растения. Внедрение полезной генетической информации осуществлено с помощью Т -плаз-миды. [c.442]

В заместительной терапии, т. е. при нарушении синтеза некоторых ферментов в организме человека, применяют отдельные ферменты и комплексные ферментные препараты. Например, при нарушении функции поджелудочной железы употребляют комплексный препарат, содержащий протеиназу, амилазу и. липазу При потере способности к синтезу лактазы и глюкоамилазы также используют эти ферменты, полученные из микроорганизмов. При нарушении процессов пищеварения в некоторых случаях используют комплекс ферментов (а-амилаза, целлюла-за, липаза и протеиназа). [c.63]

В 1939 г. на Щелковском витаминном заводе был применен диффузионный способ получения сока из шиповника взамен центри-фугального мацерационного способа [8]. В 1941 г. Н. Новотельнов и В. Деева разработали и внедрили метод очистки диффузионного сока из плодов шиповника ферментом, полученным из плесневого грибка Aspergillus niger. [c.15]

Окисление эритро но не трео)-эталяблочноя кислоты до а-оксовалериановой кислоты с помощью фермента, полученного из Ps. aeruginosa, вряд ли целесообразно, поскольку легче синтезировать химическим путем конечный продукт, чем субстрат [c.177]

Были осуществлены многочисленные асимметрические синтезы с ферментами, выделенными (в более или менее чистом виде) из веществ растительного и животного происхождения. Так, эмульсии (смесь ферментов, полученная из косточек горького миндаля, действующая в данном случае при помощи одного из своих компонентов — оксинитри-лазы) катализируют синтез (4-)-миндального эфира (Л. Розенталер, [c.138]

При помощи очищенных ферментов, полученных из дрожжей, оказалось возможным выделить и первые промежуточные продукты этого синтеза. Так, под действием изомер ази изоиентенилиирофссфат превращается в диметилаллилпирофосфат (см. формулу выше). Последний конденсируется под действием другого фермента — синтетазы — с одной или двумя мо.гекулами изопентенилиирофосфата, давая вера-нилпирофосфат и фарнезилпирофосфат соответственно [c.934]

Экономичность конструкции ферментативных систем настолько велика, что они действуют асимметричным образом даже по отношению к оптически неактивным молекулам. Это было продемонстрировано путем такого введения изотопных меток, при котором обычные симметричные молекулы приобретают асимметрию. Было найдено, ято один из энантиомеров лимонной кислоты (ЬУИ1), стереоспецифически меченный, радиоактивным углеродом (С1 ) по одной карбоксильной группе, превращается при действии ферментов, полученных из печени крыс, в а-кетоглутаровую кислоту, [c.534]

Было показано, что фермент 2 катализирует конденсацию ацетил-КоА или бутирил-КоА с малонил-КоА, в результате которой образуются замещенные малонилпроизводные. Пластиды из корня моркови также катализировали эту конденсацию. Продукт конденсации можно было восстановить одним эквивалентом НАДФ-Нз при действии другого частично очищенного фермента, полученного из печени голубя. Хроматографические свойства восстановленного продукта показывали, что в нем еще сохранилась свободная карбоксильная группа малонил-КоА. [c.326]

Транскрипция в принципе протекает почти так же, как редупликация. Главное отличие ее в том, что транскрибируется в каждой области молекулы ДНК лишь одна из двух нитей, вторая остается инертной. При этом транскрипция разных областей ДНК может происходить с разных нитей. Но в каждом месте матрицей служит лишь одна из двух комплементарных нитей ДНК. ДНК содержит особые области, т. наз. промоторы, к к-рым прикрепляется фермент РНК-полимераза — специфич. катализатор поликонденсации рибонуклео-зидтрифосфатов. Этот фермент получен в чистом виде и изучен в модельных внеклеточных условиях. От областей, специфически узнаваемых ферментом, начинается транскрипция, причем фермент перемещается вдоль вновь синтезируемой цепи РНК в направлении от 5 - к З -атому рибозы. [c.192]

Оказалось, что дело обстоит иначе. В месте репликации двойная спираль ДНК слегка расплетается и обе цепи реплицируются небольшими фрагментами по 500—1000 мономерных единиц в длину (Оказаки, Су-гимото). Эти блоки образуются действительно путем встречного движения ферментов вдоль цепей. Но затем образовавшиеся блоки соединяются встык ковалентными (фосфоэфирными) связями. В итоге происходит как бы направленное продвижение точки репликации вдоль хромосомы. Стыкование блоков осуществляется с помощью специального фермента — полинуклеотид-лигазы. Этот фермент получен в чистом виде и хорошо изучен (Гурвиц, Вейс, Ричардсон). [c.197]

Л/ фосфатным буфером при pH, 5. Адсорбцию ферментов ка карбоксиметилцеллюлозе проводили из 0,005]1 фосфатного буфера (pH 5), а элюцию при ступенчатом увеличении концентрации КаС1. Ферменты, полученные после хроматографии на целлюлозных ионообменниках, подвергали дальнейшей очистке Ef изучали [c.158]

Окситриптамин (серотонин) известен как физиологически активное вещество, оказывающее прессорное действие (стр. 406). Декарбоксилаза 5-окситрнптофана обнаружена во многих тканях животных в очищенном состоянии фермент получен из почек свиньи и морской свинки. [c.201]

Первую ступень синтеза глутатиона, а именно образование у-глутамилцистеина из цистеина и глутаминовой кислоты [реакция (1), см. выше], наблюдали в опытах с ферментными препаратами из зародышей пшеницы [539] и из печени свиньи [536]. Фермент из зародышей пшеницы был подвергнут 50-кратной очистке показано, что для его действия обязательно присутствие аденозинтрифосфата и ионов магния и калия. Фермент катали-зирует также включение 5 -цистеина в -глутамилцистеин путем обмена в присутствии аденозинтрифосфата и ионов магния и калия. Сходный фермент получен из печени свиньи для этой системы не требуется наличия ионов калия, однако ионы магния оказались необходимыми. Ферменты из зародышей пшеницы и из печени свиньи не идентичны ферменту, синтезирующему глутамин. В опытах с ферментом из зародышей пшеницы наблюдали обмен между неорганическим фосфатом и аденозинтрифосфатом в присутствии глутамата, а также обмен фосфатной группой между АДФ и АТФ в отсутствие добавленных аминокислот. Интерпретация этих данных пока затруднительна. [c.269]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология