Плазмида со строгим контролем репликации

Строгий и ослабленный контроль репликации плазмид. [c.235]

Плазмиды Е. соИ с ослабленным контролем репликации для инициации репликации используют РНК-полимеразу и ДНК-поли-меразу I. Элонгацию ведет ДНК-полимераза III. В каждой бактериальной кчетке содержится в среднем 40—50 плазмидных копий, такие плазмиды называют еще мультикопийными. Разница между строгим и ослабленным контролем репликации плазмид особенно заметна, когда клетки переходят из экспоненциальной фазы роста в стационарную. При этом плазмиды со строгим контролем и бактериальная хромосома перестают реплицироваться, в то время как плазмиды с ослабленным контролем продолжают дупликацию, и их масса в клетке может достигать массы бактериальной ДНК Аналогичная картина наблюдается и в условиях остановки синтеза белков, например при добавлении в среду хло-рамфеникола. Каждый раунд репликации бактериальной ДНК и плазмид со строгим контролем требует синтеза инициирующих белков, поэтому синтез этих ДНК останавливается. Плазмиды же с ослабленным контролем в таких условиях способны инициировать новые раунды репликации, поэтому их число может достигать нескольких тысяч на клетку. [c.67]

Интеграция. Плазмиды со строгим контролем репликации способны к интеграции в бактериальную хромосому через IS- или Тп-элементы, содержащиеся в их геноме. При этом они подчиняются репликационному аппарату бактериальной хромосомы и могут неопределенно долго существовать в ее составе. Такие плазмиды с двойным образом жизни получили название эписом (например, плазмида F). [c.68]

Репликация плазмид в значительной степени зависит от клетки-хозяина. Мутации, нарушающие репликацию бактериальной хромосомы, обычно влияют и на репликацию плазмид. Принято считать, что репликация плазмид, которые существуют в 1—4 копиях на клетку, подвержена строгому контролю. В то же время контроль репликации многокопийных плазмид является ослабленным, что ведет к колебаниям количества их копий. [c.88]

В табл. 5.2 суммированы данные о модульных особенностях нескольких встречающихся в природе плазмид. Каждый модульный сегмент может содержать один или несколько генов, или цис-дейст-вующих элементов,- таких, например, как область инициации репликации. Функционально родственные модули в различных и независимо вьщеленных плазмидах часто, но не всегда оказываются и структурно родственными, как если бы они произошли от одной ДНК. Каждая плазмида должна иметь по крайней мере один из нескольких репликационных модулей, которые позволяют ей автономно реплицироваться. В одном из классов, типичным представителем которого являются Р-плазм иды, репликация и сегрегация регулируются согласованно с репликацией бактериального генома, и в каждой клетке содержится одна или две копии плазмиды. О таком типе репликации говорят как о репликации со строгим контролем. Второй тип репликационного модуля свободен от такого контроля, что приводит к существованию в клетке многих копий плазмид. Подобный тип репликации получил название репликации с ослабленным контролем. [c.230]

Рис. 3.2. Схема однонаправленной репликации кольцевых плазмид в тета-форме а — строгий контроль б - ослабленный контроль

СТРОГИЙ КОНТРОЛЬ РЕПЛИКАЦИИ. Ограничение репликации однокопийных плазмид, согласованное с репликацией бактериальной хромосомы. [c.526]

Различают строгий и нестрогий контроль репликации плазмид. При строгом контроле репликация плазмид сопряжена с репликацией хромосомы хозяина так, что в каждой бактериальной клетке присутствует лишь одна или немного копий плазмиды. Число копий плазмид, находящихся под ослабленным контролем, составляет 10—200. Это число можно увеличить до нескольких тысяч, если подавить синтез белков бактериальной клетки (например, обработав клетки хлорамфениколом). В отсутствие синтеза белка репликация плазмид с ослабленным контролем продолжается, а репликация хромосомной ДНК и плазмид, находящихся под строгим контролем, прекращается. [c.144]

Типичная плазмида. Модульное строение типичных R-плазмид схематически представлено на рис. 5.1. Около 50% последовательности из приблизительно 1(У пар оснований этих плазмид гомологичны одному из участков F-плазмиды как по структуре, так и по функциям. Эта область включает гены, необходимые для конъюгации (tra) и репликации со строгим контролем. В F-подобной области находится также дополнительный модуль, содержащий гены, контролирующие резистентность к тетрациклину. Вторая половина R-плазмиды не родственна F и содержит модули, ответственные за резистентность к стрептомицину, сульфаниламидам, хлорамфениколу и канамицину. [c.231]

Репликация плазмид в значительной степени зависит от клетки-хозяина. Некоторые плазмиды реплрщируются таким образом, что в клетке они находятся в одной или нескольких копиях. Это так называемые плазмиды со строгим контролем репликации. Другие же плазмиды могут иметь в клетках 10-200 копий. Такие плазмиды находятся под ослабленным контролем репликации. Количество копий плазмид с ослабленным контролем репликации можно увеличить до нескольких тысяч на клетку, если блокировать синтез белка в клетке обработкой хлорамфенишлом. В отсутствие белкового синтеза репликация плазмид с ослабленным контролем продолжается, в то время как репликация ДНК бактериальной хромосомы и плазмид со строгим контролем прекращается. [c.85]

Несовместимость, вызванная подавлением репликации, наблюдается у плазмид как со строгим, так и с ослабленным контролем репликации. Она обусловлена существованием у плазмид генетического механизма поддержания числа плазмидных копий на оп-геделенном уровне, который приводит к тому, что в клетке только идна из двух плазмид (резидентная или с меньщей вероятностью вощедщая) сохраняет способность к удвоению. [c.69]

Термочувствительные мутации в сайте сор позволяют в условиях эксперимента регулировать число копий плазмид, имеющих строгий или ослабленный контроль процесса репликации. В ряде случаев полезны мутации (их называют run-away), приводящие при 42 с к синтезу более 2000 копий плазмид на клетку и вызывающие гибель клеток (см. гл. 10). [c.71]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология