Мутации термочувствительные

Лучистая энергия. Ультрафиолет и ионизирующее излучение непосредственно действуют на нуклеиновые кислоты в клетке, вызывая смертельные мутации, или приводят к образованию свободных радикалов, вызывающих инактивацию ферментных систем и разрушение клеточных структур. Солнечный свет, особенно его коротковолновая часть спектра, оказывает выраженное бактерицидное действие. УФО используют в медицине для обработки (дезинфекции) воздуха и поверхностей в операционных, родильных домах и отделениях, асептических помещениях аптек, в бактериологических лабораториях. Для этих целей в помещениях устанавливают бактерицидные облучатели с длиной волны 260 — 300 нм. Волны 260 нм максимально поглощаются ДНК, что приводит к образованию димеров тимина и соответственно к летальным мутациям. Вместе с тем УФО обладает низкой проникающей способностью и оказывает антимикробное действие только на поверхностях или в прозрачных растворах. Ионизирующее излучение (чаще у-лучи изотопов Со или Сз) используют для стерилизации термочувствительных материалов, например изделий из пластика. Обладая высокой проникающей способностью, этот вид электромагнитных волн приводит к потере электронов и образованию из атомов ионов, появлению свободных радикалов, которые могут приводить к полимеризации и другим химическим реакциям, сопровождающим разрушение химических структур микроорганизмов, а также появлению токсичных перекисных соединений. Чувствительность микроорганизмов к ионизирующему излучению сильно варьирует (например, облучение микобактерий туберкулеза дозой 0,14 мегарад приводит к такому же эффекту, как облучение возбудителя полиомиелита дозой 3,8 мегарад). [c.431]

Рис. 13-32. Клетки, инфицированные вирусом саркомы Рауса, несущего термочувствительную мутацию гена, ответственного за трансформацию (онкогена -sr ) (микрофотографии, полученные с помощью сканирующего электронного микроскопа). А Клетки трансформированы и приобрели аномальную округлую форму при низкой гемпературе (34 °С), при которой продукт онкогена активен. Б. Те же клетки, прочно прикрепленные к культуральной чашке и восстановившие свою нормальную уплощенную форму, после того как продукт онкогена

Когда ретровирус трансформирует нормальную клетку в опухолевую, аномальное поведение часто бывает обусловлено геном, который ( привнесен вирусом, но для выживания и репродукции самого вируса фактически не нужен. Впервые это выяснилось, когда были открыты мутанты вируса саркомы Рауса, способные нормально размножаться, но не трансформирующие клетку. Оказалось, что некоторые из этих нетрансформирующих мутантов не имеют гена (или части гена), кодирующего белок с мол. массой 60000. В результате других мутаций этого гена трансформирующее действие вируса может становиться термочувствительным зараженные клетки проявляют трансформированный фенотип при 34°С, но после повышения температуры до 39°С они быстро (через несколько часов) возвращаются к нормальному фенотипу (рис. 13-32). По-видимому, этот специфический ген в онкогенном вирусе ответствен за клеточную трансформацию (и этим привлекает наше внимание), но является ненужным балластом с точки зрения репродукции самого вируса. [c.427]

Этими авторами выделены также мутанты с блокированными на разных стадиях процессами образования почек и клеточного деления. Нутем переноса в разные сроки культур мутантов из условий инкубации при 23° в условия 36° и нараллельного микрофотографирования клеток определены термочувствительные точки в цикле клеточного деления различных мутантов. Поскольку развитие культур различных мутантов заканчивается при картинах различной морфологии клеток, введены специальные параметры — точка выполнения и точка окончания , которые характеризуются морфологией клеток к моменту переноса клеток в условия повышенной температуры и к моменту окончания функции. Показано при этом, что у 15 из 100 термочувствительных, или ts-му-тантов, блокирование клеточного деления приходилось на одну и ту же стадию клеточного цикла, но контролировалось тремя разными генами. Точка выполнения у всех трех генов приходится на раннюю стадию митотического цикла, примерно на момент закладки почки, а точки окончания были различными. У одного из мутантов точка выполнения и точка окончания совпадали, и клетки гибли вскоре после формирования мелкой почки. Другая мутация блокировала митоа, а третья — отделегше дочерней клетки от материнской. В этом последнем случае, следовательно, наблюдается нормальная закладка почек, синтез ДНК и деление ядер, а точка окончания отсутствует (Hartwell et al., [c.18]

Как и в случае Т-четных фагов, у фага >. первые мутанты были получены по спектру литического действия и по морфологии стерильных пятен. С помощью скрещиваний этих мутантов была построена примитивная генетическая карта хромосомы фага X (фиг. 147). К I960 г. Элан Кемпбелл выделил большое число условно-летальных мутантов фага к, которые, как вскоре было выяснено, по своим основным генетическим свойствам соответствуют только что полученным в это время amber- или ат-щ-тантам Т-четных фагов. Кроме того, были получены и термочувствительные, или /s-мутации фага X, так что наличие набора условно-летальных ат- и /s-мутантов вскоре дало возможность идентифицировать и нанести на карту большую часть генов фага X (фиг. 169). Из этой карты еще более четко, чем в случае Т-четиых фагов, видно, что, как правило, функ- [c.340]

Так как фанспорт исключительно важен для эукариотической клетки, то мутантные клетки, неспособные осуществлять один из его этапов (например, дефектные по маркеру стыковки или акцепторному белку), должны были бы гибнуть. Однако, если мутантный белок не функционирует только при высоких температурах, в обычных условиях клетка с таким дефектом вполне жизнеспособна. У дрожжей было выявлено более 25 температурочувствителъных (термочувствительных) мутаций в генах, отвечающих за секрецию. Клетки, несущие такие мутации, не способны при высоких температурах транспортировать белки из ЭР в аппарат Г ольджи, от одной цистерны Г ольджи к другой, из аппарата Г ольджи к вакуоли или к плазматической мембране. [c.84]

Рис. 13-18. Эти схемы показывают, как можно отличить термочувствительвого мутанта с измененным механизмом клеточного цикла (с(1с) от других термочувствительных мутантов При повышении температуры до рестриктивного уровня, когда продукт мутантного гена не может функционировать нормально, мутант будет продолжать свой клеточный цикл до тех пор, пока не дойдет до этапа, который он не в состоянии пройти (в данном случае это инициация фазы 8). Поскольку, несмотря на блокаду цикла, клетка продолжает расти, мутанты с(1с становятся ненормально большими (на схеме не показано). Между тем при других мутациях, вызывающих нарушение процессов, необходимых для роста на протяжении всего цикла (таких, как синтез АТР), клетка будет останавливаться в любой стадии никла, как только она израсходует свои

Клонированный в составе плазмиды ген тимидинкиназы вируса простого герпеса был использован при разработке нового подхода к конструированию гибридных вирусов, которые имеют крупный геном и вследствие этого к ним неприменимы методы рекомбинации молекул ДНК in vitro. Б. Ройзман с сотрудниками в 1978-1979 гг. показали, что при совместной трансфекции клеток молекулами ДНК штамма HSV-1, имеющего термочувствительную мутацию, и определенным рестрикционным фрагментом ДНК вируса дикого типа удается осуществить так называемое спасение маркера. Оно происходит при рекомбинации in vivo фрагмента вирусного генома с мутантной ДНК вируса, в результате чего мутантный локус замещается локусом дикого типа. [c.386]

Термочувствительные мутации в сайте сор позволяют в условиях эксперимента регулировать число копий плазмид, имеющих строгий или ослабленный контроль процесса репликации. В ряде случаев полезны мутации (их называют run-away), приводящие при 42 с к синтезу более 2000 копий плазмид на клетку и вызывающие гибель клеток (см. гл. 10). [c.71]

Гены R-M систем могут локализоваться на бактериальных хромосомах, плазмидах, вирусных ДНК. Ряд генов R-M систем класса II удалось проклонировать и расшифровать последовательность их нуклеотидов. Наблюдается большое разнообразие генетической организации систем рестрикции-модификации у разных микроорганизмов (рис. 1.10), но общим является сцепленность генов г (рестриктазы) и т (метилазы) и строгая координация их экспрессии. В частности, это показано для системы рестрикции-модификации ЕсоШ, имеющей термочувствительную мутацию по гену метилазы. При непермиссивной температуре (при которой метилаза инактивирована, а рестриктаза нативна) происходит гибель клеток из-за расщепления собственной ДНК. [c.20]

Для конструирования многокопийных плазмидных векторов используют плазмиды либо с ослабленным контролем репликации, либо с термочувствительными мутациями по функции репликации. Из векторов первого типа широкое распространение получили плазмида oIEl и ее многочисленные производные (см. 2.2.1), находящиеся в обычных условиях в клетке в количестве 20-60 копий. [c.139]

В качестве селективного маркера М. Мэнос с соавторами в 1983 г. предложили также использовать ген тимидинкиназы вируса HSV-1 с термочувствительной мутацией tel 117. В ре- [c.341]

Эффективный метод выделения термочувствительных неврологических мутантов разработал канадский генетик Дэйв Сузуки (Suzuki), получавший индуцированные мутации, подобно Бензеру, с помощью химических мутагенов. В р2 от скрещивания мутантных самцов с самками линии-анализатора отбирали нормальных по фенотипу особей и помещали в термостат при температуре 20 °С. У отдельных особей при воздействии повышенной температуры обнаруживалось состояние паралича, так что обездвиженных мух можно было отделить от остальных. Это состояние было обратимым и при температуре 22 °С восстанавливалась нормальная двигательная активность. Сузуки выделил с помощью этого метода ряд неврологических мутаций, локализованных в Х-хромосоме и в третьей паре аутосом. [c.164]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология