Получение очищенных ферментов

Периодический процесс разделения белков осуществляют путем их адсорбции и последующего элюирования. Условия проведения такой процедуры следует установить в ходе контрольных опытов с каждой партией адсорбента и обычно с каждым препаратом белка (фермента или антитела), предназначенным для разделения. На рис. 16.6 представлены результаты проведения циклов адсорбции и элюирования, полученные в контрольных опытах. На рис. 16.6, Л показаны три процесса адсорбции, различающиеся в зависимости от природы очищаемого материала, примесей и других параметров, например pH и ионной силы. Интересующий нас белок может адсорбироваться лучще, чем белки-примеси (слева), так же, как они (в центре), или хуже (справа). В первом случае к раствору добавляют такое количество адсорбента, какое необходимо для извлечения основной части нужного вещества, при этом большинство других белков остается в растворе (положительная адсорбция). Если нужный белок адсорбируется хуже примесей, то адсорбент добавляют, а затем удаляют до тех пор, пока не начнется адсорбция нужного белка (количество адсорбированного белка должно составлять около 10%). В этом случае вначале удаляются белки-при-меси (отрицательная адсорбция), после чего нужный частично очищенный материал можно адсорбировать или очистить каким-либо иным способом. Если примесный и основной белки адсорбируются с одинаковой скоростью, адсорбция может привести лишь к небольшой степени очистки. Тем не менее можно добиться положительных результатов, подвергнув очищаемый белок последовательным циклам адсорбции и элюции. [c.203]

Синтез конъюгатов гаптенов с ферментами основаны в принципе на тех же методах, что и синтез конъюгатов белков с ферментами. Однако есть ряд особенностей, которые необходимо учитывать при проведении синтезов. Во-первых, многие гаптены плохо растворимы в водных растворах и поэтому получение конъюгатов приходится проводить в водно-органической среде, что сказывается на ферментативной активности конъюгата. Во-вторых, бывает очень сложно очистить конъюгат от свободного фермента, а это приводит к высоким фоновым реакциям, а поэтому синтез должен быть выполнен с высоким выходом. В-третьих, для сохранения иммуногенных свойств гаптен должен быть пришит к ферменту через углеводородную ножку , содержащую 5—6 атомов цепи. [c.192]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология