Белки разделение

Рибонуклеаза. — Одна из рибонуклеаз была выделена в кристаллическом виде из бычьей поджелудочной железы Купит-цем (1940). Панкреатическая рибонуклеаза гидролизует рибонуклео-тидные связи, в которых пиримидиновый нуклеозид этерифицирован по З -положению сахара. Этот фермент содержит 124 остатка аминокислот и четыре дисульфидные связи. Установление первичной структуры этого фермента Муром и Штейном (1960) явилось важной вехой в химии белка. Последовательность частично была определена на окисленной рибонуклеазе, которая при энзиматическом расщеплении дает 24 пептида. Их размеры позволяют непосредственно определить последовательность химическими и ферментативными методами. Наконец, ферментативный гидролиз нативного белка, разделение содержащих цистин пептидов, окисление их до цистеиновых пептидов и аминокислотный анализ последних позволили выяснить, каким образом восемь по-луци1стинооых о статков связаны друг с другом (рис. 27, стр. 740). [c.739]

Определение изоэлектрических точек белков, разделенных методом изоэлектрического фокусирования в геле. Чтобы определить изоэлектрическую точку белка, необходимо измерить pH содержащего его участка геля. [c.158]

В сравнении с хроматографическими методами все другие способы очистки белков за последние годы начинают несколько отступать на задний план. Все же следует упомянуть здесь о препаративном электрофорезе, который применяется довольно широко в разных исполнениях. Для фракционирования малых весовых количеств белков разделение смеси белков на зоны ведут в том или ином стабилизирующем наполнителе для ликвидации конвекционного перемешивания. Пригодными наполнителями являются волокна целлюлозы, в частности бумага. Бумажный электрофорез белков похож на разделение аминокислот и пептидов на бумаге, о чем мы уже говорили выше. Другой широко употребительной средой является гель крахмала, который разрезается на кусочки после завершения электрофореза, и из каждого куска элюируется содержащийся в нем белок. [c.131]

Указан молекулярный вес белков, разделенных на данном типе агарозы. [c.53]

Применение. Распределительная хроматография стала эффективным средством разделения близких по химическим свойствам веществ. Типичным примером служит разделение многочисленных аминокислот, образующихся при гидролизе белка, разделение и определение родственных алифатических спиртов и разделение сахаров. Рис. 29-15 иллюстрирует применение метода для разделения карбоновых кислот. В этом случае в качестве твердого носителя использовали силикагель, в качестве стационарной фазы — [c.281]

В последние годы все большее внимание привлекают разработка и использование ионообменных методов анализа и выделения продуктов расщепления белков (аминокислоты, пептиды) и самих белков. Разделение смесей аминокислот на отде.льные компоненты производят обычно на сульфокатионитах с последовательной раздельной десорбцией аминокислот растворами с закономерно увеличивающимся pH на основе такого процесса созданы и серийно выпускаются ионообменные аминокислотные анализаторы. [c.13]

Наилучшее разделение рибосомных белков было достигнуто при использовании методов двухмерного электрофореза. В этих методах вначале проводят электрофорез в цилиндрическом геле, который затем помещают в аппарат, где формируют пластину второго геля. Белки, разделенные в первом направлении, подвергают электрофорезу в направлении, перпендикулярном оси цилиндрического геля. Для получения хороших результатов необходимо при разделении во втором направлении изменить либо заряд белков, либо ситовые свойства геля, либо оба этих параметра. [c.312]

Покажите, что для объекта, состоящего из двух сферических белков, разделенных расстоянием интенсивность рентгеновского рассеяния в растворе равна [c.451]

Наиболее полное разделение смеси белков на индивидуальные компоненты достигается с помощью электрофоретических методов. Как уже обсуждалось в разд. 5.2, проведение препаративного электрофореза, несмотря на то что он обладает значительными теоретическими преимуществами, сопряжено с большими трудностями. Поэтому он используется не часто. В аналитическом же варианте электрофорез — это один из наиболее широко применяемых методов исследования. Действительно, чтобы охарактеризовать очищенные препараты белков, их теперь почти обязательно подвергают электрофоретическому анализу. Для проведения аналитического электрофореза в гелях требуется всего 5—25 мкг белка это обычно не слишком значительная часть полученного препарата. До того как были предложены гелевые системы, электрофоретический анализ проводили в аппарате Тизелиуса методом движущейся границы. Хотя для этого приходилось расходовать десятки миллиграммов белка, разделения очень сходных белков не достигалось и анализ каждого образца требовал больших усилий и внимания. Затем был разработан аналитический электрофорез на бумаге и других целлюлозных материалах, используемых в качестве носителей, что исключило два из указанных выше недостатков метода Тизелиуса количество необходимого для анализа белка значительно сократилось и проводить электрофорез стало намного легче, так как для этого метода требуется только простое оборудование. Однако разрешение осталось примерно таким же, как н прежде, даже при использовании обладающих хорошими качествами современных ацетатцеллюлозных пленок это объясняется тем, что разделение компонентов смеси происходит в соответствии только с приблизительной величиной отношения заряд/размер и многие белки движутся вместе в виде одной зоны (ср. с разд. 5.2). [c.316]

Хлоропласты разных растений могут значительно отличаться по форме, но обычно имеют вид округлых или дискообразных телец диаметром около 5 мкм, толщиной 2... 3 мкм. Снаружи хлоропласты окружены оболочкой, состоящей из двух мембран — наружной и внутренней. Каждая мембрана образована двумя слоями белков, разделенных бимолекулярным слоем липидов. Внутренняя мембрана ограничивает бесцветную стро-му, в которой располагается много уплощенных мембранных мешочков — тилакоидов, собранных в стопки, называемые гранами. Количество гран может составлять 40... 50 и более. Число тилакоидов в гране колеблется от пяти-шести до нескольких десятков. Отдельные тилакоиды соседних гран соединены между собой ламеллами — мембранами стромы. [c.74]

Коммерческие препараты панкреатической рибонуклеазы негомогенны. Они состоят из двух основных компонентов Л и 5, с близкой структурой и свойствами, но различающихся по своей специфичности. На долю компонента Б обычно приходится от 10 до 20% от исходного препарата белка. Разделение фракций Л и осуществляют хроматографически на колонке с КМ-целлюлозой (или на амберлите IR —50/ХЕ-64). [c.113]

Сначала исследуемый антлген подвергают электрофорезу макрометодом, описанным на стр. 137. Затем в непосредственной близости от области разделения антигена в агаровом геле вырезают широкий желобок, который заполняют смесью расплавленного агара с иммунной сывороткой. Белки, разделенные в электрическом поле, диффундируют в агаровый гель, содержащий антитела. Расстояние, проходимое белкамй обусловлено закономерностями линейной дис узии в геле (см. стр. 128). Поэтому, измерив смещение вершин преципитационных полос от границы желобка, можно определить скорость диффузии, т. е. величину А, а с ее помощью и концентрацию исследуемых белковых фракций. [c.161]

Некоторые вещества (например, триптофансодержащие пептиды) задерживаются на сефадексе 0-25 (см. стр. 197). Подобные взаимодействия играют большую роль при разделении олигрпептидов из частичных (главным образом ферментативных) гидроли-затов белков. Разделение смеси пептидов представляет [c.219]

В этом случае применяемые органические растворители и их смеси необходимо рассматривать соответст еино с задачами разделения органических веществ оиределеиного химического состава, например, разделения смесей аминокислот, пептидов или белков, разделения смесей углеводородов, выделения витаминов, очистки антибиотиков и в других случаях, чаще всего применяют смеси нескольких растворителей, что обеспечивает весьма дифференцированное и четкое разделение отдельных хсо.мнонентов смеси, зачастую очень близких по хилга-ческим и физическим свойствам. [c.397]

Данные этого рода были использованы в поддержку гипотезы, согласно которой мембраны состоят из двух слоев белка, разделенных бимолекулярным слоем липида. В настоящее время эта гипотеза, предложенная Даниэлли и Дэвсоном в 1943 г. [6], получила широкое признание. Основные черты модели Даниэлли и Дэвсона в схематическом виде представлены на фиг. 22. Полярные концы липидных монослоев обращены к белку, а углеводородные части обращены к центру именно эта центральная [c.51]

Существует несколько методик обнаружения полос белков, разделенных методом изоэлектрической фокусировки. Однако при применении некоторых детектирующих реактивов необходимо перед опрыскиванием пластинки удалить из геля амфолиты-носители. Для этой цели Боур [399] промывал гели 6— [c.178]

Другой способ осуществления реакции между белками и ДСН после первого этапа электрофореза предложили Метц и Богорад [865, 866]. Они применили процедуру (см. подробное описание в разделе, посвященном электрофорезу рибосомных белков), в которой буфер, используемый при электрофорезе в первом направлении, играет роль концентрирующего буфера в неоднородной буферной системе, применяемой во втором направлении. Сразу же после первого этапа электрофореза гель заплавляют в пластину геля и начинают электрофорез в направлении, перпендикулярном первому, В верхний электродный буфер добавляют ДСН, который под действием электрического поля входит в гель и образует комплексы с белками, разделенными при электрофорезе в первом направлении. [c.231]

Крамбах и др. [234] использовали коллоидный раствор кумасси яркого синего в 12,5%-ной ТХУ. Поскольку этот краситель имеет низкую растворимость в 12,5%-ной ТХУ, его растворяют в воде и перед употреблением смешивают с раствором ТХУ так, чтобы получились нужные концентрации. После фиксации белков в 12,5%-ном растворе ТХУ гели погружают на 30—60 мин в раствор, содержащий 0,02—0,05% кумасси яркого синего К-250. Обесцвечивание проводить не обязательно, так как коллоидные частицы красителя не проникают в гель. Если окрашенный фон все же появляется, то его устраняют путем вымачивания геля в 7%-ной уксусной кислоте. Для фиксации белков, разделенных в присутствии мочевины, можно использовать раствор, содержащий 5% ТХУ и 5% сульфосалициловой кислоты. Быстрый метод фиксации и окрашивания белков кумасси ярким синим предложили Маурер и Аллен [840]. Гели фиксируют в течение 30 мин при 65 "С в 0,2%-ном растворе кумасси яркого синего в смеси вода — абсолютный спирт —уксусная кислота (45 45 10 по объему). Пластины геля, находящиеся в кювете с красителем, следует через каждые 10 мин переворачивать. (Этот метод можно использовать и для окрашивания белков после ИЭФ.) [c.269]

Впервые двухмерная система для электрофореза рибосомных белков была описана Кальтшмидтом и Уитменом [654]. Позднее сходные процедуры были применены и другими авторами. Все существующие в настоящее время методы можно разделить на две группы. К первой группе относятся методы, в которых при электрофорезе во втором направлении изменяют заряд белков, сдвигая pH буфера геля в ту или другую сторону. В методах второй группы заряд и структура белков, разделенных в первом направлении, резко изменяются в результате комплексообразования с ДСН. [c.312]

Кичин и др. [681, 682] применяли вертикальный электрофорез в пластинах 5%-ного полиакриламидного геля в буфере трис-борат-ЭДТА (pH 8,2). Полученная картина была аналогична той, которую дает вертикальный электрофорез в крахмальном геле. В обоих случаях было выявлено несколько вариантов фенотипов. Дальнейшее уточнение фенотипов группоспецифических веществ было достигнуто с помощью перекрестного иммуноэлектрофореза [239]. Белки, разделенные путем электрофореза в полиакриламидном геле, подвергали затем электрофорезу в агарозном геле, содержавшем антитела к труппоспецифическим веществам. [c.340]

РИС. 6.7. Гель-хроматография белков на колонках TSK SW в растворах Gu-H I. Белки восстановлены и алкилированы иодоацетамидом [9]. а—использованы три колонки TSK SW. Элюент — 6 М Gu-H I, содержащий 0,1 М NaH2P04, pH 6. Эталонные смеси белков содержали 1 — тиреоглобулин, 2 БСА, 3 — овальбумин, 4 — миоглобин, 5 — цитохром с, 6 — инсулин б—градуировочные графики для белков, разделенных в 6 М Gu H i на колонках TSK SW. [c.208]

Белки, разделенные в геле с помощью ДСН-электрофореза, переносят на твердую подложку, например на нитроцеллюлозу или активированную бумагу (Renart et al., 1979). Считается, что активированная бумага, с которой перенесенные белки связываются ковалентно, обладает более высокой сорбционной емкостью, которая, к сожалению, проявляется и в более высоком фоновом связывании. На сегодняшний день наиболее популярным материалом матрицы для белкового переноса является нитроцеллюлоза. Методы фракционирования белков в геле с использованием ДСН-электрофореза и (или) изоэлектрофокусирования весьма многочисленны и разнообразны. В настоящей статье мы не будем их рассматривать, а при изложении материала будем считать, что у нас имеется гель, в котором с применением тех или иных электрофоретических приемов уже провели разделение белковых компонентов исследуемых образцов. [c.342]

Двумерный гель-электрофорез широко используется как аналитический метод. Он заключается в том, что полоску геля, содержащую белки, разделенные, например, с помощью изоэлектрического фокусирования, накладывают на кромку пластины другого геля, содержащего ДСН. Электрофорез проводится в направлении, перпендикулярном длинной оси полоски первого геля (рис. 9.5). Окончательные результаты разделения зависят от того, что в первом направлении белки разделяются в соответствии с их изоэлектрическими точками, а во втором — в соответствии с размерами субъединиц. Неочищенные клеточные экстракты в двумерных системах могут давать до 1000 индивидуально детектируемых белковых компонентов. Однако для анализа очищенного фермента необходимо проводить лишь одномерный электрофорез в каждой из двух систем (изоэлектри- [c.324]

Поскольку нитроцеллюлоза связывает также и белки (около 100 мкг/см2), можно использовать метод, аналогичный переносу Сазена, чтобы сохранить картину распределения белков, разделенных электрофоретически. Вместо простой диффузии, ис- поЛьзуемой при переносе пятен РНК и ДНК, для миграции [c.324]

У полового фактора F в локусе par кроме действующего в г/мс-положении участка ДНК выявили два прилегающих к нему гена, функционирующих в транс-положении и кодирующих белки, существенные для процесса разделения молекул плазмид. Полный размер такого локуса par составляет 2,8 тпн. i/мс-Действую-щий элемент локуса par состоит из ряда прямых повторов, которые включают более короткие инвертированные повторы (палиндромы). С этой последовательностью связываются плазмидные белки разделения и некоторые белки клетки-хозяина, и такой ДНК-белковый комплекс, названный партисомой (partisome), обеспечивает правильное распределение плазмид между дочерними клетками, образующимися при делении. Для локуса par профага Р1, который фактически является низкокопийной плазмидой, обнаружено удивительное сходство в организации с локусом par полового фактора F. [c.205]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология