Отщепление на твердофазном секвенаторе

ОТЩЕПЛЕНИЕ НА ТВЕРДОФАЗНОМ СЕКВЕНАТОРЕ 393 [c.393]

Отщепление на твердофазном секвенаторе [c.393]

ОТЩЕПЛЕНИЕ НА ТВЕРДОФАЗНОМ СЕКВЕНАТОР 395 [c.395]

ОТЩЕПЛЕНИЕ НА ТВЕРДОФАЗНОМ СЕКВЕНАТОРЕ 397 [c.397]

Ручная конверсия, В твердофазных секвенаторах отщепленные тиазолиноны аминокислот элюируются в пробирки коллектора фракций в растворе, содержащем 1,5 мл ТФУ и 3 мл метанола. Прн ручном превращении АТЗ хранят в этой смеси в течение ночи при комнатной температуре. Однако АТЗ чувствительны к кислороду, поэтому происходит частичное разрушение производных некоторых аминокислот (например, Ser, Thr, Arg, His). Кроме того, если после обработки ТФУ колонка промывается метанолом, то Asp и Glu частично превращаются в соответствующие метиловые эфиры. Для предотвращения этого рекомендуется после проведения реакции колонку промывать сначала 1,2-дихлороэтаном или ДМФА. Для увеличения выхода ФТГ-производных Ser и Thr раствор АТЗ разбавляют водой, как указано ниже. [c.397]

С появлением ВЭЖХ и высокочувствительных проточных детекторов стал возможным анализ на микроуровне с идентификацией пикомольных количеств вещества. Чувствительность микроанализа ограничивается чистотой производных, их стабильностью в ходе и после отщепления, наличием примесей. Обязательное условие — высокая чистота растворителей для устранения возможности загрязнения секвенатор, во-первых, должен иметь минимальные мертвые объемы и некорродирующие клапаны и соединения, во-вторых, необходимо постоянно поддерживать на высоком уровне технические параметры прибора. Лимитирующими факторами в жидкофазном анализе является качество полибрепа, в твердофазном — качество носителей. Дополнительно осложняет анализ существенное различие выходов отдельных производных. Некоторые тиогидантоины отщепляются с высокими выходами и устойчивы, другие присутствуют в малых количествах, так как они либо плохо отщепляются, либо разрушаются после отщепления в любом случае их трудно обнаружить на фоне побочных продуктов. Следует тщательно контролировать техническое состояние прибора для того, чтобы быть уверенным в результатах тех анализов, где [c.401]

Для устранения потерь с промывками образца был предложен твердофазный (ТФ) метод анализа [И] Благодаря ковалентному присоединению изучаемого полипептида к химически модифицированной матрице носителя (па основе стекла или полистирола) исключены потери образца при промывке его органическими растворителями в процессе отщепления аминокислот. Простота конструкции колонки-реактора ТФ-секвепа-тора облегчает ее миниатюризацию, что позволяет повысить чувствительность определения последовательности. В то же время ковалентное присоединение пептидов и белков к носителю в гетерогенной системе пе так просто осуществить, а выходы на этой стадии составляют лишь 20—50%. Реакции связывания белка (пептида) с матрицей носителя проводятся вне секвенатора, они весьма трудоемки и требуют длительного времени. Необходимо отметить, что планирование эксперимен- [c.464]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология