Бомбардировка микрочастицами

Бомбардировка клеток микрочастицами. Эта группа методов, иначе называемых баллистической (biolisti ) инъекцией, первоначально была разработана для введения рекомбинантных ДНК в клетки растений и в настоящее время приспособлена также для введения нуклеиновых кислот в клетки микроорганизмов, животных и человека как in vitro, так и in vivo [210, 216]. При этом подходе микрочастицы, содержащие ДНК, с помощью порохового заряда, сжатого гелия или электрического поля разгоняют до высоких скоростей ( 1000 м/сек) и поток частиц кратковременно направляют на поверхность клеток. Некоторые из ча- [c.151]

Как интеграция, так и экспрессия чужеродных генов может зависеть от конфигурации вектора, используемого для их введения. Например, частота трансформации повышается, если используется линейная, а не кольцевая ДНК. Кроме того, при бомбардировке микрочастицами высокомолекулярные плазмиды (>10 т. п. н.) могут фрагментироваться, поэтому уровень экспрессии чужеродных генов окажется ниже, чем в случае плазмид меньшего размера. [c.381]

Таблица 17.3. Трансгенные растения, полученные бомбардировкой различных растительных клеток микрочастицами

Д. Армалео с соавторами в 1990 г показали, что плазмиды можно вводить в нативные клетки дрожжей при бомбардировке последних разогнанными до большой скорости (около 500 м/с) вольфрамовыми микрочастицами (диаметр 0,5-0,65 мкм), на которых адсорбированы молекулы плазмидной ДНК (так называемая генная пушка). Если адсорбировать на микрочастицах молекулы двух разных плазмид, данным методом удается осуществлять трансформацию дрожжей обеими плазмидами одновременно (котрансформацию) с частотой, близкой к 100%. [c.293]

Ионная бомбардировка распыляет катод, микрочастицы титана оседают на деталях насоса и образуют активную пленку, сорбирующую газы. Химически активные [c.81]

При этом методе затрудняется воспроизводимость результатов еще и потому, что испарение атомов с поверхности катода при ионной бомбардировке сильно зависит от дефектности кристаллической решетки этой поверхности. Возможно выбивание значительных групп атомов в виде микрочастиц, масса которых значительна и может повредить уже осажденные слои. Такое выбивание частиц случайно и является существенным ограничением промышленному использованию метода. [c.56]

Новый подход, позволяющий индуцировать у организма иммунный ответ без введения антигена, основан на включении в клетки животно-го-мишени гена, кодирующего белок-антиген. В первых экспериментах такого рода Е. соН-плазмиду, содержащую клонированный ген белка-антигена, транскрипция которого находилась под контролем промотора вируса животных, конъюгировали с микрочастицами золота и бомбардировали ими клетки уха мыши. Впоследствии выяснилось, что клонированную кДНК можно вводить в клетки и с помощью внутримышечной инъекции раствора с большим количеством плазмиды, несущей соответствующую ДНК. Для этого необходимо в 10 -10" раз больше ДНК, чем при бомбардировке микрочастицами. В одном из экспериментов более чем в 75% случаев ген включался в клетки мыши, и синтезированный белок-антиген индуцировал синтез антител. Этот подход позволяет избежать очистки антигена, что требует много времени и средств, или использования для соз- [c.233]

Бомбардировка микрочастицами, или биолистика, — наиболее многообешаюший метод введения ДНК в растительные клетки. Золотые или вольфрамовые сферические частицы диаметром [c.380]

Нопав в клетку, ДНК, покрывающая частицы, каким-то неизвестным способом интегрируется в растительную ДНК. Метод бомбардировки микрочастицами позволяет трансформировать растения самых разных видов, в том числе однодольные и хвойные, в которые не удается ввести ДНК с помощью Agroba terium. [c.380]

В чем заключается метод бомбардировки клеток микрочастицами, использующи1 ся для трансформации растений [c.388]

Введение рекомбинантных ДНК в составе векторных молекул в хлоропласты высших растений в основном осуществляют биолистическими (biolisti ) методами путем бомбардировки клеток микрочастицами с сорбированными на них молекулами ДНК [199]. Принцип таких методов будет кратко рассмотрен в разделе 3.8.3. По-прежнему весьма популярным остается метод трансформации хлоропластов с использованием полиэтиленгликоля [200]. [c.142]

OM (липофекция) и т.п. химических реагентов. В соответствии со своим названием в физических методах применяют электрические поля высокой напряженности (электропорация), а также лазерное излучение для создания пор в мембранах клеток-реципиентов рекомбинантных ДНК. Наконец, при механическом введении ДНК имеет место грубое нарушение целостности мембран клеток, например, при микроинъекции или бомбардировке клеток микрочастицами, на которых сорбированы рекомбинантные молекулы. [c.143]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология