Иммунологический скрининг

Те клетки на чашке, которые соответствуют окрашенным пятнам на фильтре, содержат или полноразмерный ген, или достаточно протяженный его участок, обеспечивающий синтез белкового продукта, узнаваемого первыми антителами. По окончании иммунологического скрининга геномной библиотеки необходимо определить, какой именно из отобранных клонов содержит полноразмерный ген. [c.68]

Следующий после создания библиотеки этап -это поиск клона (клонов), несущего искомую последовательность ДНК. Для этого используют три широко известных метода гибридизацию с меченым ДНК-зондом с последующим радиоав-тографическим анализом, иммунологический скрининг и скрининг по активности белка, кодируемого геном-мишенью. [c.64]

Иммунологический скрининг В отсутствие ДНК-зонда для скрининга геномной библиотеки можно использовать другие методы. Например, если клонированный ген экспрессируется, то его продукт - весь белок или его часть - можно обнаружить иммунологиче- [c.67]

Рис. 4.14. Иммунологический скрининг геномной библиотеки (иммунологическое тестирование колоний). Клетки после транстформации высевают на твердую питательную среду, обеспечивающую рост только трансформированных клеток. 1. Переносят клетки из каждой выросшей колонии на твердую подложку (например, нитроиеллю-лозный или найлоновый фильтр) так, чтобы их расположение в точности соответствовало таковому на чашке.

Фаговый дисплей. Экспрессию клонируемых генов могут обеспечивать, конечно, и фаговые векюры. Так, векторы Agt 11 (рис. 7.6), AZAP и A0RF8 (рис. 7.7) используют с целью иммунологического скрининга гибридных белков, если целевой ген вставлен в правильной рамке. По сравнению с плазмидными векторами, здесь фаги дополнительно выступают как средство для вскрытия клеток, делая доступными внутриклеточные белки для применения антител. Неожиданной и плодотворной стала идея использовать фаги также с целью извлечения из клетки целевого белка или олигопептида путем его слияния со структурными фаго- [c.336]

Иммунологический скрининг. Для скрининга рекомбинантной популяции в отношении экспрессии данного гена используют более общий метод, в основе которого лежит иммунологический подход. Синтезируемый белок в этом случае не должен быть функционально активным необходимы лишь специфические антитела к нему и клетки хозяина, не синтезирующие данный антиген. Антитела взаимодействуют с белковыми молекулами одного клона. Их выявляют по аккумуляции радиоактивности, источником которой служат либо меченые антитела, либо специфические меченые реагенты, узнающие иммуноглобулины (например, белок А Staphylo o us aureus). [c.300]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология