Множественные тандемные копии

ТАНДЕМНЫЕ ПОВТОРЫ. Множественные копии одинаковых последовательностей, расположенных одна за другой, ориентированных в одном направлении. [c.527]

Анализ клонов ТК -трансформантов показал, что вводимый вирусный ген ковалентно связывается с хромосомной ДНК клетки. Независимо выделенные клоны трансформантов различались по местам интеграции чужеродной ДНК, следовательно, встройка экзогенной последовательности не происходит только по определенной хромосоме или ее району. Многие исследователи отмечали широкую вариабельность получаемых клонов трансформантов по числу копий интегрированного гена tk (от одной до нескольких десятков на геном клетки). При этом в каждой клетке (клоне) встройка трансформирующей ДНК происходит в виде множественных тандемных повторов чаще всего в единственное место на одной из хромосом. [c.341]

Геном эукариот обладает способностью накапливать дополнительные последовательности экзогенного или эндогенного происхождения. Такие последовательности независимо от того, добавлены ли они извне или имеют хромосомное происхождение, могут давать начало множественным копиям, которые существуют в виде тандемных последовательностей либо вне хромосомы, либо в составе хромосом. Находясь вне хромосом, дополнительный материал наследуется неравномерно (он не сегрегирует поровну прй делении, как это свойственно истинным плазмидам). Материал, включенный в геном хозяина, является его компонентом. [c.497]

Точный механизм, обеспечивающий интеграцию инъецированной ДНК в хромосомы клетки-хозяина, неизвестен, однако некоторое представление о характере процесса можно составить на основе анализа структурной организации ДНК, интегрированной в геном трансгенных мышей. Примерно у 70 % трансгенных мышей во всех соматических клетках и клетках зародышевого пути имеется экзогенная ДНК, что свидетельствует о том, что интеграция обычно происходит до первого цикла репликации ДНК. Остальные 30 % трансгенных животных обнаруживают ту или иную степень мозаичности, что, вероятно, является следствием интеграции ДНК на более поздних стадиях. Количество копий трансгена в геноме сильно варьирует и может достигать нескольких тысяч. В то же время в клетках первичных трансгенных животных обычно имеется только один участок интеграции множественные копии трансгена, как правило, представляют собой серию тандемных повторов внутри единственного локуса. Участок интеграции в геноме клетки-хозяина, по всей видимости, строго не детерминирован и определяется случайным образом. Интеграционные события наблюдались во многих ауто-сомах, а также в X- и Y-хромосомах. [c.450]

Поздняя репликация ДНК фага Я ведет к образованию а-мо-йкул, хвостовая часть которых содержит множественные тандемные копии (конкатемеры) вирусного генома. На заключитель- [c.275]

Рис. 4.5. Структура. шкерного участка, соединяющего проинсулиновые домены в гибридном белке, состоящем из -галактозидазы и множественных тандемных копий проинсулина [25].

Размер гетерологичного белкового фрагмента — важный параметр при клонировании гибридных белков, содержащих -галактозидазу. Стабильность (а следовательно, и выход) гибридных белков, как правило, снижается при увеличении размера чужеродного фрагмента. Во многих случаях желательно, чтобы в состав гибридных белков входили короткие фрагменты. Для получения специфических антител вполне достаточными оказываются фрагменты гетерологичной ДНК, кодирующей антиген длиной всего 200 п.н. [16]. Вместе с тем использование коротких фрагментов может привести к тому, что при небольшой относительной массе чужеродного полипептида (по сравнению с массой -галактозидазы) титр специфичных к чужеродному белку антител у иммунизированных животных окажется низким. Аффинная очистка антител в этом случае также менее эффективна вследствие низкой емкости аффинных колонок, в которых связанные с носителем гибридные белки несут короткие гетерологичные фрагменты. Один из путей решения этой проблемы состоит в увеличении молярного соотношения гетерологичный фрагмент -галактозидаза в гибридном белке. Это достигается пришиванием к гену la Z множественных тандемных копий гетерологичного фрагмента ДНК. На рис. 5.5 приведены сравнительные результаты клонирования и экспрессии одной из пяти копий кодирующего фрагмента гена ftz Drosophila в pUR291. Выход гибридного белка, кодируемого одной копией этого гена, примерно в десять раз превышает выход белка, кодируемого пятью тандемными копиями. [c.147]

Рис, 7,2. Возможные варианты интеграции плазнид. Результатом одиночного рекомбинационного события является единичная интегрированная копия векторной последовательности, ограниченная прямыми гомологичными повторами (а), или же множественные тандемно организованные копии вектора (б). Двойной кроссинговер приводит к замещению хромосомной ДНК гомологичными последовательностями рекомбинантной плазмиды, не сопровождающемуся интеграцией векторных последовательностей (в). [c.214]

Интеграция — результат рекомбинации между гомологичными последовательностями плазмидной ДНК и хромосомы клетки-хозяина. Интегрированная копия плазмидного вектора оказывается фланкированной прямыми повторами дупликации подвергается участок взаимной гомологии плазмидной и хромосомной ДНК- Рис. 7.2 иллюстрирует рекомбинационные события в области гена leu ine 2. У многих трансформантов наблюдается множественная интеграция плазмид в виде тандемно повторяющихся копий (рис. 7.2). Часть интегративных рекомбинационных событий происходит как двойной кроссинговер. Эта схема может привести к замещению участка хромосомной ДНК на гомологичный участок плазмидной ДНК без интеграции векторной части рекомбинантной плазмиды. Интеграция может произойти Б любом месте генома при условии, что в этом месте находится последовательность, гомологичная участку плазмидной ДНК-Единственное исключение составляет геномный сайт плазмидного селективного маркера. [c.213]

Тандемные повторы — множественные и расположенные друг за другом копии определённой последовательности ДНК, число которых варьирует у разных индивидов (варьирующее число тандемных повторов — VNTR — сокр. по англ.). динуклеотидные — из 2 нуклеотидов (обычно СА) используются в качестве генетических маркёров тринуклеотидные — из 3 нуклеотидов увеличение их числа (экспансия) приводит к наследственным болезням нервной системы (динамические мутации). [c.357]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология