Выделение клонов ЦТЛ

Для размножения и дальнейшего изучения все выделенные клоны необходимо уже в следующем году высаживать в коллекционный питомник. [c.116]

Если предполагается выделение клонов, то культуральные сосуды должны содержать много небольших кусочков (0,05 см ) покровных стекол, обеспечивающих прикрепление и размножение клеток. Используя стерильный пинцет, удалить кусочки стекол с индивидуальными клетками (при микроскопическом контроле) и перенести их в индивидуальные лунки пластинок для культивирования тканей (разд. 3.2.1). [c.90]

Полужидкую или вязкую среду можно использовать для выделения клонов клеток, не нуждающихся в подложке. Когда колонии достигнут желаемого размера, их извлекают из агара или из метилцеллюлозы тонко оттянутой пипеткой и переносят в жидкие культуры. [c.395]

Выделение клонов трансформированных клеток [c.248]

Фиксация, окраска и подсчет клонов или, если необходимо, выделение клонов [c.149]

Анализ клонов ТК -трансформантов показал, что вводимый вирусный ген ковалентно связывается с хромосомной ДНК клетки. Независимо выделенные клоны трансформантов различались по местам интеграции чужеродной ДНК, следовательно, встройка экзогенной последовательности не происходит только по определенной хромосоме или ее району. Многие исследователи отмечали широкую вариабельность получаемых клонов трансформантов по числу копий интегрированного гена tk (от одной до нескольких десятков на геном клетки). При этом в каждой клетке (клоне) встройка трансформирующей ДНК происходит в виде множественных тандемных повторов чаще всего в единственное место на одной из хромосом. [c.341]

Выделение клонов вируса Ad5 Рис. 14.20. Рекомбинационное клонирование полноразмерного генома аденовируса в клетках Е. соН [c.379]

Выделение геномных клонов, охватывающих картированный сайт [c.470]

ПРОГУЛКА ПО ХРОМОСОМЕ hromosome walking). Термин означает последовательное выделение клонов, содержащих перекрывающиеся фрагменты ДНК. С помощью такого подхода можно картировать ДНК. [c.525]

Представляется возможность не только отбирать специфические космидные клоны из космидных библиотек, но и использовать специфические космиды для выделения клонов из сложных плазмидных библиотек. Этот подход можно использовать и для выделения клонов кДНК, содержащих последовательности, кодируемые вставочным фрагментом данного космидного клона. [c.84]

Линии клеток, продуцирующих моноклональные антитела, обычно получают от грызунов, например мышей и крыс, дающих хороший иммунный ответ на иммуноген. Готовят суспензию клеток селезенки этих животных и вызывают их слияние с мие-ломными клетками. Полученные в результате слияния клетки обладают свойствами и тех, и других родительских клеток, сочетая в себе способность к неограниченному размножению, свой-ствеипую миеломным родительским клеткам, со способностью продуцировать специфические антитела, присущей В-лимфоци-там селезенки. Выделение клона клеток, продуцирующих одно антитело, позволяет нарабатывать эти моноклональные антитела в больших количествах. [c.180]

После отсева колоний, выросших и а среде с аналогом, и выделения у них отдельных клонов из каждой первичной колонии проверяют по 1—2 клона на способность продуцировать нужное вещество. Если исходный штамм не продуцировал этот метаболит, то первичную оценку мутантов проводят с помощью ауксотрофной по данному метаболиту тест-культуры, отбирая для дальнейшей оценки те клоны, которые обеспечивают зоны роста, или кормление , ауксотрофных клеток. В тех случаях, когда исходная культура уже являлась продуцентом, необходима тотальная проверка всех выделенных клонов иа способность продуцировать метаболит в соответствующих условиях культивирования. Из их числа отбирают те, у которых при последующих проверках средний уровень продукции достоверно превышает средний уровень продукции исходного (родительского) штамма. При правильно выбранном аналоге для получения продуктивного мутанта обычно требуется проверить несколько сотен аналогорезистентных клонов. У отобранного продуктивного штамма часто определяют чувствительность к более высоким, чем ранее использованная, концентрациям аналога. Если такая чувствительность имеется, проводят еще один, а иногда и несколько этапов отбора на постепенно повышающихся концентрациях аналога. Нередко используют другие аналоги того же метаболита на следующих этапах отбора. [c.91]

Джеффризу с соавторами [14] удалось впервые показать, что зонды на основе кор-последовательности ГВР могут быть использованы для одновременного выявления большого количества соответствующих генетических локусов. С помощью зонда, синтезированного путем тандемного лигирования 33 повторяющихся элементов ГВР из гена человеческого миоглобина, они обнаружили на Саузерн- блотах, несущих гидролизат геномной ДНК человека, картину из большого числа полос. Некоторые из них оказались полиморфными шоследовательностями. Для выделения этих родственных участков исследователи отобрали из геномной библиотеки соответствующие клоны, используя в качестве зонда при гибридизации в мягких условиях конкатенированные повторы из гена миоглобина. Когда же эти выделенные клоны, в свою очередь, выступили в роли зондов, с помощью некоторых из них в геномной ДНК удалось выявить сложную картину гипервариабельных полос. Клоны содержали последовательности, имеющие области гомологии с тандемными повторами миоглобиновых ГВР, которые и представляли собой общие для этой группы кор-последовательности. Последовательности этого семейства были названы минисателлитами. Для изучения доступны два из них, являющиеся вариантами основной кор-последовательности. Соответствующие зонды, названные 33.6 и 33.15, существуют в виде рекомбинантных форм векторов, полученных на основе бактериофага М13 [17] (рис. 1). Каждая из них выявляет около 15 высокополиморфных полос в диапазоне 4—20 т.п.н. Среднее значение гетерозиготности по [c.192]

Выделение клонов аллореактивных Т-хелперов человека и использование их в качестве поликлональных активаторов В-клеток [c.269]

Выделение клонов аллореактивных Т-хелперов [c.279]

Именно новейшая иммунологическая методология — основное содержание этой книги. В ней определены наиболее существенные методические достижения последних лет разработка способов культивирования и выделения клонов иммунокомпетентных клеток методика слияния В-клеток, образующих антитела, с клетками плазмоцитомы н последующее клонирование гибридбм, синтезирующих моноклональные антитела (иммунодиагностические реагенты, прикладное значение которых трудно переоценить) методы аналитического и препаративного разделения такой тонкости и чувствительности, которая позволяет анализировать ианомолярные количества антигенов и из общей смеси иммуноглобулинов выделять антитела, синтезированные одиим-единствениым клеточным клоном (в этом отношеиии поразительно эффективно изоэлектрофокусирование в тонком слое). [c.5]

Попытки клонирования кДНК редко завершаются выделением клона, который бы заключал в себе полную последовательность мРНК, послужившей матрицей при синтезе этой макромолекулы с помощью обратной транскрипции. В ряде случаев идентифицировать новый клон и выяснить его полноразмерную последовательность можно с помощью методов современной биоинформатики, не прибегая к дальнейшим генно-инженерным манипуляциям [335]. В частности, можно провести компьютерный поиск гомологичной последовательности в базах данных EST-no-следовательностей, доступных через Интернет. [c.252]

Необходимый этап генно-инженерного эксперимента — введение полученных in vitro гибридных молекул ДНК в пермиссивные клетки (обеспечивающие репликацию этих молекул) с целью размножения, селекции и выделения клонов гибридов. [c.32]

Аморфный кремний можно также получить, используя только оксид кремния (IV) и стружки магния. Для этого несколько граммов смеси порошка магния и 5102 в соотношении 2 3 засыпьте в сухую пробирку, укрепленную на-клонно В лапке штатива в вытяжном шкафу. Равномерно прогрев всю массу вещества в пробирке, нагревание продолжайте только у дна пробирки до раскаливания смеси. В дальнейшем нагревание прекратите, поскольку реакция протекает самопроизвольно с выделением значительного ко- [c.207]

Процесс биосинтеза одного антибиотика может состоять из 10-30 ферментативных реакций, так что клонирование всех генов его биосинтеза -задача не из легких. Один из подходов к выделению полного набора таких генов основан на трансформации одного или нескольких мутантных штаммов, не способных синтезировать данный антибиотик, банком клонов, созданным из хромосомной ДНК штамма дикого типа. После введения банка клонов в мутантные клетки проводят отбор трансформантов, способных синтезировать антибиотик. Затем выделяют плазмидную ДНК клона, содержагцего функциональный экспрессирующийся ген антибиотика [т. е. ген, восстанавливающий (комгглементиру-ющий) утраченную мутантным штаммом функцию], и используют ее в качестве зонда для скрининга другого банка клонов хромосомной ДНК штамма дикого типа, из которого отбирают клоны, содержащие нуклеотидные последовательности, которые перекрываются с последовательностью зонда. Таким образом идентифицируют, а затем клонируют элементы ДНК, примыкающие к комплементирующей последовательности, и воссоздают полный кластер генов биосинтеза антибиотика. Описанная процедура относится к случаю, когда эти гены сгруппированы в одном сайте хромосомной ДНК. Если же гены биосинтеза разбросаны в виде небольших кластеров по разным сайтам, то нужно иметь по крайней мере по одному мутанту на кластер, чтобы получить клоны ДНК, с помощью которых можно идентифицировать остальные гены кластеров. [c.259]

Для вьщеления других генов, участвующих в фиксации азота, применяли два подхода. Во-первых, использовали банк клонов К. pneumoniae для комплементации независимо возникающих Nif -MyTaHTOB, увеличивая тем самым вероятность того, что в каждом случае будет выделен другой иг/-ген. Во-вторых, вьщеленные и//-гены использовали в качестве гибридизационных зондов для скрининга банка клонов хромосомной ДНК К. pneumoniae, несущих большие вставки (от 7 до 10 т. п. н.), исходя из того, что у прокариот гены одного пути биосинтеза обычно образуют кластеры. [c.310]

Смотреть страницы где упоминается термин Выделение клонов ЦТЛ: [c.477] [c.85] [c.233] [c.292] [c.16] [c.271] [c.275] [c.285] [c.303] [c.409] [c.233] [c.292] [c.149] [c.229] [c.369] [c.335] [c.42] [c.162] [c.518] [c.14] [c.209] [c.299] [c.313] [c.315] [c.393] [c.470]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология