Клон, анализ

В принципе возможен систематический анализ любой системы иммуноглобулин — лиганд. Исследование моделей связывания может проводиться систематическим образом, поскольку у млекопитающих, например кроликов или коз, синтез антител может индуцироваться по отношению к любой специально подобранной молекуле (с низкой или высокой молекулярной массой). Используя аффинную хроматографию, получаемые антитела затем очищаются. Как правило, эта процедура приводит к вырожденному иммунному ответу, т. е. к синтезу нескольких видов антител несколькими клонами так называемых клеток плазмы (542]. Эти антитела отличаются константами сродства к лиганду, что проявляется также в химических, спектральных и иммунологических свойствах центров связывания. Последующие анализы аминокислотной последовательности показали, что различия вызваны аминокислотными заменами в гипер-вариабельных областях доменов /ь и Ун [622]. На первый взгляд кажется, что вырожденный ответ должен усложнить пространственную организацию центров связывания. В действительности, однако, в этом случае возможно объединить и взаимно контролировать данные по нескольким центрам связывания, что заметно увеличивает вероятность нахождения правильных моделей. [c.245]

Одна из стратегий идентификации гена заболевания в отсутствие данных о продукте этого гена и каких-либо генов-кандидатов. В подобных случаях сначала определяют хромосомную локализацию (позицию) гена. Затем получают геномные клоны, охватывающие картированный сайт (используя соответствующие маркеры), идентифицируют и анализируют присутствующие в них экзоны. Используя целый ряд методов (идентификация G -островков, улавливание экзонов, секвенирование, компьютерный анализ и т.д.), определяют, какой именно ген ответствен за данное заболевание. [c.556]

Анализ клубней. Качественный метод определения, позволяющий дифференцировать селекционный материал на клоны с низким, средним и высоким содержанием соланина. Из клубней получают экстракты или соки, очищенные от белков, наносят каплями на фильтровальную бумагу и проявляют соланин с помощью видимой реакции. [c.147]

Широкое плоское крыло дрозофилы, представляющее собой эпителиальную структуру,-очень удобный объект для анализа отношений между клонами. Если маркированные клоны были получены путем рентгеновского облучения, образуемые ими пятна обычно располагаются случайным образом и имеют, как правило, довольно неправильные очертания. Сравнение расположения [c.83]

Генотипы определяются как отдельные линии, клоны или сорта самоопыляющихся культур, удовлетворяющие условию гомогенности или идентичности (по набору генов) отдельных особей, входящих в эти сорта. В анализе предусмотрены специальные тесты на гомогенность материала. [c.178]

Индивидуальные клетки, делящиеся в культуре, можно непрерывно наблюдать с помощью цейтраферной киносъемки. Такие наблюдения показывают, что даже у генетически идентичных клеток длительность цикла весьма изменчива (рис. 13-24). Количественный анализ показывает, что время от одного деления до следующего содержит случайно меняющуюся компоненту, причем изменяется она главным образом за счет фазы Gl. По-видимому, по мере того как клетки приближаются к точке рестрикции в GJ (рис. 13-25), они должны некоторое время выждать , прежде чем перейти к оставшейся части цикла, причем для всех клеток вероятность в единицу времени пройти точку R примерно одинакова. Таким образом, клетки ведут себя подобно атомам при радиоактивном распаде если в первые три часа через точку R прошла половина клеток, в следующие три часа через нее пройдет половина оставшихся клеток, еще через три часа - половина тех, что останутся, и т. д. Возможный механизм, объясняющий такое поведение, был предложен ранее, когда речь шла об образовании активатора S-фазы (разд. 13.1.5). Однако случайные изменения длительности клеточного цикла означают, что первоначально синхронная клеточная популяция через несколько циклов утратит свою синхронность. Это неудобно для исследователей, но может быть выгодно для многоклеточного организма в противном случае большие клоны клеток могли бы проходить митоз одновременно, а поскольку клетки во время митоза обычно округляются и утрачивают прочную связь друг с другом, это серьезно нарушало бы целостность ткани, состоящей из таких клеток. [c.417]

В этой работе остаток после выщелачивания восстановленного катализатора исследовали методом инфракрасной спектроскопии. Анализ показал, что остаток представляет собой нерастворимую окись рения (только одна полоса поглощения при 915 см- отвечает овязи Ке—О), которая должна иметь степень окисления ниже Ке +, так как КезО растворима в воде. Показано также, что количество поглощенного водорода прямо пропорционально содержанию Ке в катализаторах при этом на клон прямых соответсттву-ет отношению Н/Ке=3, следовательно, при 482 °С (температуре опыта) Ке + восстанавливается водородо1М до Ке +. Таким образом, в условиях каталитического риформинга Ке восстанавливается до ЙеОг, Этот вывод подтвержден исследованием образца катализатора с 0,64% Ке методом ЭПР. [c.152]

Берут 96-луночные микропланшеты для иммуноферментного анализа (ИФА) с плоским дном. Количество микропланшетов определяется числом исследуемых клонов гибридом. Раствор антигена в концентрации 1 мг/мл вносят в лунки микропланшетов в объеме 50 мкл [c.320]

Для отбора клеток, устойчивых к неблагоприятным или стрессовым факторам, наиболее часто применяют прямую селекцию. После выбора нужной популяции необходимо проверить стабильность устойчивости к неблагопрргятному фактору. Это длительный процесс, включающий многочисленные циклы выращивания и пересадки клеток на среды, содержащие селективный фактор или без него. Из стабильных клонов необходимо попытаться регенерировать растения. Получение растений-регенерантов, а также гибридологический анализ подтверждают генетическую природу при- [c.187]

Однако такое распределение не дает точного представления об очень важной фракции растворимого азота, которую наблюдали многие исследователи. В неопубликованном сообщении Фо-конно и Пион представили распределение азота в картофеле и свекле. Их результаты, приведенные в таблице 6Г.З, позволяют выяснить масштабы и значение загрязнений, создаваемых жидкими отходами крахмальных и сахарных заводов. Они показывают, что значительная часть азота клубней представлена небелковым азотом (преимущественно свободные аминокислоты) [5]. Однако эта фракция плохо изучена из-за нестабильности во времени, о чем свидетельствует анализ клубней. Фицпатрик и др. [18] сообщили, что в процессе прорастания клубня происходят изменения, которые охватывали весь набор белковых веществ. Тем не менее, учитывая питательную важность этой фракции, проводили сравнение [36] нескольких методов ее оценки. Сделан вывод о том, что эта фракция варьирует в зависимости от клонов, условий и мест выращивания это затрудняет сравнение результатов, полученных в неконкретизированных условиях. [c.275]

Следующий после создания библиотеки этап -это поиск клона (клонов), несущего искомую последовательность ДНК. Для этого используют три широко известных метода гибридизацию с меченым ДНК-зондом с последующим радиоав-тографическим анализом, иммунологический скрининг и скрининг по активности белка, кодируемого геном-мишенью. [c.64]

Векторные системы, способные интегрировать крупные вставки (>100 т. п. н.), имеют большую ценность при анализе сложных эукариотических геномов. Без таких векторов не обойтись, например, при картировании генома человека или при идентификации отдельных генов. В отличие от библиотек с небольшими вставками, в геномной библиотеке с крупными вставками скорее всего будет представлен весь генетический материал организма. Кроме того, в этом случае уменьшается число клонов, которые нужно поддерживать, и увеличивается вероятность того, что каждый из генов будет присутствовать в своем клоне. Для клонирования фрагментов ДНК размером от 100 до 300 т. п. н. был сконструирован низкокопийный плазмидный вектор на основе бактериофага Р1 — химерная конструкция, называемая искусственной хромосомой на основе фага Р1. Был создан также очень стабильный вектор, способный интегрировать вставки длиной от 150 до 300 т. п. н., на основе Р-плазмиды (F-фактора, или фактора фертильности) Е. соИ, которая представлена в клетке одной или двумя копиями, с селекционной системой la Z векторов pU . Эта конструк- [c.76]

Позиционно-кандидатное картирование состоит в определении хромосомной локализации гена болезни, продукт которого неизвестен, и последующем анализе современных генетических и транскрипционных карт, с тем чтобы выявить кодирующие последовательности (гены, внутригенные EST), находящиеся в этом же районе (рис. 20.30). Весьма вероятно, что одна из этих последовательностей и окажется геном данного заболевания. Если какой-либо из генов-канди-датов охарактеризован, можно провести его мутационный анализ. Как альтернативу можно использовать кандидатные EST в качестве зондов, отобрать с их помощью геномный клон и секвенировать его, а затем также провести му- [c.476]

После выявления рекомбинантных клонов, содержащих гены целлюлаз, проводят накопление рекомбинантной ДНК и составляют ее рестрикционную карту, идентифицируя положения различных сайтов рестрикции и путем делеционного анализа (получая дочерние плазмиды с вставками меньшг[ размера) уточняя положение и размер нужного гена [c.104]

В основе фотоядерного метода анализа (ФМА) состава вещества лежит свойство атомных ядер при взаимодействии с гамма-квантами достаточно высоких энергий вступать в фотоядерные реакции, которые приводят к образованию новых ядер, отличающихся от исходных либо возбужденным состоянием, либо ну-клонным составом. Необходимым условием протекания фотоядерной реакции является превышение величины энергии гамма-кванта порогового значения для данного типа реакции. Известно большое количество типов фо-тоядерных реакций, различающихся по виду испускаемых в ходе реакции частиц. К наиболее распространенным относятся реакции (7,и), (7,у ), (У-2и), (у,пр), (у,а). Количественно фотоядерные реакции, как и реакции на нейтронах, характеризуются сечением, величина которого определяется вероятностью протекания реакции на ядрах данного типа при взаимодействии с гамма-квантами определенной энергии. В области энергии 10-20 МэВ сечение составляет 10 -10 см [36]. Для большинства атомных ядер наибольшее сечение имеет реакция (у,и), величина его растет с увеличением атомного номера нуклида. Вероятность протекания этой реакции возрастает также и с увеличением энергии кванта, достм ает максимума и затем спадает. Этот максимум в сечении фотоядерных реакций принято называть гигантским резонансом. [c.59]

Существует много вариантов иммунохимического анализа. Одни из наиболее распространенных заключается а следующем. На диске из поливинилхлорида сорбируются немеченые антитела к исследуемому белку. Колонии прямо иа чашке Петри лизируются в мягких условиях, и поливинилхлоридный диск вводится в контакт с поверхностью чашки. Продукты с антигенными детерминантами исходного белка образуют комплексы антиген — антитело с антителами, сорбированными на диске только в местах положения экспрессирующих клонов. Затем диск отмывается от иеспецифи-чески сорбированного антигена и обрабатывается раствором с меченными (радиоактивно, флуоресцентно илн иммуноферментно) антителами. Эти антитела образуют комплекс с антигеном за счет его других антигенных детерминант, в результате чего участки диска, содержашие первый комплекс антиген — антитело, оказываются мечеными (рис. 256). По положению меченых участков на диске легко идентифицировать экспрессирующие колонии. [c.439]

Как мы уже ввдели раньше, при анализе процесса развития полезно иметь возможность создавать в организме клоны мутантных клеток. При работе с дрозофилой для этого используют явление митотической рекомбинация. [c.82]

Анализ клонов позволяет устанавливать не только существование ком-партмента, но и время его детерминации. Если мутантный клон возник в результате рентгеновского облучения уже детерминированных клеток, его пролиферация ограничивается пределами того или другого компартмента. Если же клон образовался до детерминации, мутантные клетки могут оказаться в обоих компартментах-граница между ними не соблюдается. Таким образом было показано, что раньше всего возникает граница между передней и задней частями крыла, тогда как подразделение на дорзальную и вентральную части и на проксима1п.ную и диста1п.ную области (крыло/нотум) происходит позднее. Создается впечатление, что состояние детерминации клеток в любой из частей тела мухи определяется последовательным рядом выборов между альтернативными путями развития, соответствующими различным дискам и различным компартментам внутри дисков. Гомеозисные мутации затрагивают контролирующие гены, которые регистрируют тот или иной выбор, а затем реализуют соответствующий путь. [c.87]

Многочисленные опыты при сжигании газа показали, что оптимальный коэффициент избытка воздуха соответствует такому минимальному его значению, при котором отсутствует химический недожог. В то же время нри постоянном составе газа и отсутствии химического недожога должно быть соответствие между КОгтах рассчитанным по составу газа, и содержанием КОг и О2 в продуктах горения по данным газового анализа. Следовательно, нри полном сгорании газа все точки со значениями КОг и О2, соответствующие постоянной величине НОгшах должны укладываться на одну на клонную линию. Основываясь на указанной закономерности, определяют пт- [c.183]

Обсуждение этих более сложных стадий проводили на основе работ некоторых авторов [35, 36]. Стадии (в) и (г) в уравнении (35) по очереди принимали в качестве лимитирующих. Когда лимитирующей является стадия десорбции (д), анализ проводят для таких условий, которые применимы при изучении кинетики реакции кислородного электрода и анодного выделения азота из аммиака, изученные Осуином и Саломоном [19г]. Конуэй и Гилеади [35] считают, что некоторые важные обобщения можно сделать из выводов, следующих из рассмотрения зависящей от степени покрытия кажущейся стандартной свободной энергии активации адсорбции в схемах сложных реакций для промежуточных значений степени заполнения поверхности. При адсорбции, описываемой изотермой Ленгмюра, тафелевские наклоны уменьшаются, когда за основной стадией разряда иона протекает ряд последовательных реакций Последовательные стадии, включающие перенос заряда, были рассмотрены выше Гилеади и Конуэй [34] связывают тафелевский на клон ЯТ1тР (/и >2) с бимолекулярными стадиями химической рекомбинации для стадии распада частицы, которая имеет первый порядок, наклон равен ЯТ/Р [38]. [c.290]

НИЯ фторидов из листьев в стебли и корни было показано с помощью химического анализа (Benedi t et ai., 1964). Незначительное по масштабу передвижение нашли только в нарастающую хвою Р. abies клона GA22, подвергшейся фумигации в течение предшествующего года (табл. 14). [c.91]

При изучении двух опухолевых и двух нормальных штаммов табака более высокая способность к морфогенезу оказалась у опухолевых штаммов [ 45 ]. Регенеранты, полученные из опухолевых штаммов, были сильно измененными. Они оказались анеуплоидами с более низким числом хромосом, чем каллусная ткань, из которой были получены регенеранты. Многие регенеранты оказались химерными. Кариологнческий анализ регенерантов табака показал небольшую вариабельность хромосомных чисел у растений, возникших из одного клона, и значительную вариабельность у регенерантов из разных клонов [ 46 ]. За исключением 10 тетраплоидов, все регенеранты оказались анеуплоидными. [c.120]

При чащечном методе посева природных образцов можно достичь двух результатов получить отдельные колонии чистых культур микроорганизмов (клонов одной клетки) и начать фенотипическое определение различных организмов (описание колоний). В некоторых случаях клетки из отдельно взятой колонии могут быть введены в пластинки для анализа (АРЬтест, Biolog), по результатам которого возможно определение микроорганизма до рода. [c.254]

На следующий год клоны, которые выдерживали без цветения, снова высаживают на хорошо изолированном участке и продолжают работу с семьями, полученными от анализирующих скрещиваний. Здесь необходимо только проследить, чтобы высадка семей была проведена в максимально ранний срок. Это делается для того, чтобы по данным анализа пыльцы растений высаженных семей сделать браковку до начала цветения на изолированном участке, где высажены клоны. В результате браковки для свободного переопыления оставляют только клоны тех растений-опылителей, которые при анализирующих скрещи- [c.35]

О возможностях метода уже было сказано выше, а ограничениями, налагаемыми на него, являются следующие гомозиготность (или гомогенность в случае клонов) материала диплоидное расщепление (имеется в виду дисомное расщепление в отличие от полисомного у автополиплоидов) независимое действие неаллельных генов отсутствие множественного аллелизма независимое расщепление неаллельных генов. Могут быть и другие ограничения, которые приводятся в соответствующих статистических моделях. В аппарате диаллельного анализа предусмотрены специальные тесты, позволяющие установить, соответствует ли конкретный экспериментальный материал названным ограничениям. [c.179]

В конечном итоге сравнение нуклеотидных последовательностей гена и клона кДНК точно выявляет местоположение и размер промежуточных последовательностей. Такой анализ на уровне последовательностей необходим, прежде чем мы сможем быть уверенными в том, что выявлены все участки гена. Действительно, в ряде случаев было неожиданно обнаружено, что геномная нуклеотидная последовательность содержит дополнительный короткий кодирующий участок. Когда кодирующий участок имеет длину менее 50 п. н., он может не гибридизоваться с кДНК-зондом и поэтому, попадая внутрь находящейся справа или слева от гена промежуточной последовательности, остаться незамеченным. [c.252]

Анализ начинается с клона, несущего фрагмент с интересующей областью или участком вблизи нее. Затем идентифицируются другие клоны, несущие последовательности, перекрывающиеся с последовательностью первого клона. Такие клоны будут содержать более протяженные последовате.пьности с одной или дру- [c.477]

Появившиеся в последнее время методы позволяют составлять подробные карты очень больших геномов. Есть две категории карт 1. Физические карты, основывающиеся на строении молекул ДНК, составляющих каждую хромосому. Сюда относятся рестрикционные карты и систематизированные библиотеки клонов геномной ДНК. 2. Карты генетического сцепления их строят, основываясь на частоте совместной передачи потомству двух или нескольких признаков - генетических маркеров, различных у отца и матери и приписываемых определенному участку хромосомы. В качестве маркеров издавна принято использовать те гены, экспрессия которых обнаруживается по их эффекту (таковы, в частности, гены, вызывающие генетические болезни, например мышечную дистрофию). Разработанные сравнительно недавно новые методы с применением рекомбинантной ДНК дали возможность использовать в качестве генетических маркеров короткие последовательности ДНК, содержащие один из сайтов рестрикции и различающиеся у отдельных индивидуумов, такие последовательности особенно удобны для генетического картирования, потому что под действием рестрикционной нуклеазы возникают фрагменты, различающиеся по своей длине, и этот полиморфизм длины рестрикционных фрагментов (ПДРФ) легко может быть выявлен блот-анализом по Саузерну с помощью подходящего ДНК-зонда (рис. 5-90). [c.342]

Со5-картирование разработали Раквиц и др. [21] для картирования клонов фага к. Эта процедура используется также и в случае космидных клонов [6]. Основная проблема, возникающая при анализе космидных клонов путем рестрикционного картирования, связана с их размером у них слишком много сайтов для наиболее широко используемых ферментов, чтобы осуществить быстрое картирование. Со5-картирование обходит эту трудность, используя частичный рестриктазный гидролиз для идентификации сайтов и определения порядка их распределения. Схематично этот процесс показан на рис. 2.2. Левый или правый липкие концы метят, подвергая их отжигу с меченным P 12-членным фрагментом ДНК, комплементарным левому или правому липкому концу фага К. Затем ДНК подвергают частичному рестриктазному гидролизу, а радиоактивные фрагменты путем определения стартового участка обнаруживают радиоавтографией после фракционирования их по размеру в-агарозном геле. При этом выявляются все фрагменты с меченым концом. [c.63]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология