Растворы буферные гипотонические

Сначала клетки обрабатывают колцемидом, чтобы заблокировать образование веретена зто приводит к накоплению метафазных клеток в культуре. Такие клетки имеют более округлую форму и слабее прикреплены к пластику, чем другие клетки популяции, поэтому при встряхивании флакона они легко отделяются от субстрата. Метафазные клетки затем обрабатывают гипотоническим раствором (что приводит к их набуханию), после чего фиксируют в смеси метанол — уксусная кислота. Когда суспензию таких клеток по каплям наносят на предметное стекло, клетки лопаются и хромосомы расправляются на стекле по мере высыхания раствора. Реактивы для этой процедуры приведены в табл. 8.12, а сам метод описан в табл. 8.13. На следующем этапе хромосомы обрабатывают РНКазой, чтобы исключить гибридизацию зонда с хромосомной РНК, и затем уксусным ангидридом, который ацетилирует хромосомные белки и тем самым еще более уменьшает неспецифическое связывание зонда. Хромосомную ДНК денатурируют нагреванием и гибридизуют с зондом, предварительно меченным I- TP. Избыток меченого зонда удаляют серией промывок в низкосолевом буферном растворе и покрывают препарат фотоэмульсией. После необходимой экспозиции выявляют участки образования зерен серебра, соответствующие сайтам амплификации гена. Необходимые реагенты приведены в табл. 8.14, а сама процедура описана в табл. 8.15. [c.266]

Определение активности сукцинатдегидрогеназы проводили в суспензиях митохондрий печени крысы. Суспензии митохондрий подвергали замораживанию и оттаиванию с последующим отмыванием части балластных белков гипотоническим буферным раствором (0,01 М К—Ыа-фосфатный буферный раствор, pH 7,4). В таких суспензиях активность сукцинатдегидрогеназы составляла 82,1 3,5 нмоля окисленного сукцината за 1 мин на 1 мг белка (В. 3. Горкин, Р. С. Кривченкова, 1971). [c.46]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология