Митохондрии печени крысы

Существует несколько способов отделения цитохрома с от митохондрий. Принцип всех этих методов состоит в разрушении внешней мембраны митохондрий с помощью детергентов или гипотонической обработки и экстракции белка солевыми растворами. В настоящей задаче предлагается экстрагировать цитохром с из митохондрий, убедиться в снижении оксидазной активности экстрагированных препаратов и активировать дыхание добавлением цитохрома с. В качестве объекта исследования используются митохондрии печени крысы (получение см. выше). Схематически процесс отделения цитохрома с изображен на рис. 50. [c.419]

ВЫДЕЛЕНИЕ МИТОХОНДРИЙ ПЕЧЕНИ КРЫСЫ [c.406]

Реактивы для выделения митохондрии печени крысы. [c.419]

Реактивы для выделения митохондрий печени крысы (с. 406). [c.444]

Изолированные митохондрии печени крысы суспендируют в 3 мл [c.420]

В настоящей задаче предлагается с использованием описанного подхода изучить функционирование НАДН убихинон-оксидоредуктазы в интактных митохондриях печени крысы и продемонстрировать генерацию трансмембранного потенциала при восстановлении убихинона комплексом I. [c.439]

В настоящей задаче предлагается экспериментально изучить процесс переноса К+ через внутреннюю мембрану изолированных митохондрий печени крысы. [c.443]

Получают митохондрии печени крысы согласно описанию на с. 406. В кювету с постоянным перемещиванием, содержащую 3 мл среды инкубации, помещают К+ Чувствительный электрод и, установив перо самописца на середину шкалы, калибруют чувствительность прибора внесением 4—6 добавок раствора КС1 с точно известной концентрацией (по 20—30 мкМ). В другой пробе в среду инкубации вносят суспензию митохондрий (3—5 мг белка на 1 мл пробы), 5 мкМ ротенон и регистрируют в течение 1—2 мин концентрацию К+ во внешней среде. В пробу добавляют валиномицин (около 0,1 нмоль на 1 мг белка), измеряют концентрацию ионов К+ во внешней среде и рассчитывают скорость его диффузии в стационарном состоянии. Внесением 2,4-динитрофенола (100 мкМ) индуцируют выход ионов К+ во внешнюю среду. Содержание эндогенного К+ в митохондриях определяют добавлением к суспензии митохондрий в среде инкубации раствора детергента (тритон-Х-100) до конечной концентрации 0,1%- Изменения концентрации К+ в среде рассчитывают по калибровочной кривой. [c.444]

В задачу настоящей работы входит изучение осмотических свойств митохондрий печени крысы в растворах различных электролитов. [c.446]

В настоящей работе предлагается познакомиться с основными закономерностями активного транспорта Са + и связью этого процесса с метаболической функцией митохондрий печени крысы. [c.449]

Виноградов А. Д., Лейкин Ю. Н. Идентификация ионной формы фосфата, сопровождающей активное накопление Са +митохондриями печени крысы//Биохимия. [c.459]

В настоящей задаче предлагается изучить пути превращения экзогенного сукцината при его окислении в митохондриях печени крысы в [c.460]

В настоящей работе предлагается изучить зависимость скорости окислительного фосфорилирования и степени сопряженности митохондрий печени крысы от концентрации белка и проанализировать причины ее отклонения от линейности. [c.465]

И Цыбакова высказали предположение, что этот новый тип фосфорилирования сопряжен с переходом водорода от НАД-Нг к кислороду через реакции дыхательной цепи. Последующие работы подтвердили это предположение и показали, что при переходе каждой пары водородных атомов или электронов через реакции дыхательной цепи может происходить максимум три фосфорилирования. Прямое доказательство того, что фосфорилирование происходит не только на уровне субстратов, но и на уровне переносчиков водорода, было получено в 1951 г., когда Ленинджер показал, что при окислении НАД-Нг кислородом в митохондриях печени крысы отношение Р/0 близко к трем. Фосфорилирование в дыхательной цепи у растений впервые показали Миллер, Боннер, Аксельрод и Бандурский [22], которые использовали митохондрии, выделенные из проростков маша, и кислоты цикла Кребса в качестве субстратов. Эти авторы получили более низкое отношение Р/0 по сравнению с найденным для митохондрий животного происхождения. Поэтому возникло предположение, что митохондрии растений не эффективны как фосфорилирующие системы. Более поздние исследования показали, что митохондрии растений окисляют промежуточные продукты цикла Кребса, причем отношение Р/0 сравнимо с отношением, полученным для митохондрий животных. [c.243]

В настоящей работе предлагается количественно изучить зависимость скорости окислительного фосфорилирования в митохондриях печени крысы от содержания Са + (или других двухвалентных катионов) в матриксе. [c.476]

Показано, что митохондрии печени крысы окисляют до С Ю-линолевую и линоленовую кислоты, меченные по карбоксильной группе. Для окисления необходим НАД-Нг. Экстракты ацетонового порошка митохондрий печени крыс также окисляли линолевую и линоленовую кислоты. В этом случае, кроме НАД-Нг, требовались АТФ и КоА. Потребность в АТФ и КоА находится в соответствии с наличием р-окисления, но не доказывает участия этого процесса в окислении линолевой и линоленовой кислот. Потребность в НАД-Нг непонятна. [c.318]

Юджин Кеннеди и Альберт Ленинджер показали позднее, что все реакции цикла лимонной кислоты протекают в митохондриях животных клеток. В изолированных митохондриях печени крысы (разд. 2.8) были обнаружены не только все ферменты и коферменты цикла лимонной кислоты здесь же, как выяснилось, локализованы все ферменты и бел- [c.485]

Г. Электронная микрофотография, на которой видны две молекулы F Fi-АТРазы, выделенной из митохондрий печени крысы. [c.527]

В митохондриях печени крыс ПЛФ яд кобры ингибирует дыхание и разобщает дыхание и фосфорилирование независимо от используемого субстрата (Д. Н. Сахибов с соавт., 1974). Следует отметить, что нарушение функ ций митохондрий сопровождается их структурными из менениями—набуханием ( ondrea, 1974). [c.75]

Целью работы является изучение рН-зависимости активности и кинетических свойств аспартатаминотрансферазы, локализованной в цитоплазме и митохондриях печени крысы. Кроме того, в работе исследуется внутримитохондриальная локализация фермента. [c.351]

В настоящей работе предлагается изучить специфичность Са +-транснортирующей системы митохондрий печени крысы и роль Са + в регуляции проницаемости внутренней мембраны для двухвалентных катионов. [c.454]

В задачу настоящей работы входит изучение роли фосфатного переносчика в функционировании АТФ-гидролазной реакции, катализируемой митохондриями печени крысы. Гидролиз АТФ измеряют в настоящей задаче на рН-метре с регистрирующим самописцем по закис-лению среды в ходе реакции. [c.459]

В работе предлагается сравнить действие разобщителей на процессы окислительного фосфорилирования и активного транспорта Са + в митохондриях печени крысы. Так как протекание обеих эндергонических реакций сопряжено с поглощением (синтез АТФ) или освобождением (транспорт Са +) стехпометрических количеств ионов Н+, следует воспользоваться установкой для непрерывной регистрации pH стеклянным Н+-чувствительньш электродом (с. 474). Изменения трансмембранного потенциала прослеживают по распределению К+ (в присутствии валиномицина в бескалиевой среде — с. 442) с помощью К+-чувствительного электрода или по абсорбции проникающих синтетических катионов (например, сафранин, оксанол и др.) с помощью двухволновой спектрофотометрии. [c.469]

Для проведения следующей части работы на полярографе подбирают максимальную концентрацию Са +, добавление которого к митохондриям в среде с сукцинатом вызывает обратимую активацию дыхания. Для прочносопряженных митохондрий печени крысы (4—5 мг белка в пробе) это составляет около 200—400 мкМ Са +. Дальнейшие измерения проводят на регистрирующем рН-метре. В ячейку рН-метра со средой инкубации и погруженными электродами добавляют последовательно митохондрии, сукцинат и выбранную концентрацию Са +. Регистрируют быстрое освобождение ионов Н+ (закисление среды) из матрикса в ответ на добавление Са +. После аккумуляции всего добавленного Са + изменения pH среды прекратятся и на фоне нового стационарного значения pH в суспензии добавляют 1—2 раза одинаковое количество титрованной НС1 или КОН для калибровки шкалы (конечная концентрация НС1 или КОН в используемых условиях должна составлять около IO М). Проводят серию аналогичных проб, содержащих увеличивающиеся концентрации ДНФ, и каждый раз регистрируют скорость закисления среды в процессе активного транспорта Са2+. Для полного торможения транспорта Са + в митохондриях диапазон концентрации ДНФ должен быть значительно (в 2—3 раза) расширен по сравнению с опытами по измерению сукцинатоксидазной активности. Делают 5—6 измерений и строят графическую зависимость скорости транспорта Са + от концентрации разобщителя (5—6 экспериментальных точек). [c.470]

Успехи в биохимии и биофизике последних лет также тесно связаны с развитием краун-соединений. Примером может служить валиномицин - антибиотик, который в 1955 г. был выделен из гadioЬa illi. Как установил в 1963 г. Шемякин с сотр. [ 47], структура валиномицина представляет собой циклический додекадепсипептид (52). Механизм действия этого антибиотика был исследован после того, как Прессман и Моор [ 48] отметили изменение активности митохондрии печени крысы под действием ионов щелочных металлов. Исследование показало, что валиномиЦин избирательно образовывал комплекс с катионом калия, который активно переносился в направлении, противоположном концентрационному градиенту. Добавление валиномицина к митохондриальной фракции приводило к расходованию энергии. Эго явилось важным открытием в понимании роли N3 -К -АТРазы в биологической мем- [c.26]

При хроматографировании на гидроксиапатите и гель-фильтрации были выделены три формы аминоацилтрансферазы I из печени крыс [60]. Три формы фермента из митохондрий (печени крыс) отличались по молекулярному весу, причем наблюдался переход высокомолекулярных форм в низкомолекулярную. Все операции проводили при 4°С. Гомогенат печени центрифугировали при 10 ООО отделяли осадок, выпавший при pH 5, и надосадочную жидкость очищали гель-фильтрацией на сефадексе 0-25 (0,05 М раствор трис—НС1, pH 8). Элюат (500 мл), содер- [c.18]

Первые эксперименты были поставлены нами с сопряженными и разобщенными митохондриями. Оснорные результаты сопряженные митохондрии способны осуществлять количественный синтез АТР в ответ на быстрое повышение pH. В расчете на одну ЦЭТ один pH скачок приводит к образованию от двух до пяти (в зависимости от препарата) молекул АТР. Обязательным усло вием является пересечение во время скачка значения pH 8,2. Те же результаты были получены с разобщенными митохондриями, не способными к окислительному фосфорилированию. На рис. 4.25 а приведена экспериментальная зависимость выхода АТР при быстром повышении pH в суспензии разобщенных митохондрий печени крысы от конечного значения pH при фиксированном начальном (кривая 1) и от началыного значения pH при фиксированном конечном (кривая 2), Эти зависимости соответ- [c.102]

Рис. 4.25. Зависимость выхода /АТР от конечного значения pH при фиксированном начальном (1) и от начального значения pH при фиксированном конечном. а) Разобщенные митохондрии печени крысы б) фрагменты стенок мембраны из Staphylo o us aureus

Рис. 17-16. Структура Р р1-АТРазы (АТР-синтетазы). А. Впервые F Fi-ATPa3a была обнаружена в виде грибовидных выростов на внут-решей поверхности митохондриальной мембраны (их можно видеть здесь на электронной микрофотографии). Б. Модель F Fi-ATPa-зы, показывающая возможное расположение ее субъединиц. Б. Кристаллы Fi-компонента комплекса из митохондрий печени крысы.

В одной из недавних работ Вайнбах и Гарбус [74], изучая окислительное фосфорилирование в митохондриях печени крЫсы и влияние на этот процесс ряда синтетических фенольных соединений, обнаружили, что происходит накопление фенольных соединений в митохондриях, связывание их с белками, возможно сопровождающееся изменениями в конфигурации ферментов митохонд- [c.124]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология