Культуры других клеток

Заражение культуры другими клетками [c.25]

Как уже говорилось, для наращивания клеточной массы удобнее использовать не монослойные, а суспензионные культуры. Некоторые клетки, особенно кроветворные, лучше растут в суспензионной культуре. Другие клетки могут быть адаптированы или отобраны на рост в суспензии. И наконец, небольшая часть клеток, например линии диплоидных клеток человека ( 1-38, МКС-5), вообще не выживает в суспензии. Помимо всего прочего некоторые клеточные продукты могут экспрессироваться, только когда клетки существуют в монослое либо после образования межклеточных контактов (например, для распространения внутриклеточных вирусов по клеточной популяции), что также ограничивает возможность использования суспензионной культуры. [c.94]

Асептические процедуры (методы, техника работы) — процедуры, обеспечивающие предотвращение попадания микробов в клетки, ткани и органы растительных культур, или перекрестное загрязнение одной клеточной культуры другой. Эти процедуры могут/не могут исключить занесение инфицирующих молекул. [c.492]

Гены, кодирующие несколько вирусных белков слияния, были клонированы и затем использованы Оля трансфекции эукариотических клеток в культуре. Трансфицированные клетки экспрессировали вирусные белки на поверхности мембраны. При кратковременной инкубации при низких pH эти клетки сливались между собой, образуя гигантскую многоядерную клетку. Для наиболее изученного белка слияния из вируса гриппа была определена трехмерная структура методом рентгеноструктурного анализа (см. разд. 8.6.12). Было показано, что при низком pH в белке слияния индуцируются крупные конформационные изменения, приводящие к экспонированию предварительно спрятанной гидрофобной области на поверхность белка. При этом становятся возможными его взаимодействия с липидным бислоем мембраны-мишени. По-видимому, кластер таких гидрофобных областей расположенных в близком соседстве друг с другом в молекуле белка слияния, приводит два липидных бислоя в тесное соприкосновение и дестабилизирует их так что бислои сливаются (рис. 6-87). [c.424]

Готовят влажные препараты из молодых бульонных культур (т. е. находящихся в экспоненциальной фазе роста), выращенных при двух различных температурах (например, 37 и 20°С). В некоторых случаях на средах, содержащих глюкозу, подавляется образование жгутиков [15]. Методы исследования с помощью светового микроскопа описаны в разд. 3.3.4. Влажные препараты изучают сразу после приготовления. При исследовании анаэробов лучше всего рассматривать среднюю часть препарата, а при исследовании аэробов — области около воздушных пузырьков и у края препарата. Не все клетки должны быть подвижными. Для того чтобы штамм бактерий был признан подвижным, необходимо обнаружить хотя бы одну клетку, меняющую свое положение по отношению по меньшей мере к двум другим клеткам [12]. Примечание подвижность следует отличать от броуновского движения (беспорядочного покачивания клеток) и от пассивного движения за счет потоков, образующихся под покровным стеклом. [c.32]

Напротив, если нейроны содержатся в одной культуре с другими типами клеток, например с клетками миокарда (миоцита-ми), у нейронов развиваются холинэргические свойства. Они синтезируют примерно в 1000 раз больше ацетилхолина, чем изолированные нейроны в культуре холинэргические синапсы образуются на других нейронах или на мышечных клетках при этом количество норадреналина и число зернистых пузырьков значительно снижено. Так же действует просто среда, в которой содержались миоциты или другие клетки, не являющиеся нейронами. Такую среду поэтому называют кондиционированной. Полагают, что она содержит вещество или вещества, которые опосредуют этот эффект. Меняя интенсивность воздействия другими клетками или кондиционированной средой, можно влиять на равновесие между адренэргическими и холинэргическими свойствами одной и той же клетки (рис. 10.8). [c.248]

Другой фундаментальной особенностью раковых клеток является то, что они, как популяция, способны делиться неограниченно долго. Напротив, почти все нормальные клетки млекопитающих, видимо, погибают после ограниченного числа делений. Например, нормальные фибробласты млекопитающих, растущие в культуре, делятся в среднем 20-50 раз в зависимости от вида животного. По мере того как такая культура стареет, клеткам требуется все больше времени для прохождения цикла, и в конце концов вся популяция [c.149]

Клетки тканей, даже высокодифференцированные, при выращивании в культуре имеют тенденцию быстро утрачивать дифференциацию и превращаться в клетки одного из трех основных типов — эпителиоциты, механоциты или амебоциты. Эпителиоциты представляют собой тесно прилегающие друг к другу клетки, происходящие из эпителиальных тканей полагают, что они являются производными двух поверхностных слоев эмбриональной бластулы. Механоциты, часто называемые также [c.53]

Первым из нейротропных факторов был идентифицирован фактор роста нервов (ФРП), и в настоящее время он лучше всего изучен. Этот фактор был открыт случайно в ходе экспериментов с трансплантацией тканей и опухолей куриным эмбрионам. Трансплантаты одного вида опухолей необычайно обильно иннервировались и вызывали значительное разрастание определенных групп периферических нейронов в близлежащих областях. Такому влиянию подвергались нейроны только двух категорий сенсорные и симпатические (подкласс периферических вегетативных нейронов, регулирующих сокращение гладкой мускулатуры и функцию экзокринных желез). Экстракты из опухоли стимулировали также рост нейритов в культуре этих нейронов. Дальнейшие исследования показали, что в культуре другой ткани-слюнной железы сампа мыши -такой же стимулирующий фактор образуется в огромных количествах. Эта игра природы пока еще не разгадана, так как образование ФРП клетками слюнной железы не имеет видимой связи с главной функцией этого фактора, но так или иначе открылась возможность получать чистый ФРП в количествах, достаточных для выяснения его химической природы и изучения его функций. Оказалось, что активность связана с белком-димером, содержащим две идентичные полипептидные цепи из 118 аминокислотных остатков каждая. После того как ФРП был вьщелен в чистом виле. появилась возможность получать антитела, блокируюшие его действие. Если антитела к ФРП ввести мыши, у которой развитие нервной системы еще не закончено, то большая часть симпатических нейронов и некоторые сенсорные нейроны погибнут. [c.358]

Более того, клетки нервного гребня сохраняют способность реагировать на локальное окружение даже на очень поздних стадиях развития. В условиях изоляции в культуре отдельные клетки симпатических ганглиев новорожденного мышонка созревают в нейроны, синтезирующие норадреналин. Если же они растут по соседству с некоторыми типами клеток из других тканей (например, мьппечными), они дифференцируются в нейроны, синтезирующие ацетилхолин. При изменении условий культуры отдельные нейроны могут переключаться с одного фенотипа на другой, и в этом переходе есть фаза, когда клетка синтезирует одновременно оба нейромедиатора. Влияние других клеток на выбор нейронами нейромедиатора может осуществляться и без прямого межклеточного контакта. Синтез ацетилхолина в изолированных клетках ганглиев можно вызвать и просто с помощью феды, в которой росли клетки других тканей. Это позволяет предполагать, что такое переключение происходит под влиянием какого-то растворимого вещества, вьщеляемого в феду тканью-нндуктором. [c.125]

Эукариотические гены одних видов были также клонированы и экспрессировались в клетках других видов. Например, ген, кодирующий tx-цепь гемоглобина кролика, был введен в растущие в культуре мышиные клетки и экспрессировался в них. Внедрение чужеродного гена в эукариотические клетки не всегда, однако, сопровождается его транскрипцией и трансляцией с образованием активного белка. Регуляция экспрессии генов у эукариот пока еще мало изучена (разд. 29.22) во время написания этой книги проводится большое число исследований по выяснению условий экспрессии реком-бинантньк генов в эукариотических клетках. [c.988]

Представление о том, что и у микроорганизмов возможны скачкообразные изменения наследственных признаков-мутации,-утверждалось лишь с трудом. До разработки метода чистой культуры многие ученые (Нэгели, Цопф) думали, что у бактерий морфология и физиологические свойства чрезвьиайно изменчивы. Считалось, что большое число бактерий, встречающихся в природе, представляют собой разные стадии жизненного цикла небольшого количества видов (плеоморфизм). Возражая против этого на основании результатов, полученных с помощью усовершенствованных методов и чистых культур, другие ученые выступили в пользу теории мономорфизма, согласно которой бактерии можно различать и классифицировать, исходя из постоянства их морфологических и физиологических признаков. Необходимо было научиться различать и у бактерий генотип и фенотип. Генотипом называют совокупность наследственных задатков клетки ему противопоставляют фенотип-совокупность наблюдаемых признаков. Фенотипическое проявление одного и того же генотипа может быть различным в зависимости от условий среды. [c.439]

После действия семисуточных образцов фосфат-цемен-та увеличивалось число фибробластов, которые располагались преимущественно изолированно, не соединяясь друг с другом. Клетки были неправильной формы, с овальным ядром, в котором четко определялись ядрышки и мелкая зернистость. В остальном клеточная культура имела очень сходную картину с культурой после действия двухсуточных образцов фосфат-цемента. [c.123]

Трансформация — процесс наследственных изменений, вызываемых включением ДНК из клеток бактерий одного типа в клетки бактерий другого типа Интересной разновидностью трансформации представляется передача устойчивости к антибиотикам от одной бактерии к другим . Выращивая бактерии, чувствительные к пенициллину, на среде, содержащей сначала очень небольшие, а затем возрастающие количества этого антибиотика, удалось получить штаммы, устойчивые к пенициллину. Это объясняется тем, что под влиянием пенициллина гибнут бактериальные клетки, не способные вырабатывать фермент пенициллиназу, который разрушает антибиотик, и их место в культуре занимают клетки, способные вырабатывать этот фермент. Таким образом происходит селекция (отбор) клеток, устойчивых по отношению к пенициллину. Если из полученного устойчивого штамма выделить ДНК и воздействовать ею на чувствительные к пенициллину микроорганизмы, то можно превратить их в пенициллиноустойчивые без всякого соприкосновения с пенициллином. [c.473]

ЭТОТ газон перепечатывали с помощью бархата (гл. VI) на чашку с минимальным селективным агаром, поверхность которого была покрыта плотным слоем ауксотрофных Р -бактерий, неспособных расти на этой среде. Генетический состав F - и F -штаммов был подобран таким образом, чтобы сделать возможным возникновение таких генетических рекомбинантов, которые были бы способны расти на селективном агаре чашки-реплики. Часть редких Hfr-клонов среди F -бактерий исходной чашки, способных образовывать селектируемый рекомбинантный тип, захватывается бархатом и переносится на газон F -бактерий чашки-реплики. В результате на этой чашке возникают рекомбинантные колонии. Местоположение такой рекомбинантной колонии указывает, таким образом, зону на газоне F -бактерий исходной чашки, в которой возникли Hfr-бактерии. Эту зону газона отбирали, высевали на вторую чашку и повторяли один или два раза процедуру отпечатков для селективного обогащения культуры Hfr-клетками. Наконец, отдельные Hfr-колонии обогащенной популяции F -клеток проверяли на плодовитость и среди них находили чистые клоны Hfr-клеток. Изменяя генотип Р -клеток и селективные условия исходной чашки, Вольман и Жакоб выделили из одного и того же родительского Р+-штамма различные Hfr-штаммы, некоторые из которых, подобно HfrH, переносят с высокой частотой участок генома thr-leu, а другие — иные участки генома. Таким образом, было доказано, что плодовитость скрещиваний F Х F действительно определяется небольшим колн-4e TB0M Hfr-6aKTepHn, возникающих спонтанно во время роста F -куль-туры. [c.229]

Многие из этих клеточных линий имеют опухолевое происхождение. Все они способны размножаться в культуре тканей бесконечно долго и проявляют (по крайней мере частично) свойства, характерные для тканей, из которых происходят. Клетки линий ВНК21, 8Р2, НеЬа способны расти в суспензии, другим клеткам для размножения необходима твердая опора. [c.205]

Рис. 8-82. Электронные микрофотографии, показывающие, что один тип покрытых оболочкой вирусов отпочковывается от апикальной, а другой - от базолатеральной поверхности плазматической мембраны одних и тех же эпителиальных клеток, растущих в культуре. Эти клетки растут, прикрепляясь базальной поверхностью к культуральной чашке. (С любезного разрешения Е. Rodriguez-Boulan и D. Sabatini.)

С помощью таких факторов роста, как PD F, клетки одного типа могут контролировать пролиферацию клеток другого типа. Но важно и то, что клетки одного и того же типа в ткани взаимодействуют друг с другом и согласовывают скорость деления, чтобы поддерживать надлежащую плотность популяции. Социальный контроль такого рода четко проявляется при реакциях на повреждение. Например, когда поврежден эпителий, клетки по краям раны стимулируются к делению (см. рис. 13-23) и наползанию на обнаженную поверхность до тех пор, пока она вновь не будет закрыта в этот момент быстрая пролиферация и движение клеток прекращаются. Сходное явление можно наблюдать на диссоциированных клетках в культуре. Эпителиальные клетки или фибробласты, помещенные в чашку, в присутствии сыворотки будут приклеиваться к поверхности, распластываться и делиться до тех пор. пока не образуется сплошной монослой в котором соседние клетки соприкасаются. Носле этого нормальные клетки перестают делиться-явление, известное как торможение пролиферации, зависимое от плотности. Если такой монослой поранить иглой таким образом, чтобы на [c.419]

Сначала клетки обрабатывают колцемидом, чтобы заблокировать образование веретена зто приводит к накоплению метафазных клеток в культуре. Такие клетки имеют более округлую форму и слабее прикреплены к пластику, чем другие клетки популяции, поэтому при встряхивании флакона они легко отделяются от субстрата. Метафазные клетки затем обрабатывают гипотоническим раствором (что приводит к их набуханию), после чего фиксируют в смеси метанол — уксусная кислота. Когда суспензию таких клеток по каплям наносят на предметное стекло, клетки лопаются и хромосомы расправляются на стекле по мере высыхания раствора. Реактивы для этой процедуры приведены в табл. 8.12, а сам метод описан в табл. 8.13. На следующем этапе хромосомы обрабатывают РНКазой, чтобы исключить гибридизацию зонда с хромосомной РНК, и затем уксусным ангидридом, который ацетилирует хромосомные белки и тем самым еще более уменьшает неспецифическое связывание зонда. Хромосомную ДНК денатурируют нагреванием и гибридизуют с зондом, предварительно меченным I- TP. Избыток меченого зонда удаляют серией промывок в низкосолевом буферном растворе и покрывают препарат фотоэмульсией. После необходимой экспозиции выявляют участки образования зерен серебра, соответствующие сайтам амплификации гена. Необходимые реагенты приведены в табл. 8.14, а сама процедура описана в табл. 8.15. [c.266]

Взаимодействие осуществляется на достаточно большом расстоянии, разделяющем две культуры друг от друга. По мере разнесения культур, а такнге нри постоянном утолщении кварцевых и слюдяных подложек эффективность дистантного взаимодействия клеток падает, это можно объяснить поглощением электромагнитного излучения оптической средой, расположенной между двумя культурами, и малой интенсивностью излучения, испускаемого клетками. [c.67]

Щелевые контакты удалось вьщелить из печени крыс благодаря их необычной устойчивости к протеолитическим ферментам и детергентам (рис. 12-35). Судя по результатам анализа таких препаратов, контакты, вероятно, состоят в основном из одного белка с мол. массой около 27 ООО. Щелевые контакты между диссоциированными клетками in vitro образуются за несколько минут (даже в отсутствие синтеза новых белков). Очевидно, в таких случаях происходит самосборка из предсуществующих субъединиц, возможно, диффундирующих в плазматической мембране их сборку могло бы инициировать связывание с такими же субъединицами близко прилегающей мембраны другой клетки. В культуре клетки позвоночных часто образуют контакты с клетками любых других позвоночных, что говорит о высокой эволюционной консервативности компонентов этих структур. [c.219]

Трансформированные клетки отличаются от нормальных и своим поведением в культуре они слабо прикрепляются к субстрату, не распластываются, у них не образуется упорядоченных пучков внутриклеточных актиновых филаментов (разд. 10.5.4), и они растут до значительно больших плотностей, чем нормальные клетки (разд. 11.1.8). Если к культуре трансформированных клеток, синтезируюших сравнительно мало фибронектина, добавить большое количество этого белка, клетки быстро прилипают к субстрату, распластываются и образуют упорядоченные пучки актиновых филаментов (рис. 12-65). Эти клетки выглядят как нормальные фибробласты, но по-прежнему размножаются до аномально высокой плотности. Видимо, фибронектин способствует клеточной адгезии, но непосредственно не контролирует пролиферацию клеток. Сейчас показано, что очишенный фибронектин помогает связыванию клеток различного типа с другими клетками, а также с коллагеном и иными субстратами. Так как высокие концентрации фибронектина были найдены в области миграции эмбриональных клеток, полагают, что этот гликопротеин влияет на передвижение клеток in vivo, изменяя их адгезивность. [c.237]

На первых этапах работы состояние толерантности оценивали по отторжению аллотрансплантата у мышей, которым предварительно вводили клетки донора-трансплантата. Было показано, что для индукции толерантного состояния требуется введение критического числа живых гемопоэтических клеток сразу после рождения животных-реципиентов. Клетки других тканей или мертвые клетки не инициировали толерантность. Состояние иммунологической неотвечаемости можно оценить не только при использовании кожного трансплантата, но и по реакции в смешанной культуре лимфоцитов (СКЛ), когда лимфоциты реципиента помешают в культуру с клетками донора. Отсутствие пролиферативного ответа клеток реципиента на антигены гистосовместимости донора указывает на создание толерантного состояния. Эффективность создания толерантности зависит также от степени антигенных различий межцу донором аллогенных клеток и реципиентом. Так, при работе с конгенными и рекомбинантными линиями мышей было показано, что толерантность индуцируется легче при различиях [c.309]

Рассмотрим другой опыт. Клетки были перенесены на фильтры, как это описано выше, и 18 ч строили плодовые тела. Образовавшиеся агрегаты собрали с фильтров и дезагрегировали па клетки, энергично встряхивая их в течение длительного времени. Затем часть клеток (А) снова перенесли на фильтр (число клеток такое же, как и в первый раз). К другой части клеток добавили суспензию бактерий и перенесли их на фильтр (Б). Результат в культуре А клетки тут же реагрегировали и быстро прошли тот путь, который они уже однажды преодолели, так что приблизительно через три часа они вновь оказались на стадии 18 ч. Формирование плодовых тел они завершили с обычной скоростью. В культуре Б клетки реагрегировали пе сразу. Они питались бактериями и возобновили рост и деление. Только после того, как запас бактерий был исчерпан и рост прекратился, они начали образовывать плодовые тела, и, как обычно, для этого им потребовалось 24 ч. Полученные результаты позволяют сделать по крайней мере два вывода (остановитесь и подумайте сами). [c.132]

Идеально, когда в пробах с гелевыми культурами все пересаженные клетки существуют первоначально как единичные изолированные клетки, не образующие адгезивный контакт с другими клетками или с субстратом. Те клетки, которые требуют для своего роста прикрепления к субстрату, теоретически не способны пролиферировать. Наоборот, клетки, не нуждающиеся в прикреплении, способны делиться и формировать прогрессивно увеличивающуюся многоклеточную колонию. Результаты такой пробы обычно выражаются в проценте клеток, способных формировать многоклеточные колонии в инокуля-те. Эта величина обозначается как колониеобразующая активность (КОА). [c.26]

В реакции участвуют и другие клетки, но роль их считается вспомогательной и, возможно, иммунологически неспецифичной. Всегда сопутствующие лимфоцитам неактивированные фагоцитирующие адгезивные клетки, а также, возможно, и В-лимфоциты выделяют растворимый медиатор, который необходим для аллостимуляции Т-клеток. Остается не ясным, во всех ли типах культур воздействие этих клеток можно заменить добавлением 2-меркаптоэтанола. Распознавание аллогенных детерминант считается функцией только одного подкласса Т-лимфоцитов, но надо принять во внимание, что процесс активации, несомненно, захватывает и другие клетки благодаря вторичному выделению многочисленных факторов, которые могут вырабатываться независимо от синтеза ДНК. [c.241]

При использовании лимфатических узлов непримированных животных одни антигены стимулируют пролиферативный ответ, тогда как другие оказываются токсичными для клеток. Чтобы исключить токсическое действие, все используемые антигены целесообразно контролировать в культуре с клетками лимфатических узлов от неиммунизированных мышей или мышей, которым вводили только ПАФ. [c.324]

Не все виды растений способны к регенерации, и до недавнего времени считалось, что их дифференцированные клетки лишены этой способности. Работы по гибридизации клеток заставили изменить это мнение. С помощью определенных ферментов можно без труда выделить из листьев протопласты, т. е. отдельные клетки без клеточных стенок. Если такие клетки гибридизовать с другими клетками или просто оставить в культуре, то протопласты восстанавливают свои клеточные стенки и при помещении в соответствующую среду формируют целые растения. Такая регенерация была получена на нескольких видах, в том числе на петрушке, табаке и картофеле (Dudits et al., 1980 Shepard, 1982). Как и у бегонии, новой зародышевой плазме, а затем цветкам и гаметам дают при этом начало единичные, полностью дифференцированные соматические клетки листа. [c.301]

Как отмечено выше, метаболические нарушения обнаруживаются и в других клетках, в частности, в эритроцитах, а также в выращенных в культуре фибробластах или клетках амниотической жидкости однако повышенная активность АЛК-синтазы, приводящая к перепроизводству АЛК и порфобилиногена, наблюдается преимущественно в печени. Видимо, это связано с тем, что печень является тем самым органом, в котором протекает метаболизм индуцирующих агентов. Острая порфирия служит одним из редких примеров болезни, фенотипически выраженной у гетерозигот, при этом недостаточность фермента составляет только 50%. [c.363]

Смотреть страницы где упоминается термин Культуры других клеток: [c.156] [c.181] [c.183] [c.182] [c.58] [c.150] [c.482] [c.33] [c.336] [c.524] [c.261] [c.168] [c.14] [c.23] [c.57] [c.30] [c.39] [c.209] [c.11] [c.14] [c.104]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология