Сера в меченом фаге

Бактериофаги, т. е. вирусы, размножающиеся в бактериях, состоят из белковой оболочки и содержащейся внутри нее ДНК или РНК. С помощью меченых атомов и Р установлено, что при заражении бактериальной клетки фагом в нее не входит белок (метка по сере), но входит ДНК (метка по фосфору). Частица бактериофага вспрыскивает свою ДНК в клетку. Размножение частиц фага в клетке показывает, что ДНК ответственна за синтез своих копий и белковых оболочек, т. е. она является генетическим веществом фага. [c.487]

Секвенирование ДНК по Сэнгеру. Это наиболее употребительный метод секвенирования ДНК, поскольку по сравнению с химическим методом он позволяет анализировать более крупные фрагменты ДНК с меньшей вероятностью ошибки. Секвенируемую ДНК сначала клонируют в одноцепочечный бактериофаговый вектор, который может функционировать в Е. соН. Чаще всего используют фаг М13 и его производные [13]. Одноцепочечная ДНК взаимодействует как субстрат с ДНК-поли-меразой, которая точно копирует первую цепь. Однако если нормальный дезокси-нуклеозидфосфат заменить его аналогом-дидезоксинуклеозидфосфатом, то дальнейшее функционирование полимеразы прекращается и рост синтезируемой цепи останавливается. Для инициирования этого процесса используют химически синтезированный универсальный нуклеотидный праймер. Реакцию проводят в присутствии четырех аналогов dNTP, один из которых содержит метку Р. Исходно имеется четыре реакционные смеси, в каждой из которых понижена концентрация одного из аналогов меченого нуклеотида. Поэтому в результате реакции получаются смеси меченных радионуклидами фрагментов ДНК, один конец у которых одинаков, но при этом они имеют разную длину и разные основания на другом конце. После инкубации ДНК в каждой смеси превращается в одноцепочечную форму. Затем смеси подвергают электрофорезу в полиакриламидном геле. Длину и последовательность фрагментов ДНК можно считывать непосредственно с гелевого слоя. Этот метод позволяет секвенировать в одной серии реакции от 250 до 500 пар оснований. Полученные данные часто анализируют с помощью компьютера. [c.95]

Для секвенирования ДНК по Сэнгеру созданы универсальные конструкции (на базе генома фага М13) для встраивания в них изучаемого фрагмента , позволяющие применять универсальный праймер. Метка вводится в праймер или по а-фосфатной группе нуклеозидтрифосфата, В последнем случае это может быть не только меченый атом фосфора ( Ф, например), но и атом серы ( 5), заменяющий атом кислорода [c.19]

Белки фага содержат серу, но не содержат фосфора, а ДНК содержит фосфор, но не содержит серы. Поэтому фаговые частицы, образовавшиеся в Е. соИ, меченных радиоактивной серой, включили ее в свои белковые оболочки, тогда как частицы, образовавшиеся в Е. соИ, меченных радиоактивным фосфором, содержали ДНК, меченную Р. [c.162]

Общий антиген (меченное вещество, специфически осаждаемое антисывороткой к фагу Т2 освобождается при искусственном лизисе клеток Е. соН, зараженных в среднем пятью частицами фага Т2 па клетку). Зараженные бактерии выращиваются в минимальной среде, к которой в момент заражения добавлены II. Избыточный антиген — разность между числом фаговых диниц общего антигена на клетку и числом внутриклеточных инфекционных частиц на клетку в разные моменты времени. ( Фаговая единица — это количество серы, присут- ствующее в одной частице фага, или 1.5-10—мкг.) Ill — инфекционное потомство фага. [c.267]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология