Радиоактивное мечение

Нерадиоактивные методы детекции В большинстве лабораторий для гибридизации используют зонды, меченные каким-либо радиоактивным изотопом, чаще всего Р. Такие зонды обладают высокой удельной радиоактивностью и обеспечивают хорошее отношение сигнал/шум. Радиоактивно меченный зонд наносят на фильтр с фиксированной на нем ДНК-мишенью, проводят гибридизацию, отмывают несвязавшуюся ДНК-зонд и детектируют метку с помощью радиоавтографии. [c.190]

Средний молекулярный вес полученного таким методом политетрафторэтилена составляет 142 000—534 ООО. Эти величины были получены косвенным методом ири введении радиоактивных (меченых) атомов в молекулу инициатора. Принималось, что продукты распада инициатора присоединены к обоим концам каждой макромолекулы. [c.256]

Использование радиоактивных изотопов в различных областях химии стало настолько широким, что нет никакой возможности даже перечислить их все. Радиоактивные, меченые атомы нашли большое применение как в промышленности, так и в научных исследованиях начиная от определения механизма химических реакций и кончая наблюдением за земляными червями во время действия на них различных раздражителей. [c.421]

При таком подходе лучше использовать торцевые счетчики Гейгера—Мюллера, чтобы иметь возможность выбрать удельную радиоактивность чистого меченого эфира, которая была бы близка к удельной радиоактивности производного, получаемого при обработке анализируемой пробы. В другом подходе определяют удельную радиоактивность меченого производного, добавляемого к пробе, и для вычислений пользуются обычной формулой [c.78]

Вновь синтезируемые цепи получают радиоактивно меченными за счет включения Фрагменты различной длины, синтез каждого из которых останавливается перед заданным основанием, получают лимитированием подачи этого основания. В результате протекания четырех параллельных синтезов, осуществляемых в условиях дефицита по А, С, G и Т, соответственно, происходят остановки перед различными основаниями (—А, —С, —G и —Т). Одновременный электрофорез этих четырех образцов дает последовательность полос на авторадиограмме, с которой можно непосредственно считать последовательность примерно 100—150 остатков. [c.189]

Такое сродство часто измеряется в экспериментах по вытеснению и выражается через Ki или /С50 (концентрация ингибитора, необходимая для 50%-ного вытеснения радиоактивно меченного лиганда из связывающего центра). Соотношение между [c.282]

Были разработаны два основных метода изучения транспорта пережимание (лигатура) аксона и радиоактивное мечение. Первый метод был разработан Вейсом, который демонстрировал транспорт при лигатуре, или пережимании, аксонов (рис. 10.1). При этом все, что переносится в прямом направлении задерживается на проксимальном участке (ближайшем к телу клетки), продукты обратного транспорта накапливаются в дистальной области (ближе к синапсу), т. е. на дистальных участках образуется дефицит продуктов прямого транспорта, а в проксимальной (центральной) области аксона — продуктов обратного транспорта. В дальнейшем вместо лигатуры стали использовать локальное охлаждение аксона. Такая методика обеспечивает меньшее повреждение ткани и позволяет вернуться к исходному состоянию нервного волокна. [c.304]

Метод радиоактивного мечения требует введения экспериментальным животным в область клеточных тел определенных нервных путей радиоактивных предшественников. Так, после инъекции в глаз можно следить за меткой по мере ее прохождения по зрительному пути. Более полная информация может быть получена путем определения распределения радиоактивной метки в зависимости от времени в разрезанном на равные сегменты нерве. Такие определения можно проводить в сочетании с лигатурой или с исследованиями цитоплазмы нервных окончаний при использовании субклеточного фракционирования для их выделения в виде синаптосом. [c.304]

Некоторый минимальный уровень автоматизации, разумеется, предусмотрен даже в самой простой модели коллектора, например задание объема фракций п их числа до автоматической остановки коллектора и насоса или подача отметки на ленту регистратора после каждой смены пробирки (желательно с учетом сдвига по объему между моментом прохождения фракции через кювету детектора и ее поступлением в пробирку). Удобно, если коллектор снабжен цифровым индикатором номера фракции и объема, у ке поступившего в пробирку. Во многих случаях, особенно при работе с радиоактивно меченными веществами, необходимо, чтобы в коллекторе было предусмотрено устройство, управляюхцее клапаном, который запирает колонку во время смены пробирок. Нелишним является оснащение прибора памятью па случай временного отключения напряжения в сети, с тем чтобы он мог возобновить свою работу с прерванного положения после включения тока. Все электронные управляющие устройства желательно герметизировать д.ля обеспечения стабильной работы во влаясной атмосфере. [c.89]

Описано фракционирование радиоактивно меченных пептидов трипсинового гидролизата белка на колонке Spherisorb ODS (0,46 25 см) линейным градиентом (0—62,5%) этанола в 4,5%-ном растворе НСООН. Фракционирование вели при температуре 40° со скоростью элюции 1,4 мл/мин в течение 95 мин [Smart et al., 1981]. В растворах с высоким содержанием этанола (как и ацетонитрила) растворимы ие все пептиды. Хроматографию труднорастворимых пептидов иногда удается осуществить, используя в качестве органического растворителя пропанол. В силу своей большей, чем у этанола, гидрофобности пропанол элюирует с октадециловых колонок даже крупные пептиды при концентрации менее 20%. Относительно высокая вязкость пропанола заставляет снижать скорость элюции, но для крупных пептидов это все равно необходимо делать ввиду их замедленной диффузии. [c.202]

Изящная комбинация химической модификации с ионообменной хроматографией была использована для быстрого отбора из совокупности пептидов, полученных после трипсинового гидролиза, тех из них, которые содержат Met. Смесь трипсиновых пептидов растворяли в 30%-ной СН3СООН и обрабатывали радиоактивно меченным иодацетамидом. На атоме серы метионина возникал дополнительный положительный заряд, поэтому при хроматографии на сильном катионообменнике такие пептиды задерживались но сравнению с нормальным положением их элюции. По наличию метки со- [c.298]

С помощью добавленного в следовых количествах радиоактивно меченного IgG эффективности посадки IgG оценили в 60%. Использование сорбента в опытах с применением конкурентного радиопм-мунного метода (КРИМ см. [Остерман, 1983]) показало, что при посадке на сефарозу сохраняется около 35/о активности такого же количества IgG в растворе. [c.379]

Все это одно время порождало у многих исследователей представление о неизбежности постепенного отмирания метода ТСХ, однако оно, по-видимому, оказалось ошибочным. Действительно, для точных определений содержания компонентов во фракционируемой смеси ТСХ сегодня уступает ЖХВД, но она может с ней конкурировать (а чаще — дополнять) в качестве независимого метода нри решении проблем идентификации веществ. И здесь на сцену выступает главное достоинство метода ТСХ — простота и дешевизна. Что же касается решения препаративных задач, то использование практическн во всех современных методах исследования радиоактивно меченных соединений привело к такому снижению необходимых количеств вещества, что препаративные возможности ТСХ оказываются во многих случаях вполне достаточными. Добавим сюда еще и очень существенный прогресс в повышении разрешающей способности метода, достигнутый в последние годы благодаря разработке новых микрогранулированных и весьма гомогенных носителей для [c.457]

Радиоактивно меченные аминокислоты можно регистрировать с помощью жидкостного сцинтилляционного счетчика с проточной кюветой, в качестве которой используют спираль из прозрачного для УФ-излучения материала. Сцинтиллятор смешивают с элюатом на входе в СЕираль [Вакау, 1975]. [c.523]

В этой связи представляет интерес также изучение конформаций природных веществ путем сравнения с аналогами различной структуры. Наконец, следует напомнить о возможности получать синтетическим путем радиоактивно меченные аналоги для изучения их связывания и радиоимму-нологических исследований. [c.93]

При исследовании условий этерификации выяснилось, что образование эфира, например пальмитиновой кислоты, в смеси 9 1 (по объему) этилового эфира и метанола полностью завершается за 10 мин [91]. При этом метанол, очевидно, действует как катализатор, поскольку значение молярной удельной радиоактивности получаемого эфира хорошо согласуется с молярной радиоактивностью меченого НСА. Это наглядно свидетельствует в пользу применения СНгЫг в качестве радиореагента для количественного анализа в присутствии метанола. В эфире или метаноле, взятых в отдельности, реакции не завершались и за 30 мин. Увеличение продолжительности реакции нежелательно, поскольку оно ведет к образованию примесей, например полимера ( СНг) , что приводит к помутнению раствора или появлению в нем хлопьев. [c.153]

Проблема генетического кода, этого специального соотношения между индивидуальными аминокислотами и триплетами оснований, или кодонами, была решена с использованием 64 возможных тринуклеозиддифосфатов, синтезированных Кораной [8]. Молекула тРНК заряжается в результате ацилирования ее З -концевого аденозина правильной аминокислотой, которая может быть радиоактивно меченной. Такая заряженная тРНК будет связываться с сомой только в присутствии соответствующего кодона. Оказалось, [c.207]

С разработкой в начале 80-х гг. быстрых, эффективных и недорогих методов химического синтеза олигонуклеотидов появилась возможность использовать радиоактивно меченные олигонуклеотидные зонды для выявления различий между нуклеотидными последовательностями, в частности для обнаружения мутаций у человека. К тому времени было изолировано относительно небольшое число генов, главным образом в виде комплементарных ДНК (кДНК), поэтому подбор зонда, гомологичного конкретному гену, представлял собой непростую задачу. Но даже если соответствующие кДНК были получены, невозможно было различить нормальный и мутантный гены чело- [c.189]

Ядерно-физические методы применяют для количественных определений радиоактивно меченых соединений. В ТСХ наиболее часто в качестве меток используют тритий и радиоактивный йодород. ЯФМ характеризуются высокой чувствительностью, селективностью и воспроизводимостью, длительность же детектирования значительно выше по сравнению с оптическими и ЭХМ. Однако благодаря специфике метода в радиохроматограммах все разделенные зоны можно оценивать одновременно. Радио-хроматограммы можно оценивать как непосредственно на слое, так и после извлечения из слоя зон с разделенными веществами. [c.372]

Неудобство в применении краун-соединений по сравнению с четвертичными солями заключается в том, что стоимость их существенно выше, а некоторые типы краун-соединений токсичны (гл. 7). Поэтому до сих пор применение краун-соединений в органических синтезах в промышленных масштабах еще не вышло из стадии исследовательских работ, за исключением некоторых процессов синтеза природных соединений, дорогостоящих реактивов и радиоактивно меченных соединений. Однако можно предвидеть, что промышленное применение краун-соединеш й в химических процессах будет янтенсивно развиваться в будущем, что позволит сократить энергетические затраты и загрязнение окружающей среды. Это станет возможным, когда появятся дешевые я малотоксичные краун-соединения, которые удобно использовать и регенерировать. Примером такях соединений являются иммобилизованные краун-соединения, описанные в гл. 6. [c.210]

Рис. 9.3. Связывание лиганда с препаратом рецептора 1 — связывание как функция радиоактивно меченного лиганда 2 —связывание того же лиганда в присутствие 100-кратного избытка нерадиоактивного лиганда эта невытес-няемая часть радиоактивного лиганда связывается неспецифически 3 — разность между кривыми 1 к 2 — это насыщаемое, т. е. специфическое связывание 4 — график обратных величин, построенный по данным кривой 3 экстраполяция до пересечения с осью абсцисс дает Ко, а пересечение с осью ординат — максимальное связывание.

Эксперименты по вытеснению очень удобны п широко используются, поскольку дают возможность определить сродство для многих лигандов, когда имеется только один лиганд с достаточно высокой удельной радиоактивностью (в нашем случае антагонист I). Собственно эти эксперименты показали возможное существование двух состояний (рис. 9.2) агонистсвязы-вающего А и антагонистсвязывающего I, поскольку получены различные величины для сродства (выражаемые в опытах по вытеснению как различные константы ингибирования К ) к данному лиганду в зависимости от того, замещает он (радиоактивно меченный) агонист или антагонист. Несовпадение значений К можно объяснить только предположением, что лиганд связывается с рецептором с различным сродством в зависимости от состояния последнего. Если, например, агонист [Ш] допамин вытесняется немеченым допамином, то константа К ингибитора равна 17,5 нМ в то же время если вытесняется антагонист [Ш]галоперидол, то для допамина К равна 670 нМ. Таким образом, немеченый допамин генерирует форму рецептора со сродством, которое примерно в 40 раз выше для радиоактивного агониста, чем у формы рецептора, образовавшейся при действии антагониста. Антагонист галоперидол имеет сродство к состоянию I (/С] = 1,4 нМ) в 600 раз выше, чем к -состоянию А (/С1 = 920 нМ). (С помощью экспериментов по вытеснению можно также определить, будет ли неизвестное соединение агонистом или антагонистом такие биохимические тесты очень подходят для фармакологических лабораторий ) Этот метод применим лишь в том случае, когда превращение А в I идет медленно. [c.284]

Опиаты обладают как анальгетическим, так и эйфорическим действием. Распределение опиатных рецепторов в головном мозге было исследовано с помощью радиоактивно меченных лигандов и флуоресцентно меченных антител против энкефалинов. Особенно большая плотность рецепторов обнаружена в лимбической системе — эволюционно самом древнем отделе, который отвечает за эмоциональное возбуждение и в котором локализованы эйфорические и эмоциональные компоненты болеутоляющего действия опиатов [19]. В спинном мозге они непосредственно действуют на проводимость болевых ощущений. Исследование этого отдела ЦНС как раз дает прямые доказательства физиологической роли опиатных рецепторов. Они являются, вероятно, пресинаптическими соединениями и поэтому их следует искать в нервных окончаниях. Отмечалось, что опиаты ингибируют высвобождение вещества Р [20] — соединения, которое, как пола- [c.289]

Для проведения РИА гормонов, а также других лекарств или токсических веществ (возможности метода весьма широкие) необходимо иметь радиоактивно меченое исследуемое соединение и смесь сывороточных гамма-глобулинов, содержащих антитела к этому соединению. Идеальным случаем является использование чистых моноклональных антител, полученных с помощью гиб-рндомной методики. [c.315]

Смотреть страницы где упоминается термин Радиоактивное мечение: [c.399] [c.145] [c.187] [c.355] [c.425] [c.492] [c.497] [c.508] [c.67] [c.89] [c.91] [c.193] [c.252] [c.299] [c.376] [c.85] [c.141] [c.159] [c.306] [c.307] [c.329] [c.615] [c.656] [c.261] [c.40]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология