Антисыворотка

Рис. 3-6. Электрофоретическое разделение белков плгрмы человека пятью различными методами при pH 8. а — электрофорез без носителя б — электрофорез на бумаге в — электрофорез в крахмальном геле г — электрофорез в полиакриламидном геле д — иммуноэлектрофорез (полосы прештитации к поливалентной антисыворотке человека). Стрелки показывают положение отдельных белков плазмы.

В случае хранения в замороженном состоянии при —20 °С рекомендуется разделять антисыворотку на партии небольших объемов, чтобы не подвергать ее многократному замораживанию и размораживанию. При использовании некоторых методов необходимо, чтобы иммуноглобулины IgG были отделены от других сывороточных белков. Осаждение сульфатом аммония или комбинирование этой операции с ионообменной хроматографией на ДЭАЭ-целлюлозе [31, 36] или с аффинной хроматографией при использовании белка А, иммобилизованного на носителе [48], позволяет легко, но более или менее тщательно очистить эти иммуноглобулины. Иммуноаффинная хроматография, используя очищенный иммобилизованный антиген, дает возможность производить очистку специфических антител белка при разделении фракции IgG или даже антисыворотки. [c.97]

Антисыворотка кролика к IgG мыши. [c.308]

Эта реакция преципитации в жидкой фазе используется для определения количества какого-либо белка в белковой смеси (при условии, что используемая антисыворотка моноспецифична) по калибровочной кривой, построенной для очищенного антигена или стандартного образца, вернее, по восходящей части этой кривой, т. е. [фи избытке антител. В случае неизвестного образца [c.100]

Если раствор овальбумина добавить к соответствующей антисыворотке (от кролика, которому вводили овальбумин), то образуется осадок. Если [c.469]

Иммобилизованные ферменты могут быть использованы в качестве иммуносорбентов для выделения из антисыворотки специфических антител на эти ферменты. Эффективность адсорбции антител, количество адсорбированных антител и условия их элюции зависят от свойств иммуносорбента от количества связанного с матрицей белка-антигена, прочности связи антиген—носитель, конформации антигена и числа вовлеченных в ковалентное связывание субъединиц антигенов-олигомеров. [c.304]

Антисыворотка, полученная у кроликов, иммунизированных глицеральдегид-З-фосфатдегидрогеназой из дрожжей. [c.304]

Чувствительность в определении единичных аминокислотных замен в случае моноклональных антител значительно выше по сравнению с антисывороткой и позволяет использовать моноклональные антитела даже для детекции тонких конформационных изменений молекулы белка. Благодаря высокой чувствительности, с которой моноклональные антитела определяют антигенные детерминанты, их можно использовать для точного установления границ и структуры детерминант, а также для идентификации и выделения чистых специфических пептидных фрагментов антигена. [c.306]

В случаях инъецирования смесью белков антисыворотка содержит несколько семейств антител, каждое из которых специфич- [c.96]

Антисыворотки можно хранить при 4 °С, предотвращая развитие микроорганизмов с помощью бактерицидов (предпочтительно азид натрия). Однако длительное выдерживание при 4 °С может привести к гибели антител. Лиофилизация, или, проще, замораживание, позволяет сохранить антисыворотки в течение многих лет. [c.97]

Агглютинация остается видимой до некоторого разбавления антисыворотки, которое называется пределом разбавления иммунной сыворотки. [c.98]

Метод агглютинации используется также для изучения растворимых антигенов. Они связываются химическим путем с эритроцитами или частицами латекса, образуя таким образом частицы, называемые сенсибилизированными. Антитела противо-растворимых антигенов, добавляемые в суспензию таких частиц, косвенным образом провоцируют агглютинацию сенсибилизированных частиц. Этот способ называется пассивной, или косвенной, агглютинацией [9, 72, 109]. Принцип его схематически представлен на рисунке 4.3. Указанная методика позволяет также использовать антитела вместо антигенов для получения сенсибилизированных частиц. Применение моноспецифических антител позволяет в первую очередь количественно определять содержание отдельного белка в смеси белков. Если антисыворотка не является строго специфичной, то для определения количества содержащегося белка необходимо, чтобы используемые для сенсибилизации частиц антигены были очищены от примесей, которые могут реагировать с неспецифическими антителами в сыворотке. [c.98]

При этих методах используются две системы антиген — антитело с одной стороны, подлежащая изучению система антиген — антитело и, с другой — система красных кровяных телец барана и антиэритроцитарных антител барана. Метод состоит из двух этапов увеличивающееся количество антигена добавляют к одному и тому же количеству антисыворотки против этого антигена (ее предварительно освобождают от комплемента нагреванием до 56 °С), к которому прибавляют определенное количество комплемента морской свинки. Контролем является только иммунная сыворотка, антигены испытывают параллельно. В ходе этой реакции (24 ч при 4 °С) какая-то часть комплемента морской свинки свяжется с иммунными комплексами по мере завершения в каждом образце реакции антиген — антитело. Несвязанную часть комплемента количественно определяют на втором этапе [c.103]

В основе иммунохимического метода контроля гомогенности исследуемого белка лежит реакция преципитации его с соответствующей антисывороткой, полученной от иммунизированных этим белком животных. Для строгого доказательства гомогенности белка требуется одновременное использование нескольких методов. [c.33]

Примерно 100 лет назад была предпринята попытка лечения детей, больных дифтерией, с помощью неочищенной антисыворотки, получен- [c.210]

К сожалению, риск, связанный с использованием антител, не позволяет широко применять этот метод терапии. Дело в том, что в организме больного часто вырабатываются собственные антитела на чужеродные белки, присутствующие в цельной или частично очищенной антисыворотке, и ее повторное введение в случае сенсибилизации организма может привести к развитию анафилактического шока и гибели пациента. [c.211]

В ряде вопросов, например при выяснении родства между белками, при сравнении фракций патологических и нормальных белков и т. д., перекрестные реакции оказывают существенную пользу. Реакции преципитации весьма чувствительны. Например, с помощью антисыворотки соответствующего титра можно обнаружить овальбумин в концентрации 1 мкг/мл. В зависимости от используемого метода определения азота в количественной реакции преципитации удается обнаружить от 75 до 125 мкг антигенного азота. [c.16]

Для выполнения иммунологического анализа необходимо иметь, помимо испытуемой сыворотки, также и антисыворотки, специально полученные путем иммунизации животных различными белковыми фракциями (альбумин, а-, р-, Y глoбyлины и др.) или специфическими белковыми веществами (церулоплазмин, си-дерофилин и др.), — антиальбуминовые, анти-а-, р- или у-сыво-ротки и т. п. [c.241]

Эндорфин — опиат мозга, состоящий из 31 аминокислотного остатка, был синтезирован в генетически сконструированных клетках в 1980 г. группой ученых из Австралии и США. -Эндорфин получен в клетках Е. соН в виде гибридного белка с -галактози-дазой. Процедура синтеза -эндорфина включала получение путем обратной транскрипции мРНК — кДНК, кодирующей белок-предшественник, содержащий помимо последовательности -эндорфина последовательность АКТГ и -липотропина ( -JITT), в дальнейшем удаляемые. -Эндорфин, полученный из гибридного белка и тщательно очищенный, обладал значительной биологической активностью. Он специфически взаимодействовал с антисывороткой против -эндорфина. От -эндорфина человека генно-инженерный -эндорфин отличался по двум аминокислотам, и эти отличия можно было легко устранить на нуклеотидном уровне путем замены двух кодонов в ДНК бактериальной плазмиды. [c.139]

Второй метод проводится в чашках Петри. В застывшем слое агара прорезают 5 углублений, из которых в центральное наливается антисыворотка, а в остальные — исследуемые жидкости. Затем в течение 3 суток происходит взаимодиффузия, в результате которой на месте стыка антигена с антителом образуется пре-ципитационная линия или несколько линий в зависимости от количества антиген-антительных реакций. [c.241]

Цель задачи — исследовать эффективность очистки антител из антисыворотки на иммуносорбентах, полученных при иммобилизации глицеральдегид-З-фосфатдегидрогеназы на препаратах сефарозы, активированных при разной концентрации Br N. [c.304]

Препараты сефарозы с глицеральдегид-З-фосфатдегидрогеназой, иммобилизованной при разной степени активации, помещают в колонки (размер 0,5x3 см) и уравновешивают 0,15 М раствором Na I. Затем при комнатной температуре через колонки пропускают антисыворотку до полного насыщения иммуносорбента антителами (т. е. до прекращения адсорбции антител на сорбенте при пропускании дополнительных порций антисыворотки). Иммуносорбент отмывают от балластных белков 0,15 М раствором Na l до исчезновения поглощения при длине волны 280 нм в элюате. [c.304]

Многие растворимые белки, ферменты в том числе, выделенные из различных тканей животных, обладают антигенными свойствами, т. е. при введении в организм вызывают в нем образование антител. Однако их антигенные свойства (иммуногенность) различаются, что проявляется в разной способности стимулировать продукцию антител. В известных пределах иммуногенность коррелирует с молекулярной массой антигена. Иммунохимически чистые антигены применяются обычно в виде 0,01 — 1,0%-ных растворов, тогда как неочищенные антигены и смеси антигенов приходится вводить в большей концентрации. Слабоиммуногенные антигены необходимо вводить со стимуляторами иммуногенеза, из которых наиболее часто используют адъювант Фрейнда. Антисыворотки против растворимых нативных белков можно получить повторными инъекциями (внутримышечно, подкожно, внут-рикожно) эмульсии раствора белка с адъювантом или внутривенными инъекциями раствора белка без адъюванта. [c.307]

Известны три группы интерферонов а-интерфероны (а-И), образующиеся при воздействии вирусов на лейкоциты 3-интер-фероны (Р-И), появляющиеся при воздействии вирусов на фибро-бласты у-интерферойы, продуцируемые Т-лимфоцитами в ответ на воздействие бактериальными и вирусными антигенами или антисыворотками против поверхностных детерминант лимфоцитов. [c.140]

При введении животному чистого белка вырабатываемые антитела специфичны только для этого белка. В таком случае получают моносиецифичную антисыворотку (см. рис. 4.2). Следует отметить, что иммунизация очищенным белком не всегда дает такой результат. Примеси, присутствующие в очищенной фракции, если они достаточно иммуногенны, могут вызвать образование антител. Чрезвычайно важно удостовериться, что антисыворотка моноспецифична до использования ее при определенных методах (в сущности, ири всех описанных здесь методах, за исключением методов иммунопреципитации в геле) это исключит возможность участия в реакции неспецифических антител. Неспецифические антитела чаще появляются при длительных процессах иммунизации. [c.96]

Сыворотку, взятую у животного до иммунизации, можно назвать доиммунной или неиммунной. Она служит для проверки того, что наблюдаемые реакции с антисывороткой являются именно специфичными реакциями между иммуногенами и антителами, выработанными в процессе иммунизации. [c.97]

Добавление раствора белкового антигена к соответствующей антисыворотке нередко вызывает медленную преципитацию. Факторы, влияющие на скорость появления и количество образующегося осадка, многочисленны классы используемых иммуноглобулинов, характер антигена, относительная доля участия и концентрация агентов, температура, ионная сила, pH [53]. Представляется, что после быстрого образования комплекса антиген — антитело формируются агрегаты, которые, теряя определенцое число полярных группировок, становятся нерастворимыми. [c.100]

Этот особый аспект реакции иммунопреципитации может бь[ть охарактеризован кривой преципитации, представляющей количество осадка как функцию возрастания количества антигена, добавленного к тому же количеству антител (рис. 4.4). Количество этого осадка вначале увеличивается, проходит через максимум, называемый точкой эквивалентности, а затем умень[цает-ся. При избытке антигена часть комплекса антиген—антитело не осаждается это может быть обусловлено разной природой решетки, образованной в этих условиях (см. рис. 4.2 А). При большом избытке антигена осаждение может ингибироваться. В некоторых случаях, например с лошадиной антисывороткой, аналогичный эффект можно наблюдать не только при избытке антигена, но также при избытке антител. [c.100]

Когда реакцию преципитации проводят с использованием белковой смеси и полиспецифической антисыворотки, то получаемая кривая преципитации представляет собой результирующую [c.101]

Кривая, представляюш,ая часть комплемента, связанную в первой реакции (разные количества антигена на то же количество антител и комплемента морской свинки), имеет форму колокола, максимум ее соответствует определенному соотношению антигена и антитела, называемому эквивалентностью. Указанный метод особенно чувствителен для выявления структурных различий белков [13, 92, 93 пример этого приведен на рисунке 4.7. Для данного метода необходимо, чтобы антисыворотка была моноспецифична, когда исследуются биологические растворы или экстракты, содержащие смесь белков. [c.104]

Иммуноадсорбция очень часто использовалась в сочетании с тем или другим иммунохимическим методом, принадлежащим к вышеописанным группам. Она позволяет удалить некоторые антитела из антисыворотки с помощью антигена или смеси антигенов. Иммуноадсорбция позволяет также с помощью антисыворотки или ее фракции IgG удалить некоторые антигены из белкового раствора. [c.108]

Иммуноадсорбцию чаще всего проводят путем осаждения в жидкой среде. Например, чтобы удалить некоторые антитела из антисыворотки, добавляют небольшие количества антигена, [c.108]

Установлено, что полисахариды являются детерминантами, определяющими иммунологическую специфичность многих видов микроорганизмов. Специфическое взаимодействие зависит от ассоциации реакционноспособных групп полисахаридного антигена и белкового антитела, и потому метод, основанный на этом типе взаимодействий, обычно специфичен к строению полисахарида Если получить антисыворотку, специфичную к полисахаридам из вестного строения, ее можно использовать для установления сте пени структурного сходства неизвестных полисахаридов и полиса харидов, к которым специфична данная антисыворотка. Таким пу тем была обнаружена гетерогенность галактана из легких быка Преципитат, образуемый с антисывороткой, специфичной к Pneu mo o us типа XIV, содержал D-галактозу и D-глюкуроновую кис лоту в количествах, отличных от исходного препарата [62]. [c.227]

С помощью иммунологических реакций гормональных гликопротеинов показано значительное сходство этих соединений. Например, антисыворотка к фолликулостимулирующему гормону перекрестно реагирует с лютеинизирующим гормоном, хорионическим гонадотропином человека и тироидстимулирующим гормоном, что указывает на наличие в молекулах этих гормонов ряда общих антигенных групп наряду с их специфическими антигенными детерминантами. Показано, что такие гормоны состоят из субъединиц [195, 196], которые могут высвобождаться при действии трипсина, растворов пропионовой кислоты (I М), мочевины (8 М) или доде-цилсульфата натрия. Хотя таким образом были испытаны не все гликопротеины человека, однако в настоящее время полагают, что Р-субъединицы ответственны за специфичность гормона, тогда как а-субъединицы являются взаимозаменяемыми. Такой вывод согласуется со сходством аминокислотных последовательностей в а-субъединицах и уникальным характером р-субъединиц. При совместной инкубации а- и р-субъединиц в физиологических условиях возможна их рекомбинация, причем конечная биологическая активность выше суммарной активности отдельных субъединиц. Найдено также, что субъединицы гормонов из разных источников взаимозаменяемы. Более важен, однако, тот факт, что путем комбинации субъединиц из различных гликопротеиновых гормонов могут быть получены гибридные молекулы [196, 197], причем тип гормональной активности гибридного гликопротеина определяется первоначальной активностью р-субъединицы. [c.266]

Основной принцип ELISA — специфическое связывание первого антитела с мишенью. Если молекула-мишень представляет собой белок, то его очищенный препарат обычно используют для получения антител, при помощи которых затем и выявляют данную мишень. Антитела, которые образуются в сыворотке (антисыворотке) крови иммунизированного животного (обычно кролика), связываются с разными антигенными детерминантами (эпитопами) моле-кулы-мишени. Такую смесь антител называют поликлональным препаратом. Использование поликлональных антител имеет два недостатка, существенных для некоторых методов диагностики 1) содержание отдельных антител в поликлональном препарате может варьировать от одной партии к другой 2) поликлональные антитела нельзя применять, если необходимо различить две сходные мишени, т. е. когда патогенная (мишень) и непатогенная (не-мишень) формы различаются единственной детерминантой. Однако эти проблемы вполне разрешимы, поскольку сейчас научились получать препараты антител, выработанных к одной антигенной детерминанте, т. е. препараты моноклональных антител. [c.184]

Антисыворотка (Antiserura) Жидкая составляющая крови, содержащая антитела. [c.544]

В 1905 г. Бекхольд, наслоив козью сыворотку на смешанную с желатиной кроличью антисыворотку к белкам козы, наблюдал в геле образование двух полос преципитации. Иммунологическая природа этого коллоидно-химического явления была раскрыта лишь спустя несколько десятилетий. На основе реакции преципитации в геле был разработан ряд новых методов исследования, которые не только позволили охарактеризовать иммунологические свойства белков, но и открыли новые перспективы их углубленного анализа. [c.18]

Молекулярная биология клетки Том5 (1987) -- [ c.204 ]

Основы биохимии Т 1,2,3 (1985) -- [ c.157 ]

Успехи стереохимии (1961) -- [ c.654 , c.657 ]

Методы культуры клеток для биохимиков (1983) -- [ c.208 , c.209 ]

Физическая Биохимия (1980) -- [ c.248 ]

Биохимия Т.3 Изд.2 (1985) -- [ c.236 ]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология