Чистые ферменты, трудности при работе с ними

Удобство метода состоит также в том, что он позволяет осуществлять микро- и ультрамикроизмерения активности холинэстераз, причем, как показывает опыт, микромодификации метода дают даже ббльшую точность, чем макрометод. Дело в том, что, при работе с малыми объемами можно создать сравнительно большие концентрации фермента при малых абсолютных количествах их, а это, в СБОЮ очередь приводит к относительно большим сдвигам pH при реакции, что повышает точность определения. Трудности работы микро- и ультрамикрометодами носят чисто технический характер. Величина общего объема реакционной смеси лимитируется конструкцией и размерами сосудика, где должны быть размещены стеклянный электрод, электрод сравнения, мешалка и кончик бюретки для щелочи. При объеме реакционного сосуда 3—Ъмл могут быть использованы двухстенные сосудики с протоком воды от выносного ультратермостата, обычного размера стеклянный и каломельный электроды, а также магнитная мешалка. При работе с реакционными смесями объемом 0,5—0,7 мл необходим маленький сосудик также с двойными стенками (для тер статирования), в котором размещается стеклянный электрод с шариком диаметром 2,5— [c.150]

Эта книга —итог двадцатилетних исследований, связанных с очисткой ферментов. Они были начаты отчасти потому, что в то время, когда я работал над докторской диссертацией и мне понадобилась креатинкиназа для регенерации АТР, мы не могли позволить себе покупать препараты очищенных ферментов, да и вряд ли они были тогда в продаже. Я до сих пор испытываю удовольствие, если мне удается выделить достаточно чистый фермент из сложной смеси белков движимый лищь желанием испытать свои силы и из чисто академического интереса я и теперь провожу много времени за очисткой ферментов, даже если конечный продукт мне, по существу, и не нужен. В те дни все приходилось проверять опытным путем подбирали условия фракционирования белков сульфатом аммония и органическими растворителями, пробовали, адсорбируется ли фермент на кальций-фосфатном геле. Больще практически ничего и не было. В настоящее же время мы располагаем огромным разнообразием методов, материалов и подходов к проблеме очистки ферментов. Трудности сейчас заключаются не в том, чтобы умело манипулировать несколькими доступными приемами, а в том, чтобы суметь выбрать наиболее подходящий метод из огромного их множества. [c.6]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология