ДСН—ПААГ

На втором этапе трубочка геля, содержащего разделенные белки, снова подвергается электрофорезу, на этот раз в направлении перпендикулярном тому, что на первом этапе. В этом слу чае электрофорез ведут в присутствии ДСН и белки разделяют по их молекулярной массе, как в одномерном ДСН-ПААГ. Исходный гель пропитывают додецил-сульфатом натрия и, поместив его на блок ДСН-ПААГ-геля, проводят электрофорез, в ходе которого каждая из полипептидных цепей мигри- [c.217]

Важное достоинство ГФ-секвенатора заключается в том, что с его помощью можно проводить анализ малых количеств белка, нанесенного в присутствии ДСН. Высокая разрешаюндая способность ДСН—ПААГ-электрофореза делает этот метод мощным средством выделения в чистом виде труднодоступных белков из сложных смесей, обогащенных многими белками. В данном разделе описаны в деталях оригинальные методики, используемые для анализа последовательности белков, присутствующих в ДСН-гелях лишь в пикомольных количествах. [c.471]

Рис. 10-2. Сравнение двумерных электрофореграмм, различающихся первым этапом разделения. Суммарный лизат клеток линии 70Z/3 (пре-В-клеточная лимфома), меченный -метионином, анализировали, используя для разделения в первом направлении ИЭФ (слева) и НЭГрН (справа). Разделение во втором направлении проводили с помощью электрофореза в 10%-ном ДСН-ПААГ (разделение белков по размеру).

В середине 60-х годов был разработан модифицированный метод электрофореза - электрофорез в полиакриламидном геле в присутствии додецилсульфата натрия (ДСН-ПААГ). Этот метод был существенным щагом вперед по сравнению с обычными методами анализа белков, известными к тому времени. При использовании данного метода белки мигрируют в инертном матриксе - полиакриламидном геле с высоким содержанием поперечных сщивок. Обычно гель готовят полимеризацией мономеров непосредственно перед использованием. Размеры пор геля могут быть подобраны произвольно с тем, чтобы гель мог замедлить миграцию определенных молекул. При этом белки находятся в растворе, содержащем мощный, отрицательно заряженный детергент - додецнл-сульфат натрия или ДСН (8В8) (рис. 4-48). [c.215]

С помощью комплексов серебра удалось обнаружить пептиды в ДСН — ПААГ, получеппые из нанограммовых количеств белка [222]. В работе сделан вывод, что метод более быстр, дешев и безопасен, чем радиоактивное мечение и приготовление авторадиограмм или флуореграмм. Были использованы коммерческие наборы реагентов фирмы Upjohn Diagnosti s для гелей толщиной 1,5 мм [324] и рекомендован для окрашивания более тонких гелей по методике, описанной в работе [408] (набор фирмы Bio-Rad). [c.303]

В этой главе рассмотрены наиболее важные конструкционные особенности ГФ-секвенатора, особенности методик, с успехом применяющихся для анализа структуры на микроуровне (<100 пмоль) пептидов, элюированных из ДСН-полиакрил-амидных гелей (ДСН—ПААГ). [c.465]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология