Электрофореграмма

Нингидрин, 0,5%-ный раствор в ацетоне. Для окрашивания электрофореграмм применяют смесь из 95 частей этого раствора и 5 частей дистиллированной воды. [c.150]

Проявив электрофореграмму, по окраске пятен судят [c.126]

Белковые смеси анализируют электрофорезом на бумаге. Хроматографическую бумагу пропитывают буферным раствором, поддерживая тем самым необходимое значение pH. Наносят анализируемую смесь и создают электрическое напряжение. По истечении определенного времени (оно зависит от свойств разделяемых белков, носителя и приложенной разности потенциалов) проявляют электрофореграммы химическими и биохимическими методами. [c.216]

Электрофорез применяют для очистки различных фармацевтических препаратов. В Фармакопее СССР (изд. 10) предусмотрено установление степени чистоты по электрофоретической однородности ряда антибиотиков, витаминов и других веществ. Электрофорез (ионофорез) является одним из методов введения лечебных препаратов в организм человека. Широкое применение как аналитический и препаративный метод разделения и выделения различных лекарственных веществ и биологически активных соединений нашел электрофорез на бумаге, а также в агаровом или крахмальном геле. Эти методы применяют также при диагностике ряда заболеваний путем сравнения фракционного состава (по числу и интенсивности зон на электрофореграмме) нормальных и патологических биологических жидкостей. [c.408]

Так как различные аминокислоты в данном буферном растворе могут обладать разным по величине и знаку зарядом, то скорость и направление их перемещения в электрическом поле также будут отличаться. Благодаря этому смесь аминокислот можно разделить на отдельные компоненты. Число компонентов и их соотношение в смеси определяют после специальной обработки бумажных полосок, на которых проводится разделение (электрофореграмм). В результате обработки на электрофореграмме появляются окрашенные полосы, каждая из которых соответствует определенному компоненту. [c.148]

Определение соотношения количеств аминокислот основано на измерении оптической плотности растворов медного производного, полученных при обработке отдельных участков электрофореграмм спиртовым раствором сульфата меди. Измерения следует проводить в достаточно разбавленных растворах, чтобы соблюдалась линейная зависимость между содержанием аминокислоты и оптической плотностью раствора. Оптимальные для колориметрических определений концентрации аминокислоты находятся в пределах 0,05— [c.149]

Белки, обработанные концентрированным раствором додецилсуль-фата натрия в присутствии р-меркаптоэтанола, распадаются на отдельные полипептидные цепи и приобретают отрицательный заряд, значительно превышающий собственный заряд белковой молекулы. При последующем разделении с помощью диск-электрофореза в полиакриламидном геле белковые зоны распределяются на электрофореграммах таким образом, что подвижность белковой зоны обратно пропорциональна логарифму молекулярной массы. Метод дает возможность определять молекулярные массы субъединиц олигомерных белков. Электрофоретическое разделение можно проводить различными методами. Ниже описаны два из них метод Вебера и Осборн, а также метод, предложенный Лэммли. [c.119]

Рис. 84. Электрофореграмма плазмы крови а—в но ме б — прн нефрите

Растворы для окраски электрофореграмм [c.90]

Абсцисса каждого пика дает значение VI, характерное для данного компонента и позволяющее провести идентификацию площадь под пиком пропорциональна С1. Таким образом, электрофореграммы позволяют осуществить не только качественный, но и количественный анализ в сравнительно мягких условиях, поскольку в слабом электрическом поле, в отличие от условий других методов анализа (например, химических), не происходит денатурации белков. [c.215]

Растворы для отмывания электрофореграмм от несвязавшейся с белком краски и закрепления красителя на белке [c.90]

Участки хроматограммы или электрофореграммы, поглощающие в ультрафиолетовой области спектра, вырезают, измельчают и элюируют 0,01 н. раствором НС1 в течение 4 ч. В элюате определяют оптическую плотность при 260 нм. Для учета содержания примесей, имеющих поглощение в той же области спектра, определяют оптическую плотность при 290 нм и по разности (Лги—> 290) рассчитывают содержание адениловых нуклеотидов (с. 499). [c.187]

Электрофореграммы плазмы крови в. норме у всех людей дают почти одну и ту же картину (рнс. 84, а). Для патологии характерна совершенно иная и специфическая для каждого заболевания картина (рис. 84,6). Следовательно, электрофореграммы могут быть успешно использованы как для диагноза, так и для контроля за ходом болезни и нормализацией белкового состава крови. Метод широко используют также для разделения аминокислот, антибиотиков, ферментов, антител и других объектов. [c.215]

Использование сложных оптических схем с разверткой позволяет получить на выходе э л е кт р о ф о р е г р а м м у — кривую с отдельными пиками. Абсцисса каждого пика дает значение характерное для данного компонента и позволяющее провести идентификацию площадь под пиком пропорциональна с,-. Таким образом, методом электрофореграмм можно вести не только качественный, но и количественный анализ в сравнительно мягких условиях, поскольку в слабом электрическом поле, в отличие от условий других методов анализа (например, химических), не происходит денатурации белков. [c.199]

Рис 9 Электрофореграмма сыворотки крови человека (А) и кривая распределения белковых фракций на электрофореграмме (Б) [c.92]

Рис. ХП.15. Электрофореграмма плазмы крови

Растворы для элюции окрашенных продуктов с электрофореграмм [c.90]

Для приготовления агаровых пластинок используют предметные стекла. Предварительно их обезжиривают, тщательно промывают водой и высушивают. Стекла нумеруют, укладывают на строго горизонтальную поверхность и на каждое осторожно наливают пипеткой с широким концом 4 мл агара. Пузырьки воздуха в агаре необходимо вывести пипеткой на края стекла. Когда агар застынет и образуется твердый гель, в нем посередине вырезают лунку (щель) для нанесения исследуемого раствора. Приготовленные пластинки укладывают в электрофоретическую камеру. Агаровое плато соединяют с буферным раствором бумажными мостиками из фильтровальной бумаги. В щель каждой пластинки вводят сыворотку крови, предварительно разведенную буферным раствором. На электрофореграмму наносят около 100—300 мкг белка в объеме 0,01 мл. Прибор подключают к источнику тока. Медленно повышая напряжение, доводят силу тока до 20—25 мА (напряжение 200—300 В). Электрофорез проводят в течение 3—4 ч. [c.93]

Обработка агаровых пластинок. После окончания электрофореза ток выключают, предметные стекла с агаровым гелем тотчас извлекают из камеры и помещают на 30 мин в 5%-ный раствор СНзСООН. Каждую пластинку покрывают листочком фильтровальной бумаги, смоченным в 5%-ном растворе СНзСООН, для удаления воды и солей и высушивают при комнатной температуре в течение ночи. Для ускорения высушивания его проводят при температуре 37 °С или под струей теплого воздуха. Бумагу, приставшую к агаровой пленке, осторожно снимают, предварительно смочив ее водой. Перед окрашиванием агаровое поле должно быть совершенно сухим и прозрачным. Окрашивание белков на электрофореграммах проводят амидовым черным 10 Б в течение ночи. Не связавшийся с белком краситель отмывают 5%-ным раствором уксусной кислоты. Отмытые электрофореграммы высушивают при 37 °С. [c.93]

Обработка электрофореграмм. Определяют расстояние, пройденное каждым белком от стартовой линии. Определение можно проводить визуально или с помощью денситометра при 550—600 нм. Строят калибровочный график, откладывая по оси абсцисс длину пути 1а, пройденного данным белком, а по оси ординат — логарифм его молекулярной массы. Определив длину пути, пройденного белком с неизвестной молекулярной массой 1х, пользуясь калибровочным графиком, определяют молекулярную массу исследуемого белка. При проведении электрофореза в трубочках часто трудно получить хорошо воспроизводимые результаты на разных трубках. В этом случае определяют не абсолютную, а относительную подвижность белков. Для этого определяют отношение длины пробега белковой зоны либо к общей длине геля, либо к длине пробега лидирующего красителя. После этого строят зависимость относительной подвижности белков от логарифма их молекулярной массы. [c.121]

Электрофорез и обработку электрофореграмм проводят, как описано на с. 120. [c.122]

В последнее время большое внимание уделяется специфическим белкам — иммуноглобулинам, которым придается важное практическое значение. Иммуноглобулины также должны быть отнесены к сложным белкам, так как в их состав входят от 2,9 до 12% углеводов. Иммунопротеиды обладают общими характерными сво11ствами так, при электрофорезе они распределяются главным образом в 7-глобулиновой и отчасти — в р-глобулиновой зонах (рис. 88) электрофореграммы белков сыворотки крови (см. стр. 218). Общими для них являются одинаковые принципы строения, ряд антигенных свойств, а также все они обладают активностью антител. [c.206]

Вырезают листы хроматографической бумаги размером 20X ХбО см 2°. Размер электрофореграммы зависит от конструкции прибора (рис. 20). [c.138]

На электрофореграммах и тонкослойных пластинках все ДНС-аминокислоты и ДНС—NHa видны в виде ярко-желтых пятен, ДНС — ОН — в виде ярко-голубого пятна. [c.150]

Обработку электрофореграмм см. выше. [c.174]

Рис. 16. Оптические плотности электрофореграмм УЩР и УЩР, модифицированного хроматами (денситометрические

Работа состоит из следующих операций подготовка прибора и проведение электрофореза, окрашивание электрофореграммы, экстрагированне и фотометрировапие. [c.150]

Электрофореграмму снимают на полоске хроматографической бумаги размером 40 х 270 мм. На ее середине обычным (графитным) карандангом отмечают полосу шириною 7 мм и с помощью капилляра смачивают эту полосу раствором гидролизата желатина. Затем полоску хроматографической бумаги помещают в прибор таким образом, чтобы ее концы были погружены в буферный раствор, находящийся во внутренних отделениях кювет, а середина полосы лежала на средней планке. Выжидают, пока полоска пропитается буферным раствором. [c.150]

Окрашивание электрофореграммы. После окончания электрофореза бумажную полоску извлекают из прибора и фильтровальной бумагой удаляют избыток влаги с концов полоски. Для окрашивания электрофореграммы погружают па несколько секунд в раствор нингидрипа, налитый в кювету (надеть резиновые перчатки]). Затем электрофореграмму подвешивают на стеклянной рамке и подсушивают на воздухе в течение нескольких минут, после чего для проявления окраски полосу прогревают (в темноте]) в сушильном шкафу или термостате при 60 °С в течение 15 мин. [c.151]

Экстрагирование и фотометрирование. По электрофореграмме измеряют расстояния, пройденные за время опыта компонентами смеси, и устанавливают число компонентов и знак заряда каждого компонента. Вырезают участки электрофореграммы с синими полосами аминокислот, а также два контрольных участка без аминокислот. Площадь контрольных участков долл<на быть равна площади синей полосы, соответствующей нейтральным компонентам смеси, пе перемещающимся при электрофорезе. Вырезанные участки разрезают ножницами на мелкие кусочки и помещают в отдельные пробирки. В каждую пробирку добавляют по 10мл 0,005%-ного спиртового раствора сульфата меди, нри этом синяя окраска переходит в оранжево-красную. Пробирки оставляют на 1 ч при комнатной температуре в темноте (в шкафу), время от времени взбалтывая. Затем опытные пробы фотометрируют, сравнивая их с контрольными, и приборе ФЭКН-57 с зеленым фильтром в кюветах толщиной 1 см. Определение оптической плотности осуществляется, как это описано п работе 4. По найденному значению оптической плотности каждого компонента определяют их соотношение в смеси аминокислот. Так, если />1, Оз — оптическая плотность соответственно первого, второго и третьего компонента, то содержание первого компонента (в %) находят но формуле [c.151]

После разделения смеси белков, нанесенной иа бумагу, фореграмму фиксируют и окрашивают красителем, выявляющим белки, например амидочерным или бромфено-лом. Характер расположения и интенсивность полос на электрофореграмме определяются качественным составом белков и пх соотношением в смеси. [c.219]

Длины фрагментов определяют с помощью высокоразрешающего электрофореза в тонком слое пшиакриламидного геля. Электрофорез проводится при повышенной температуре в буферной систе.ме, содержащей 7 М мочевину, что способствует разрушению вторичной структуры фрагментов детекция зон фрагментов на электрофореграмме зависит от способа мечения его конца (если это [c.16]

Подготовка камеры. Отсеки для электродов наполняют буферным раствором до одинакового уровня (во избежание перетекания буфера), примерно по 800 мл в каждый отсек. Во внутренние части электродных отсеков погружают электроды. На листе хроматографической бумаги (18X45 см) (при использовании тонких сортов бумаги образцы лучше наносить на отдельные полоски шириной 4—5 см) на расстоянии 15 см от одного из его узких сторон простым мягким карандашом (графит препятствует растеканию жидкости) очерчивают места для нанесения проб. Они представляют собой прямоугольники (2X0,3 см), большие < тороны которых располагают перпендикулярно длине бумажной полосы. Расстояние между стартовыми зонами и краями электрофореграм-мы — 2 см. Электрофореграмму пропитывают буфером, в котором будет проходить электрофорез. Для этого ее протягивают через кювету с буферным раствором. Концы бумажных полос (6—8 см) не смачивают. От избытка буфера освобождаются, промокая полосы между дву-мя-тремя лисгами фильтровальной бумаги. Влажную электрофореграмму помещают в камеру на центральную горизонтальную пластинку (5), а концы опускают в наружные отделения электродных отсеков Прибор плотно закрывают крышкой, под которой находятся смоченные водой листы фильтровальной бумаги. [c.91]

Фиксация и окраска электрофореграмм. По окончании электрофореза выключают ток и тотчас вынимают электрофореграммы из прибора. Их располагают на специальной подставке и подсушивают на воздухе под тягой, затем — в сушильном шкафу при 105 °С в течение 20 мин для фиксации белков на бумаге, после чего помещают в эмалированную кювету, заливают красителем п оставляют на 2—3 ч и более. Краситель сливают и электрофореграммы отмывают от его избытка, заливая 3—4 раза 2%-ным раствором уксусной кислоты, каждый раз на 5—10 мин. Участки бумаги, не содержащие белка, должны быть полностью освобождены от красителя. Для закрепления окрашенных продуктов электрофореграммы на 2 мин заливают 2%-ным раствором уксуснокислого натрия и сушат на воздухе под гягой. [c.91]

Определение соотношения отдельных фракций белка. При pH 8,6 белки сыворотки крови заряжены отрицательно и перемещаются в электрическом поле к аноду. Быстрее всего к аноду движется фракция, альбуминов, затем идут ар, аг,-, р- и у-глобулины (рис. 9, Л). Участки бумажных лент, на которых проявились пятна белков, делят поперечными линиями простым карандашом на полоски шириной в 3—5 мм и разрезают по этим линиям. Каждую полоску измельчают и помещают в отдельную пронумерованную пробирку, заливают 3 мл 0,01 М раствора NaOH, оставляют на час для извлечения краски из бумаги, а затем находят для каждого раствора значение оптической плотности на ФЭКе при 612 нм. Параллельно обрабатывают контрольную пробу. Для нее вырезают полоску из неокрашенных участков электрофореграммы. [c.91]

На основании полученных данных строят кривую распределения окрашенных продуктов на электрофореграмме На оси абсцисс отмеча- [c.91]

Образцы наносят на бумагу капилляром или микропипеткой, все время подсушивая зону нанесения. После нанесения образцов бумагу, начиная с краев, увлажняют буферным раствором. При этом следят за тем, чтобы бумага увлажнялась равномерно, а фронты буферного раствора, пропитывающего бумагу слева и справа от линии старта, сошлись бы точно на линии старта. Избыток буфера удаляют фильтровальной бумагой. Избыточное увлажнение бумаги ухудшает разделение Бумагу помещают в специальный полиэтиленовый пакет и кладут на охлажденную плиту прибора для электрофореза. Контакты электрофореграммы с электродными отсеками обеспечиваются с помощью бумажных фитилей, смоченных в буферном растворе. Сверху на электрофореграмму нai/лaдывaют подушку из поролона, которая специальной крышкой прижимает бумагу к охлаждающей плите и обеспечивает эффективное отведение тепла, выделяющегося при электрофорезе. Прибор закрывают крышкой из пластмассы и подключают к источнику тока. Электрофорез проводят в течение 1,5—2,5 ч при на- [c.138]

При необходимости можно провести количественное определение некоторых аминокислот в исследуемом образце, например аланина и глицина, которые хорошо отделяются от других аминокислот. Для количественного определения аланина и глицина на электрофореграмму, помимо исследуемого образца, наносят разные количества этих амино-кислот- свидетелей (20—140 нмоль). После окончания электрофореза, прокрашивания и фиксации вырезают пятна соответствующих аминокислот и обрабатывают их так, как описано на с. 132. Колориметри-рование проводят при 500 нм и строят график зависимости оптической плотности от количества внесенной аминокислоты. Используя полученный график, определяют содержание глицина и аланина в исследуемом образце. [c.139]

На полоски хроматографической бумаги шириной 4—5 см на линию старта наносят ш,елочной гидро лизат РНК (10—20 мкл) и растворы нуклеотидов- свидетелей по 0,1—0,15 мкмоль каждого. Электрофорез проводят в течение 5 ч при силе тока 0,5 мА на 1 см поперечного сечения бумаги. Для определения времени окончания электрофоретического разделения можно использовать окрашенный маркер, например 1%-ный раствор ксиленцианола, который движется быстрее самого подвижного компонента смеси. Локализацию рибомононуклеотидов проводят в ультрахемископе. Подвижность нуклеотидов от катода к аноду возрастает в ряду цитидиловая, адениловая, гуаниловая и уридиловая кислоты. Для количественного определения участки электрофореграмм, поглощающие в ультрафиолетовой области, очерчивают простым карандашом, вырезают, измельчают и элюируют нуклеотиды 4—5 мл 0,01 н. раствора НС1 в течение 4—5 ч. В элюатах определяют поглощение на спектрофотометре при длине волны, характерной для каждого нуклеотида (см. Приложение, с. 499), рассчитывают количество их в микромолях и в процентах по отношению к сумме всех нуклеотидов в щелочном гидролизате РНК. [c.181]

Прн реакции хлоргидрата тиофенилового эфира аланина с коферментом А был получен хлоргидрат S-аланилкофермента А, который, выделяли с помощью электрофореза. Прн действии на это соединение глутаминовой кислоты в буферном растворе при pH 8 продуктом реакции, по данным электрофореграммы, была аланилглутамииовая кислота [358]. [c.267]

Курс коллоидной химии 1984 (1984) -- [ c.199 ]

Курс коллоидной химии 1995 (1995) -- [ c.218 ]

Курс коллоидной химии (1984) -- [ c.199 ]

Современная аналитическая химия (1977) -- [ c.466 ]

Методы органической химии Том 2 Издание 2 (1967) -- [ c.907 ]

Методы органической химии Том 2 Методы анализа Издание 4 (1963) -- [ c.907 ]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология