Ферритин антитело, конъюгат

Сэндвич-анализ по способу проведения аналогичен последовательному анализу. Образцы вносят в соответствующие пробирки и помещают в прибор. В зоне нанесения конъюгата производится обработка антителами против ферритина, меченными ферментом, а в зоне нанесения субстрата — субстратом. На рис. 20-9 показаны типичные калибровочные кривые для анализа образцов с содержанием ферритина до 600 нг/мл, а также влияние продолжительности периода инкубации на ход калибровочной кривой. Для получения таких данных перемещение фильтров в приборе осуществляли с интервалами 50, 60 и 70 с. Интервалам 50 с соответствуют инкубационный [c.311]

Другим параметром, который может влиять на чувствительность анализа, является концентрация конъюгированных с ферментом антител к ферритину. На рис. 20-10 показан эффект удвоения концентрации конъюгата на ход калибровочной кривой. Анализ проводили с интервалами передвижений, 60 с. Наиболее отчетливо влияние концентрации конъюгата проявляется в верхней области кривой. Увеличение концентрации конъюгата сопровождается некоторым ростом фона, что препятствует повышению чувствительности в области низких концентраций ферритина. Оптимальную концентрацию конъюгата подбирали таким образом, чтобы обеспечить максимальную чувствительность в области низких концентраций ферритина. [c.312]

Рис. 20-10. Калибровочные кривые для определения ферритина при использовании двух концентраций, конъюгата [антитело—фермент].

Так же как в колориметрическом иммуноанализе на основе ингибирования, антиген метили ферментом. К каждой молекуле ферритина присоединялись три молекулы -галактозидазы. Активность конъюгата по расщеплению высокомолекулярного флуорогенного субстрата подавлялась при инкубации с анти-ферритином — антителами козы против ферритина (рис. 8-9). При насыщающих концентрациях антител ингибирование достигало 50%. Добавление вместе с субстратом избытка антител против IgG козы сильно увеличивало ингибирование ненасыщающими концентрациями антиферритина (рис. 8-9). Однако [c.110]

ИФА, основанный на эффекте ингибирования субстратом фер-мента-метки. В качестве метки антигена используют пероксидазу хрена. Принцип метода основан на значительном отличии ферментативной активности исходного конъюгата и конъюгата в комплексе со специфическими антителами при детекции метки в присутствии 35 мМ перекиси водорода, которая является субстратом пероксидазы. Пероксидаза нативная и в конъюгате с антигеном в значительной степени ингибируется уже при концентрации перекиси 10 мМ, но сохраняет активность в конъюгате при связывании с соответствующими антителами. Новый подход апробирован на примере а-фетопротеина, ферритина, рг-микроглобулииа, дигоксина, иммуноглобулина Е. При длительности 20—30 мин метод позволяет определять до 10 нг/мл а-фетопротеина, что сопоставимо с чувствительностью гетерогенного ИФА. [c.118]

Вещества, меченные биотином, могут быть обнаружены с помощью любого из используемых конъюгатов или комплексов авидина с тем или иным индикаторным реагентом типа авидин — флуоресцеин, авидин — ферритин или АБК- Таким образом, после того как вещество помечено биотином, для его обнаружения можно приспособить любую систему анализа. В то же время при использовании антител, меченных флуоресцеином или пероксидазой, круг их применения ограничен, т. е. авидин-биотиновая система характеризуется гораздо большей гибкостью, чем дру- [c.419]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология