Влияние концентрации конъюгата

Влияние концентрации конъюгата [c.153]

Другим параметром, который может влиять на чувствительность анализа, является концентрация конъюгированных с ферментом антител к ферритину. На рис. 20-10 показан эффект удвоения концентрации конъюгата на ход калибровочной кривой. Анализ проводили с интервалами передвижений, 60 с. Наиболее отчетливо влияние концентрации конъюгата проявляется в верхней области кривой. Увеличение концентрации конъюгата сопровождается некоторым ростом фона, что препятствует повышению чувствительности в области низких концентраций ферритина. Оптимальную концентрацию конъюгата подбирали таким образом, чтобы обеспечить максимальную чувствительность в области низких концентраций ферритина. [c.312]

Высота, на которую поднимаются при данной концентрации антиген и конъюгат, зависит от поверхностной плотности иммобилизованных антител, а также от соотношения скоростей связывания и капиллярной миграции антигена. Мы изучили влияние концентрации иммобилизованных антител на положение фронта при различных концентрациях теофиллина (рис. 10-16). Для любой заданной концентрации иммобилизованных антител путь, проходимый фронтом, монотонно и нелинейно возрастает [c.152]

Рис. 10-17. Влияние соотношения гаптен/фермент и концентрации конъюгата на аналитический сигнал. А. Для анализов использовали по 20 мкл калибровочных образцов сыворотки, содержащих теофиллин. Ферментный реагент содержал конъюгат теофиллина с пероксидазой хрена 0,1 (кружки), 0,2 (треугольники) или 0,4 (квадраты) мкг/мл (5,4 молекул гаптена на молекулу фермента). Анализы выполняли, как описано в разделе Материалы и методы . Б. То же самое, что А, но ферментный реагент содержал конъюгаты (0,2 мкг/мл) разного состава 5,9 (кружки), 8,0 (ромбы), 11,8 (треугольники) или 14,0 (квадраты) молекул гаптена на молекулу фермента. Публикуется с разрешения издательства (Zuk et al., 1985).

Сшивание трипсина с альбумином человека и свойства конъюгатов как потенциальных тромболитических агентов изучены в работах [137,138]. Сохранение ферментативной активности зависело от условий реакции, причем активность снижалась с увеличением концентрации сшивающего агента, pH и продолжительности реакции, т. е. при многоточечных сшивках и образовании массивных конгломератов (М 2 млн.). Блокирование свободных альдегидных групп приостанавливало снижение активности. Оптимум pH конъюгатов оказался не смещенным, а взаимодействие с соевым ингибитором снижено в результате влияния одноименно с ним заряженной альбуминовой части конъюгата. Активность по казеину была лишь 17 % для невосстановленного конъюгата и 84 % для восстановленного борогидридом. Повышение физиологической активности белка при снижении концентрации сшивающего агента (глутарового альдегида) наблюдалось и в других случаях. [c.200]

Концентрацию конъюгата определяли с помощью люциферазы бактерий. Однако использование этого метода для установления Эз-16а-Г в моче встретило ряд ограничений, связанных, прежде всего, с влиянием других компЪнентов мочи на биолюминесцентную систему. Включение в схему анализа стадии взаимодействия с иммобилизованными антителами с последующей отмывкой комплекса антиген — антитело от несвязавшихся компонентов образца и введение агентов, расщепляющих комплекс антиген — антитело для перевода восстановленного кофактора в раствор, существенно улучшили чувствительность метода. [c.128]

На рис. 3-11 показано влияние концентрации антител на аналитический сигнал при определении канамицина с помощью конъюгата [канамицин — фермент] и антител против тобрамицина. Поскольку кривые, соответствующие разным концентрациям лекарственного препарата, имеют неодинаковую форму, приходится выбирать компромиссную чувствительность, приемлемую как для низких, так и для высоких концентраций канамицина. Оптимальная дозировка для этой методики составляет 6 мкл раствора антител на образец. [c.50]

Рис. 3-11. Влияние концентрации антител против канамицина на аналитический сигнал. Зависи- мость сигнала от титра антител изучали при концентрации кана мицина 2,5 мкг/мл (светлые кружки), 5 мкг/мл (светлые квадраты), 20 мкг/мл (темные треугольники) и 35 мкг/мл (темные квадраты). Использовали конъюгат [канамицин — фермент] и антисыворотку против тобрамицина.

Влияние размера конъюгата. Сигмоидный характер кривой титрования в ее верхней области, т. е. в области относительно высокой загрузки первичными антителами, позволяет предположить, что а) в области более высокой концентрации антител пространственные затруднения для работы системы детектирования возрастают или б) связывание конъюгатов с различным молярным соотношением фермент антитело или с ферментативной активностью, отличной от активности конъюгатов, преимущественно связывающихся в области низкой концентрации антител, происходит избирательно. Второе из названных предположений кажется маловероятным ввиду однородности состава ИФК, используемого в a-ELISA (см. рис. 14-2), Поэтому мы исследовали влияние на форму кривой титрования конъюгатов различного состава с разной способностью вызывать пространственные затруднения при связывании. Для этого использовали системы, схематически показанные на рис. 14-1. Размер частиц конъюгата определяли ультрацентрифугированием в сахарозном градиенте аналогично тому, как это делали при получении данных на рис. 14-2. Было установлено, что конъюгаты, полученные с помощью глутарового альдегида, представляют собой крупные агрегаты, в то время как конъюгаты на основе Fab однородны по размеру и имеют мол. массу [c.229]

Влияние стадии инкубации образца с антителами было изучено на примере нетилмицина. Калибровочная кривая для парной системы, содержащей конъюгат нетилмицина с ферментом и антитела против нетилмицина, поднимается круче при больших концентрациях лекарственного вещества, если методика включает инкубацию в течение 30 с. В то же время сигнал уменьшается и приобретает линейный характер при добавлении к антителам лекарственного вещества в концентрации 1 мкг/мл. Эти явления отражены на рис. 3-7. Таким образом, добавление лекарственного вещества к антителам может служить экспериментальным способом изменения формы кривой. Результаты ЕМТТ -анализа выражают в единицах концентрации путем сопоставления реакции исследуемого образца с калибровочной [c.45]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология